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Fertilizacin in vitro

es uno de los mtodos ms utilizados entre las

tcnicas de reproduccin asistida y una de las mejores


opciones para el tratamiento de la infertilidad o de
problemas de abortos frecuentes y sistemticos.

Tcnicas de extraccin del


semen
Varios mtodos han sido ideados
para la recoleccin de semen en
los animales domsticos, pero
la mayora de ellos han sido
rechazados a favor del uso de la
vagina artificial.

Recoleccin vaginal
Consiste en la extraccin del semen desde el interior

de la vagina luego de un servicio natural y utilizando


como ayuda esptulas, cucharas, jeringas, pipetas, etc.
Es til slo como mtodo para evaluar una muestra de
semen, pero de ninguna manera sirve en el
procesamiento del semen a gran escala para la
inseminacin artificial.

Colectores peneanos o vaginales


Los colectores son una especie de guantes o condones

de distintos materiales, que no han dado resultado en


la recoleccin de semen bovino, aunque s ha sido de
relativa utilidad en algunas yeguas.

Mtodo de la esponja
Mediante esta tcnica se colocaban esponjas en el

fondo de la vagina y posteriormente a la cpula se


retiraban y compriman para exprimir el semen
absorbido.

Manipulacin mecnica
Otro mtodo de coleccin de semen en

los animales es por masaje rectal.

Mtodo de la electro eyaculacin


Esta tcnica permite extraer semen a los animales sin

previo acostumbramiento.
Est basada en la aplicacin rtmica de un estmulo
elctrico por va transrrectal estimulando el sistema
nervioso autnomo y somtico, que conduce a la
obtencin de secreciones de las glndulas accesorias y
finalmente a la eyaculacin.

metodologa
Para la extraccin de semen por electro eyaculador se

recomienda tener una manga de 76 cm de ancho que


puede albergar a la mayora de los animales grandes.
Se debe colocar detrs del individuo un poste fuerte a
una altura ideal entre 71 y 76 cm y otro a 30 cm del
suelo como corrector durante el procedimiento, dado
que es posible que los animales pierdan el equilibrio.

Mtodo de la vagina artificial


ste es un mtodo universalmente utilizado en la

mayora de las especies animales domsticas, aunque


en el ganado bovino no es de rutina en la mayor parte
de los establecimientos ganaderos sino que es casi
exclusivo de los centros de inseminacin artificial,
ocurriendo lo mismo en los haras equinos.

Tipos de vagina artificial


+ La primera fue construida en Rusia, hacia fines de 1931,
y consista en un cilndrico de caucho de 60 cm de largo
por 5,5 cm de dimetro.
+ Modelo dans

Tubo recolector de vidrio


En este modelo el tubo colector se encuentra expuesto

a temperatura ambiente y a la incidencia de los rayos


solares, por lo que debe ser cubierto con alguna
proteccin trmica, como goma espuma. Mide
aproximadamente 40 cm de largo y 5,7 cm de
dimetro.
Modelo de cornell
Modelo italiano

Preparacin de la vagina (modelo


dans)
El lavado de las camisas y conos de ltex debe hacerse

con agua caliente y detergente neutro, enjuagadas


luego con el mismo agua caliente de la canilla,
posteriormente con alcohol etlico 70 y finalmente
con agua destilada. Se dejan secar y se guardan es
estuches cerrados a los que no pueda ingresar polvo ni
suciedad. El cilindro es lavado de la misma manera y
esterilizado con autoclave o en su defecto por
ebullicin.

Tcnicas de extraccin
Como ya se mencion anteriormente, el mtodo de la

vagina artificial tiene como principal desventaja de


requerir el uso de animales dciles y entrenados,
junto con un scubo adecuado.

En que consiste?
Mejor conocida por sus siglas en ingles, OPU (Ovum

Pick-up), la aspiracin folicular


transvaginal es una tcnica mediante la cual los
ovocitos inmaduros son recolectados
de los folculos en los ovarios de una vaca viva por
aspiracin guiada
mediante ultrasonografa a travs de la pared vaginal.

MATERIALES
Equipo de ultrasonografia.
Bomba de aspiracin.
Sistema de gua de la aguja.

PROCEDIMIENTO
Aplicar anestesia con el fin de prevenir las contracciones

abdominales y facilitar la manipulacin de los ovarios. con


anestesia epidural con lidocaina al 2% (3-5
ml/vaca)

Posteriormente se vaca el recto y se limpia la regin

perineal .
Una vez realizada la higiene, se procede a introducir el
transductor que tiene acoplado
el sistema de gua de la aguja.

Luego se introduce la mano izquierda por el

recto y se fija el ovario contra la cabeza del transductor, lo que


permite visualizarlo
en la pantalla del equipo del ultrasonografa al igual que a
los folculos y la aguja

Una vez ubicado

el folculo a aspirar, se impulsa la aguja suavemente para que penetre la


pared
vaginal y luego la folicular; una vez logrado esto la bomba de vaco aspira
el contenido y se deposita en el recipiente destinado.

Factores externos a evaluar


*Temperatura: 35 y 37 C / < 30 C causan
perdida.
*Almacenamiento.
*Tiempo de recoleccin.

Recoleccion de ovocoitos
Corte de ovarios

Recoleccin de ovocitos
Jeringa de folculos superficiales

Instrumentos para el proceso


*Jeringa de 5 a 10 ml
*Aguja hipodrmica calibre 18
*caja de petri

Espermatobioscopia Directa (Estudio


macroscpico)
Muestra seminal

Camara de Makler

Frascos de

Camara de

recoleccin
Neubauer
Pipeta desechable Cubreobjetos
Pipetor
Portaobjetos
Guantes estriles Alcohol
Gorro quirrgico
Cubre bocas
Microscopio

Identificacin de ovocitos de
bovinos
Ovarios de vaca

Pipeta de transferencia

(conseguir en el rastro) Estereoscopio y


Un litro de agua
Microscopio
inyectable
Incubadora de CO2
Guantes de ltex
Medio de cultivo HTF
Caja Petri y charolas de
diseccin
Jeringas de 3 ml con
aguja

Vitrificacin de vulos y pre-embriones


Agua inyectable.
- Gentamicina.
- Micropipeta de 10 a

100ul.
- Pipetas Pasteur.
- Guantes de latex.
- Medio HTF
- Incubadora.
- Caja de petri de doble

camara.
- Estereoscopio
- Reactivos de
Vitrificacion
WS1,WS2,ES,VS,TS y DS.
- Crio-tops.

Camara de Makler
en esta tcnica la fertilizacin del vulo por el espermatozoide
se produce en un medio artificial como es el laboratorio, pero el
proceso de fertilizacin es totalmente natural ya que se coloca
un promedio de 200.000 espermatozoides alrededor del vulo,
el que ser penetrado naturalmente por uno de ellos y as se
formarn los embriones que sern transferidos a la cavidad
uterina por medio de diferentes tipos de catteres mediante un
procedimiento sencillo e incruento. Cuando la muestra
espermtica es muy pobre y se sospecha que es poco posible que
los espermatozoides puedan fertilizar solos, se utiliza la tcnica
de ICSI (inyeccin espermtica intracitoplasmtica) en donde se
inyecta un espermatozoide en cada ovocito. Vale decir se
favorece el proceso de fertilizacin.

Pipetor es una herramienta de


laboratorio usado para
transportar un volumen medido
de lquido

Micro pipetas

Caja de petri sobre la incubadora que


permite mantener al ovulo y al esperma
vivos .