Mientras exploramos la expresin de P.

falciparum MSP1-19 en
Chlamydomonas, tambin ampliamos nuestro sistema para la produccin de
otros antgenos de la vacuna de la malaria.

Los dominios AMA1 y MSP1 C-terminales derivados de P. berghei, designados

GBSS-PbAMA1-C y GBSS-PbMSP1-19 (Figura 2), se investigaron ya que el
parsito de la malaria murina se utiliza con frecuencia para la formulacin y
pruebas de vacuna animal.

Los grnulos de almidn Fuertemente Positivos Que Contiene P. falciparum

GBSS-PfMSP1-19 s detectaron en algas transgnicas.

Los transformantes GBSS-Chlamydomonas expresan los

antgenos-gbss parsito almidn asociado en los cloroplastos
de algas transgnicas.

Las partculas de oro se observaron sobre la propia

estructura pirenoide.

La seal de inmunomarcaje sobre el pirenoide no se detect

en los controles no transformados (F2a), lo que sugiere la
presencia de pequeos fragmentos de grnulos de almidn
transgnicas que rodean el pirenoide.

Para investigar si los

niveles de antgenos
de almidn parsito
transgnicos
obtenidos eran
suficientes para
provocar respuestas
inmunitarias
protectoras,

Se prob los ratones

inmunizados con el
almidn purificado
que contiene GBSSPbAMA1-C, o GBSSPbMSP1-19.

Despus de la
inmunizacin, los
ratones fueron
expuestos a dosis
letales (104 glbulos
rojos infectados) de
la cepa altamente
virulent P. berghei
ANKA, mostrando
un retraso
significativo y
reproducible de la
mortalidad en los
ratones estimulados.

 Cuando los animales fueron inmunizados con tres dosis de almidn

que contienen GBSS-PbAMA1-C antes del desafo con P. berghei, un
mayor retraso en la mortalidad se observ (Figura 3a)

Se demostr que los sueros de ratones inmunizados contiene (IgG)

especficos generados contra el nativo de P. berghei AMA1 (PbAMA1)
mediante anlisis Western blot

Se confirm que los glbulos rojos infectados restantes no eran

parsitos viables porque no fueron capaces de desarrollar los
sntomas de la enfermedad y intra-eritroctica.

Los humanos son el

husped natural
para P. falciparum.
Escasez de modelos
animales para las
infecciones con
esta especie de
Plasmodium.

PfMSP1 es una
vacuna anti-sangre
etapa mmalaria
candidato lder que
se somete a
procesamiento
proteoltico durante
la maduracin
merozoite
resultando en
cuatro grandes
fragmentos.

Los anticuerpos que

son especficos para
MSP1-19 en
individuos
expuestos,
naturalmente,
tienen potentes
actividades
inhibidoras contra
el crecimiento de P.
falciparum in vitro

Conclusions

Diseo de un alto nivel de GBSS ligada con almidn fusionado con tres candidatos a
vacuna de la malaria distintas.

Estudios de vacunas en animales sugieren que los niveles de antgenos de almidn

transgnicos que se acumulan en el cloroplasto son suficientes para conferir una
proteccin sustancial contra letal P. berghei en ratones.
La actividad funcional de los anticuerpos producidos a P. falciparum fue
demostrada por la inhibicin de crecimiento del parsito in vitro y que atribuye
este al bloqueo de la invasin de los eritrocitos.
C. reinhardtii proporciona un sistema de expresin ideal para la produccin de
antgenos recombinantes asociados con la matriz de almidn.

Metabolismo del almidn se ha demostrado que es idnticos en C. reinhardtii a la

encontrada en las plantas vasculares.

Algas verdes unicelulares GRAS (generalmente considerado como seguro), hacen C.

reinhardtii sea una alternativa especialmente atractiva para la expresin de los
antgenos recombinantes.
El almidn es fcil de purificar y representa un entorno protector para las
protenas unidas GBSS porque se sabe que es excepcionalmente estable sin prdida
detectable de la actividad incluso despus de aos de almacenamiento.