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BIOQUIMICA

Estudio de la velocidad de una reaccin


enzimtica
CINETICA:
Estudio de la velocidad de cambio de sustratos a productos

VELOCIDAD:
Cambio en la concentracin de sustrato o producto por unidad de tiempo

TASA:
Cambio en la cantidad de sustrato o producto por unidad de tiempo
V=-d[S]/dt = d[P]/dT

Sustrato

Complejo
Enzima-Sustrato

Producto

Curva de progreso de una reaccin enzimtica

S4>S3>S2>S1

Orden 1

Orden 0

Medida de la velocidad de una reaccin


enzimtica
V=-d[S]/dt = d[P]/dT
Midiendo la desaparicin del sustrato o la aparicin del
producto
En presencia de cantidades catalticas de enzima
(tpicamente: 10-8-10-12 M)

Se determina la velocidad inicial de reaccin ([S] es


prcticamente constante)

Expresin de la velocidad de una reaccin


enzimtica
ACTIVIDAD CATALITICA:
Unidad Estndar de Actividad Enzimtica (IU):
Cantidad de enzima que cataliza la formacin de 1 mmol de
producto por minuto en condiciones determinadas (37C, [S]
saturante)
Katal:.-Cantidad de enzima que cataliza la formacin de 1 Mol
de producto por segundo en condiciones determinadas (37C,
[S] saturante)
CONCENTRACION:.-Unidades de actividad enzimtica por
unidad de volumen (U/mL)

PUREZA:.
Actividad especfica:
Unidades de actividad enzimtica por mg de protena total

Expresin matemtica de la cintica enzimtica


k1

E +S

ES

k3

k2

Vmax= k3 [ES]
Km= k2+k3
k1

V=

E+P

Vmax x [S]
Km + [S]

El complejo ES est en estado estacionario

Todo el enzima est en forma ES


La velocidad de formacin de P es mxima

El modelo de Michaelis-Menten
Curva hiperblica
Cintica de saturacin
Cintica de Michaelis-Menten
Vmax [S]
Km + [S]

[S] = KM V = Vmax/2

[S] >> KM V = Vmax

V= Vmax [S]
Km + [S]

El estado estacionario en la cintica enzimtica


Modelo del estado estacionario
(Supuestos de aplicacin)

La concentracin de ES es
constante:
V formacin = V destruccin
Cuando [S] es saturante,
todo el enzima est en
forma ES:
[ET] [ES]
Al inicio de la reaccin, el
paso ESE + P es
irreversible

Significado de Km (Constante de MichaelisMenten):


Concentracin de sustrato para la que se alcanza la velocidad igual a
la mitad de la mxima (Vmax)
Indica la afinidad de un enzima por un sustrato determinado
Permite comparar la afinidad de un enzima por distintos sustratos y la
afinidad de varios enzimas por el mismo sustrato
Se puede determinar con facilidad en el laboratorio
La velocidad de reaccin es muy sensible a cambios en [S] en la
zona de Km

Significado de Kcat ( K3, Nmero de recambio):


Nmero de moles de sustrato transformado por unidad de tiempo

Su inversa define el tiempo requerido por el enzima para transformar


una molcula de sustrato

Linealizacin de la ecuacin de MichaelisMenten

Representacin de
Lineweaver-Burk
(1/V frente a 1/[S]

Representacin de
Eadie-Hoffstee
(V/[S] frente a V)