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Introduccin
Los queratinocitos representan el 90% de las clulas de la epidermis
Un aspecto importante de la cicatrizacin de heridas es la
reepitelizacin
Despus de una herida en las inmediaciones ocurre proliferacin y
migracin de queratinocitos para una reepitelizacin efectiva
Los estudios realizados por este grupo de investigadores han
demostrado que heridas orales muestran una menor respuesta
inflamatoria e infiltracin de clulas, en comparacin con las
cutneas
Existen diferencias en la expresin citoquinas inflamatorias
La produccin de Factor de Crecimiento Endotelial Vascular (VEGF),
un mediador de la angiognesis dominante de la herida, es
significativamente menor en forma queratinocitos orales frente a
heridas de la piel, y la angiognesis en las heridas orales es menor
que en la piel
Introduccin
Han descrito previamente la expresin gnica en la piel y las
heridas de la mucosa a travs de todas las etapas de la cicatrizacin
de heridas
Utilizando la tecnologa de microarray, han mostrado que, aunque
los patrones de expresin son similares en ambos tejidos, durante
la curacin no son idnticas
Especficamente, el patrn de expresin genmica de la respuesta
de la lesin de la mucosa oral, suele ser ms rpido, ms corto en
duracin, y de menor intensidad que la respuesta de la piel
Una explicacin para esta diferencia es la variacin ambiental de
dos sitios, como la temperatura, el flujo de saliva, o microflora
Sin embargo, estudios han demostrado que la cavidad oral
mantiene sus caractersticas morfolgicas intrnsecas
Objetivo
Hasta la fecha, hay pocos informes que
describen las diferencias en la expresin gnica
en los queratinocitos de diferentes lugares
En el estudio actual:
Identificacin de las diferencias inherentes
clave entre los queratinocitos orales y de la
piel que median el cierre de heridas
Metodologa
Aprobado por la comisin de tica
Comisin de cuidado y empleo de animales de la
Universidad de Illinois
Consentimiento informado para donantes voluntarios
(adultos sanos 18-35 aos)
Muestras de piel sana de brazo y paladar duro
(2mmX10mm)
Metodologa
Preparacin de ARN total
ARN total extrado usando
Trizol y se purifico (Kit
Rneasy)
Metodologa
Anlisis de microarrays
Proceso de hibridacin
Probesets (sondas)
Metodologa
In vitro: ensayo de proliferacin
Raspado 75-80% monocapa de
queratinocitos (4x4 araazos)
Metodologa
Anlisis de RT-PCR
Metodologa
Anlisis estadstico
Software GraphPad (GraphPad Software, San Diego, CA)
Todos los datos se expresan como media el error
estndar de la media (SEM)
Dos vas ANOVA se utiliz para evaluar los datos agrupados
Prueba de Bonferroni para determinar las diferencias entre
los grupos
Las comparaciones se consideraron estadsticamente
significativas cuando p <0,05
Student t -test P <0,05 fue considerado estadsticamente
significativo.
Resultados
Figura 1. La agrupacin jerrquica de los
genes expresados ms de A) 10 veces y B)
de 50 veces en el epitelio oral y de la piel
Anlisis de microarrays
Resultados
Tabla 1. Molculas expresadas diferencialmente relacionados con el movimiento celular y la
proliferacin
Resultados
Figura 2. Queratinocitos oral y de la piel, cierre
de la herida In Vitro posterior a rascarse
Resultados
Figura 4. Comparacin de la piel y la proliferacin de queratinocitos
oral In Vitro de la herida
Resultados
Figura 5. Comparacin de la piel y la migracin
de queratinocitos orales por Gold-coloidal
ensayo de migracin
B) Queratinocitos piel MI 5.1 1.5 y
queratinocitos orales MI 13,0 2,7,
respectivamente
La cuantificacin de la migracin ha
demostrado que los queratinocitos orales
migran a una tasa promedio que es 2.6
veces ms rpido que los queratinocitos de
la piel
Resultados
Discusin
Los resultados actuales sugieren que la
reparacin es superior en mucosa oral, soportado
por las caractersticas intrnsecas del epitelio
La observacin de que 13710 genes se expresan
diferencialmente entre los dos tejidos fue
inesperado, ya que los tejidos comparten muchas
caractersticas histolgicas y funcionales
Este hallazgo de que los perfiles de expresin
gnica del epitelio oral y de la piel son bastante
diferentes sugiere que tales diferencias pueden
ser crticos para su funcin
Discusin
Varios genes expresados diferencialmente pueden
influir en la migracin de queratinocitos y la
proliferacin. Por ejemplo, la expresin de Pitx2, una
protena que apoya la migracin y la proliferacin, se
observ a ser mayor en los queratinocitos de la mucosa
oral
AHSG, que se expresa en altos niveles por los
queratinocitos orales, se ha informado que aumenta la
migracin de queratinocitos
Estos datos demuestran la constelacin de protenas
que regulan la capacidad migratoria es muy diferente
en los queratinocitos de la piel y la mucosa
Discusin
Mientras que los estudios anteriores han informado que la
mucosa oral tiene una tasa de proliferacin ms alta que la
piel , nuestros resultados son los primeros en comparar la
proliferacin de queratinocitos oral y piel humana
independiente de su tejido conectivo subyacente y el
medio ambiente
Estos datos sugieren que las clulas epiteliales orales
tienen una capacidad proliferativa intrnseca mayor que la
piel que es independiente de la modulacin por el tejido
conectivo subyacente (matriz extracelular)
Demostramos que los queratinocitos orales migran 2,6
veces ms rpido que los queratinocitos de la piel
Despus de la aadir IL-1 y tratamiento DMOG, la
expresin de VEGF y IL-15 mostr una mayor regulacin en
la piel que en los queratinocitos orales
Discusin
Los queratinocitos orales y de la piel
responden de manera diferente a los
estmulos (IL-1 IL-6, y la hipoxia)
Despus de la aadir IL-1 y tratamiento
DMOG, la expresin de VEGF y IL-15 mostr
una mayor regulacin en la piel que en los
queratinocitos orales
Conclusiones
El patrn general sugiere que los queratinocitos de la
piel presentan una respuesta ms robusta a las lesiones
que los queratinocitos orales
Esto puede ser el resultado de que los queratinocitos
orales tienen un perfil de expresin gnica ms
ventajoso que permite una respuesta ms rpida o
controlada a una lesin
Se necesitan estudios adicionales para identificar las
diferencias crticas que conducen a una mayor
proliferacin y la migracin en los queratinocitos de la
mucosa oral, en comparacin con los de la piel
Gracias!