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IONIZACIN MALDI

(MATRIX ASSISTED LASER


DESORPTION IONIZATION)

Juan David Reyes Fernndez

CONTENIDO
Introduccin

Contexto

histrico de la tcnica
Descripcin del proceso
Cromatografa-MALDI
Aplicaciones a protemica
Aplicaciones a polmeros
Bibliografa

INTRODUCCIN
La

ionizacin MALDI:

Ionizacin suave.
Anlisis de biomolculas (DNA, protenas,
pptidos, oligosacridos).
Polmeros, dendrmeros u otras macromolculas.

CONTEXTO HISTRICO DE LA TCNICA


La

ionizacin MALDI:

Premio Nobel en Qumica 2002: John B. Fenn y


Koichi Tanaka, asociado a SLD (Soft Laser
Desorption) y a ESI (Electrospray Ionization).

SLD->MALDI, SELDI (Surface Enhanced

Laser Desorption Ionisation) and DIOS


(Direct Ionisation on Silicon).

DESCRIPCIN DEL PROCESO

DESCRIPCIN DEL PROCESO

Fuente: http://biopedia.org/index.php/MALDI-TOF-MS

DESCRIPCIN DEL PROCESO


Preparacin de la muestra
Excitacin de la muestra
Desintegracin de la fase
condensada
Generacin de iones a partir de
las molculas de analito.

Fuente: The Maiman Institute for Proteome Research, The George S. Wise Faculty of
Life Sciences, Tel Aviv University, Israel

DESCRIPCIN DEL PROCESO

Laser

Depende del tipo del medio activo


Ablacin o Eyeccin por laser:
Desintegracin de la fase condensada.
Transferencia a la fase gaseosa por
procesos de naturaleza no trmica.
Estrs fotomecnico.
Ruptura directa de enlaces qumicos
por absorcin de fotones de alta
energa.

Fuente: http://www.magnet.fsu.edu/education/tutorials/tools/ionization_maldi.html

DESCRIPCIN DEL PROCESO

Laser

UV-Cercano:
N2, 337nm.
Nd:YAG (Granete de itrio y aluminio dopado con neodimio),
355nm.
Pulsos 0,5 a 10ns.
Previene descomposicin a compuestos lbiles por UV-lejano.
Evita la formacin de aductos Matriz-Analito.

DESCRIPCIN DEL PROCESO

Laser

IR:
Absorcin. Modos vibracionales.
Frecuencias tpicas ~3m.
Er:YAG (Granete de itrio y aluminio dopado con Erbio), 2,94m.
Estiramiento enlace O-H, N-H.
Laser CO2 pulsado, 10m.
Estiramiento enlace C-H, flexin enlace O-H.

DESCRIPCIN DEL PROCESO

Laser

DESCRIPCIN DEL PROCESO

Matriz

Aislamiento molculas analito para evitar agregacin.


Absorcin de energa via:
Electrnica, UV-MALDI.
Vibracional, IR-MALDI.

Desintegracin de la fase condensada.


Ionizacin efectiva de las molculas de analito, habilidad
de transferir protones a los analitos.

DESCRIPCIN DEL PROCESO

Mecanismo de ionizacin

Reaccin cido-base entre las molculas desorbidas de


matriz y analito.
Las molculas de la matriz son ionizadas por una serie
de reacciones fotoqumicas.
+ +

CROMATOGRAFA-MALDI

Liquid Droplet Deposition

CROMATOGRAFA-MALDI

Liquid Droplet Deposition

CROMATOGRAFA-MALDI

Heated Droplet Deposition

CROMATOGRAFA-MALDI

Heated Droplet Deposition

CROMATOGRAFA-MALDI

Electrospray deposition

CROMATOGRAFA-MALDI

Nano LC-MALDI

APLICACIONES A PROTEMICA

APLICACIONES A PROTEMICA

Anlisis de secuencia primaria de protenas:


Mapeo de masas por digestin con endoproteasas y
reconstruccin con bases de datos.
Informacin de la fragmentacin en la regin libre del
analizador TOF.
MALDI MSn con un analizador FTMS.

APLICACIONES A PROTEMICA

Elucidacin de la estructura de las protenas:

Definicin de conformacin por protelisis y MALDI-MS.


Comparacin con desnaturalizacin.

APLICACIONES A PROTEMICA
MSIA (Mass Spectrometric
immunoassay)

APLICACIONES A POLMEROS