Hierro-Sodio-cido

scrbico
Mtodo Absorcin Atmica Fe y Na
Valoracin oxidimtrica Vit C

Validacin de un mtodo analtico.

Una vez desarrollado un mtodo analtico, al igual que toda tcnica analtica
deber validarse, es decir, se debe confirmar y documentar que los resultados
producidos por el mtodo son confiables.
En general, para validar existen 3 tipos de validacin:
-Validacin Prospectiva: es aquella validacin realizada a mtodos analticos
nuevos.
-Validacin Retrospectiva: Para mtodos analticos antiguos, pero que se usan en
forma rutinaria, y que no han sido validados.
-Revalidacin: repeticin parcial o total de una validacin debido a cambios
efectuados, que puedan afectar a la capacidad del mtodo validado. (1)
La validacin se puede realizar mediante estudios intralaboratorio o interlaboratorios.
-Estudios Intralaboratorio: este tipo de validacin lo realiza un laboratorio
individualmente, utilizando materiales de referencia, comparacin con otro mtodo,
utilizando muestras blanco o muestras positivas fortificadas, etc.
-Estudios interlaboratorios: conjunto de mediciones a un nivel o varios niveles de
concentracin del analito problema, ejecutadas independientemente, por varios
laboratorios, sobre muestras de un material dado. (11)

Validacin

Al momento de validar un mtodo analtico se

requiere actuar mediante procedimientos correctos
entre los que se incluyen; una buena organizacin
funcional; personal adecuadamente adiestrado en la
aplicacin del mtodo; instalaciones adecuadas y
suficientes; equipos, reactivos y material de
laboratorio apropiado y en perfectas condiciones para
su uso; mtodos escritos, actualizados y aprobados.
De esta forma se puede garantizar la calidad de los
resultados obtenidos en el laboratorio.

Parmetros Fundamentales de
Validacin.

Una vez que se ha realizado el ajuste de los parmetros y se

ha probado con xito el mtodo en muestras, se est en
condiciones de realizar la validacin del mtodo, para poder
confirmar y documentar que los resultados obtenidos por el mtodo
son seguros y confiables

En el proceso de validacin, los parmetros que generalmente

son evaluados son:
-Selectividad
-Linealidad
-Precisin
-Exactitud
-Sensibilidad

Validacin

Selectividad ()
La selectividad de un sistema depende
de la interaccin de todos los
componentes, Longitud de onda,
interferentes, etc y muestra.

Selectividad o especificidad.

La selectividad o especificidad de un mtodo

analtico se refiere a la capacidad de un mtodo de
producir una seal medible debida slo a la presencia
del analito, libre de interferencias de otros componentes
en la matriz de muestra, estas interferencias pueden ser
productos de degradacin, metabolitos del mismo
analito en un fluido biolgico, etc.

La selectividad se puede controlar simplemente por

la adicin, por ejemplo del doble de estndar puro,
verificando el aumento de su seal.

Linealidad.

La linealidad de un mtodo analtico se refiere a la capacidad de un

mtodo de obtener resultados linealmente proporcionales entre la
concentracin de analito y su respuesta. Este parmetro se considera como
un criterio inicial de validacin, y es necesario verificarlo si se va a trabajar
con un slo estndar en las determinaciones de rutina. Al trabajar con
estndares mltiples se puede aceptar mtodos no lineales,.
Junto con establecer la linealidad del mtodo se puede estimar el rango de
linealidad del mtodo, es decir, el intervalo de concentraciones para el cual
el mtodo ha demostrado responder en forma lineal y dentro del cual se
puede estimar la cantidad de analito por interpolacin.

Para determinar la linealidad se prepara una serie de, al menos, cinco

diluciones de un estndar, las cuales deben estar de acuerdo con las
cantidades esperadas de analito en la muestra. Se efecta el anlisis
siguiendo exactamente el procedimiento descrito.
En procedimientos cromatogrficos se recomienda efectuar las inyecciones
por triplicado, a no ser que se use un patrn interno.. Para Absorcin
atmica a lo menos el promedio de 3 lecturas por concentracin.

El coeficiente de correlacin(r)

a) Coeficiente de correlacin (r).

El coeficiente de correlacin refleja el grado de relacin o ligazn entre las
variables x (concentracin), y (respuesta). El valor r = 1 indica una recta
perfectamente lineal de pendiente positiva, r = -1 una recta perfectamente lineal de
pendiente negativa y r =0 la no correlacin entre x e y. En anlisis qumico se
obtienen valores de r elevadas, iguales o superiores a 0,999, si bien en anlisis de
trazas se aceptan valores mas bajos (iguales o superiores a 0,99).
Sin embargo, el mejor indicador del modelo lineal no es r sino un test estadstico, en
el cual se calcula un valor tr (n-2 grados de libertad y se compara con el valor de t
tabulado para el nivel de confianza requerido. En este caso si tr es mayor que el t de
tabla, significa que existe una correlacin lineal entre x e y, para el nivel de confianza
requerido.
r (n-2)__
(1-r2)
Donde:
r = coeficiente de correlacin
n = numero de mediciones
tr =

Curva de calibracin que

relaciona respuesta
rea, alturas, absorbancia, etc., con concentracin o cantidad de analito. La
cual posteriormente se grfica para su documentacin e interpretacin
estadstica.

La recta de calibracin es del tipo:

y = bx + a
Donde:
x = corresponde a la concentracin
y = corresponde a la respuesta
b = el valor de la pendiente o variacin de respuesta por unidad de
concentracin.
a = el termino independiente o intercepto sobre el eje Y.

Interpretacin estadstica de la regresin lineal.

La representacin grfica suele ser suficiente. Sin embargo conviene

efectuar una interpretacin estadstica de la regresin lineal.

b) Significacin estadstica de la
varianza de la pendiente b

La pendiente b se llama tambin coeficiente de regresin, y se

determina como parmetro indicativo de la sensibilidad, el cual a
mayor pendiente, mayor sensibilidad (respuesta del mtodo frente a
los cambios de concentracin del analito). La varianza de la
pendiente Sb2 se utiliza como expresin matemtica de la
linealidad, a menor varianza mejor linealidad, para expresar la
linealidad tambin se utiliza la desviacin estndar de la pendiente
Sb y el coeficiente de variacin (%CV)
A su vez los limites de confianza de la pendiente se hallan a partir
de la expresin:
b + t Sb
Donde:
b = valor de la pendiente
t = valor de la distribucin de Student para n-2 grados de libertad
para el grado de confianza escogido.
Sb = desviacin estndar de la pendiente.

c) Significacin estadstica de la
varianza de la ordenada al origen

El valor de a ( ordenada al origen), se determina para verificar si la

recta pasa por el origen y que cualquier desviacin puede
adjudicarse nicamente a valores aleatorios, por lo que en un caso
ideal debe ser cero. Al igual que en el caso de la pendiente para
poder obtener los intervalos de confianza de la ordenada al origen
se calcula en funcin de su varianza Sa2, su desviacin estndar
Sa. Y estos se hallan a travs de la formula:
a+ t Sa
Donde:
a = valor de la ordenada al origen.
t = valor de la distribucin de student para n-2 grados de libertad
para el grado de confianza escogido.
Sa = desviacin estndar de a

Precisin

La precisin es el grado de concordancia entre los valores de

una serie repetida de ensayos analticos efectuados sobre una
muestra homognea o, expresado de otra forma, la dispersin de
los valores analticos alrededor de su media. La precisin indica la
capacidad del mtodo para dar resultados semejantes cuando se
aplica repetidamente a una muestra.

La precisin se expresa matemticamente por la media para el

valor central y la desviacin estndar para la dispersin de los
resultados, y ms comnmente por la desviacin estndar relativa
(RSD).

La precisin requiere del anlisis sobre una muestra y la

precisin as obtenida se denomina del mtodo, puesto que incluye
todo el procedimiento analtico, desde la preparacin de la muestra
hasta la lectura instrumental. Tambin se puede determinar
directamente la precisin del sistema, hallando la variabilidad de
respuesta de una solucin patrn. Por lo que la precisin se
distinguir en 2 tipos de estudios:

Precisin
-Precisin del sistema: la cual evala la dispersin de al menos 6

inyecciones del estndar o repeticiones de lecturas de

absorbancias.
-Precisin del mtodo: evaluando la dispersin de varias
preparaciones de la muestra final homognea
A su vez la precisin deber medirse en condiciones
repetitivas, es decir, mismas condiciones, sobre la misma muestra,
por un mismo analista, en el mismo laboratorio, el mismo da y con
los mismos aparatos y reactivos.
Tambin debe medirse en condiciones reproducibles, es decir,
medir la precisin de un mtodo, efectuado sobre la misma muestra
pero en condiciones diferentes, analistas, aparatos, das, etc.
El cociente repetibilidad/reproducibilidad, es de gran utilidad
para evaluar la precisin de un mtodo analtico. Su valor segn
estudios realizados por la AOAC es normalmente comprendido
entre 1,5 y 2. Valores mayores a 2 son indicadores de un mtodo
muy personal y valores inferiores a 1,5 indican pobre repetibilidad.

Precisin
Los criterios de aceptacin pueden ser variables, por ejemplo la USP indica

una RSD del sistema de no ms de 2%, inyectando 5 veces una solucin

estndar. Existen tablas que relacionan la RSD mxima aceptable para un
mtodo analtico en funcin de los lmites de aceptacin y del nmero de
rplicas.
En muchos casos debe indicarse el intervalo de confianza de la
medida, es decir el rango en el cual se encuentra presente el analito,
preferentemente, cuando el numero de muestras es pequeo (menor de
30), las medidas independientes, y la distribucin normal, puede calcularse
de acuerdo a la distribucin de Student segn la formula:
X - t, x S < < X + t, x S
n
n
Donde:
X = promedio de las mediciones
t, = es el valor de Student, tabulado para n mediciones con = n-1 grados
de libertad y para el nivel de confianza empleado, generalmente 95%.
S = desviacin estndar de las mediciones
n = numero de mediciones.

Sensibilidad

La sensibilidad de un mtodo analtico se relaciona con

la cantidad mnima de analito requerida para dar un
resultado significativo, cualitativo o cuantitativo. Debe
distinguirse entre sensibilidad de calibrado y sensibilidad
analtica.
a) Sensibilidad de calibrado: corresponde a la pendiente
de la recta de calibracin, es decir, la seal o respuesta por
unidad de concentracin.
b) Sensibilidad analtica: corresponde a la sensibilidad de
calibrado dividida por la desviacin estndar de la
respuesta.

Los parmetros a definir para poder evaluar la

sensibilidad de un mtodo analtico son los limites de
deteccin y de cuantificacin.

Los pasos a seguir son los siguientes:

a) Se determina la pendiente de la curva de calibracin
(concentracin v/s respuesta) en el rango apropiado:
b) Se realiza otra curva de calibracin, inyectando cada
punto por triplicado, pero en este caso para
concentraciones menores de analito, determinndose la
ecuacin de esta nueva recta de calibracin y se
extrapola la respuesta a concentracin cero,
obtenindose un estimado de la respuesta del blanco: Ybl
c) Se determina la desviacin estndar correspondiente a
cada concentracin del punto 2, se calcula la recta
correspondiente a concentracin v/s s y se extrapola
como en el caso anterior la desviacin estndar a
concentracin cero, obtenindose el estimado
correspondiente a la desviacin estndar del blanco: Sbl

a) Limite de deteccin:
corresponde segn la USP XXII, a la menor

concentracin de analito en una muestra que puede ser

detectada, pero no necesariamente cuantificada, bajo
las condiciones experimentales establecidas y se
expresa en unidades de concentracin (%, ppm, ppb,
etc.). Se calcula como:
Limite de deteccin = Ybl + 3 Sbl_
b
Donde:
Ybl = valor estimado de la respuesta del blanco.
Sbl = desviacin estndar estimada del blanco
b = pendiente de la curva de calibracin.

b) Limite de cuantificacin:
segn USP XXII, la menor concentracin de analito de una muestra
que puede ser cuantificada con precisin y exactitud aceptable bajo
las condiciones experimentales establecidas y se expresa tambin
en unidades de concentracin. Se calcula segn:

Limite de cuantificacin: = Ybl + 10 Sbl_

b
Donde:
Ybl = valor estimado de la respuesta del blanco.
Sbl = desviacin estndar estimada del blanco
b = pendiente de la curva de calibracin.
Los lmites de deteccin y cuantificacin se estiman a partir de
la curva de regresin o calibracin, siempre que se hayan
considerado concentraciones bajas de analito, por extrapolacin a
concentracin cero.

Exactitud.

La exactitud de un mtodo, tambin conocida como

error sistemtico o tendencia, corresponde a la
capacidad del mtodo analtico para dar resultados lo
ms prximos posibles al valor verdadero. La exactitud o
bien podramos llamarla inexactitud, debe ser tan
pequea como sea posible, para que el valor promedio
se aproxime al de referencia, es decir, la recuperacin
del analito debe acercarse al 100%.

No deben confundirse exactitud y precisin. La

precisin est relacionada con la dispersin de una serie
de mediciones, pero no da ninguna indicacin de lo
cerca que estn del valor verdadero. Se pueden tener
mediciones muy precisas pero poco exactas.

Exactitud.
Matemticamente la exactitud se expresa en forma de porcentaje

de recuperacin de la cantidad de analito presente en la muestra, o

bien en forma de diferencia entre el valor hallado y el valor
verdadero. Si bien el valor verdadero de concentracin no se
conoce sino que solo puede estimarse, es posible preparar una
muestra por un procedimiento ms exacto, y utilizarla como
referencia.
Recuperacin: R= X_ x 100
X
Donde:

X = valor verdadero
X = promedio de las mediciones

Exactitud
En el anlisis de trazas (micro componentes), no siempre
se alcanzan recuperaciones tan elevadas y se consideran
valores habituales de recuperacin entre el 60 y 80%.
Para determinar si el valor medio hallado y el valor
considerado verdadero no difieren significativamente, para
esto se efecta un test estadstico, como lo es el test de
Student, para un nivel de confianza determinado. El test
de Student emplea, al menos, 3 concentraciones del
analito, preparadas por triplicado, comprendidas dentro del
rango de linealidad del sistema, en general se utilizan
concentraciones correspondientes al 80, 100 y 120% del
valor esperado.

Exactitud.

En este caso, el valor de t se calcula como:

texp = (100-R)_
RSD x n
Donde:
R = recuperacin porcentual.
RSD = desviacin estndar relativa de las mediciones
n = nmero de repeticiones
Los valores de texp se comparan con los tabulados
para el intervalo de confianza requerido con n-1 grados
de libertad, y la exactitud se evala para el promedio de
recuperacin de todas las concentraciones. Si texp <
ttabla, no existe diferencia significativa con el 100% de
recuperacin y la exactitud es apropiada. (1)

Test de ANOVA- homogeneidad

Exactitud

Sodio
Mtodo Espectrofotometra de
Absorcin atmica

Papel biolgico
El catin sodio (Na+) tiene un papel
fundamental en el metabolismo celular, por
ejemplo, en la transmisin del impulso nervioso
(mediante el mecanismo de bomba de sodiopotasio). Mantiene el volumen y la osmolaridad.
Participa, adems del impulso nervioso, en la
contraccin muscular, el equilibrio cido-base y
la absorcin de nutrientes por las clulas.
La concentracin plasmtica de sodio es en
condiciones normales de 135 - 145 mmol/l. El
aumento de sodio en la sangre se conoce como
hipernatremia y su disminucin hiponatremia

Compuestos

Los compuestos de sodio de mayor importancia industrial son:

Sal comn (NaCl).
Carbonato de sodio (Na2CO3).
Bicarbonato de sodio (NaHCO3).
Sosa custica (NaOH). El hidrxido de sodio, ms conocido como soda
custica, es una base muy fuerte y corrosiva usada en productos
destinados a la limpieza de desages y al desengrase de hornos. Cuando
se disuelve en agua produce una reaccin muy exotrmica (-42,9 kJ/mol).
Su poder corrosivo hace de la soda custica un compuesto letal para los
tejidos vivos y los compuestos orgnicos, e incluso puede atacar al vidrio
en caso de que el contacto sea permanente. En presencia del dixido de
carbono atmosfrico produce carbonato de sodio, por lo que sus soluciones
son poco estables.
Nitrato de sodio (NaNO3).
Tiosulfato de sodio (Na2S2O3 5H2O).
Brax (Na2B4O7 10H2O).
Yoduro de sodio (NaI)

Sodio en la dieta
La mayor fuente de sodio es el cloruro de sodio o una racin comn
de sal, del cual el sodio constituye el 40%. Sin embargo, todos los
alimentos contienen sodio en forma natural, siendo ms
predominante la concentracin en alimentos de origen animal que
vegetal. Aproximadamente 3 gr. de sodio estn contenidos en los
alimentos que se consumen diariamente, sin la adicin de cloruro
de sodio o sal comn, esto es importante considerarlo en pacientes
que tengan una restriccin o disminucin en la ingesta de sal diaria
(pacientes nefrpatas, diabticos, hipertensos). El requerimiento de
sodio es de 500 mg /da aproximadamente (3). La mayora de las
personas consumen ms sodio que el que fisiolgicamente
necesitan, para ciertas personas con presin arterial sensible al
sodio, esta cantidad extra puede causar efectos negativos sobre la
salud.

REFERENCIAS
AOAC Official Method 985.35. AOAC Official
Methods of Analysis (2005). Cp. 50, p.15.
M Series Atomic Absorption, Manual de
operacin,1999-2006 Thermo Electron
Manufacturing Ltda.
Spectrometers Manual de Mtodos, 9499 230
24011, Issue 4 280804. Thermo Electron
Corporation

Optimizacin del equipo

1.- Realizar la puesta a punto y optimizacin de las condiciones del

espectrofotmetro (ajuste de quemador y lmpara) para el metal a determinar
siguiendo las indicaciones del manual o instructivo del equipo de medicin.
2. Aspirar por el capilar del quemador blanco y haga autocero. Ajustar la sensibilidad
con concentracin de estndar referencial indicado en el manual para lograr la
mxima sensibilidad.
3. Aspirar las soluciones estndares de la curva de calibracin en orden decreciente
por el capilar del quemador y leer en E.A.A. Para realizar la calibracin se deben
usar a lo menos 3 estndar y un blanco. El coeficiente de correlacin de la curva de
regresin lineal debe ser > 0,99.
4. Aceptar curva de calibracin, aspirar un material de referencia control o una
solucin control del analito a analizar, verificar que se encuentra dentro del rango de
aceptabilidad.
5. Proceder a realizar las lecturas de las muestras en el EAA.
6. Las lecturas son obtenidas por interpolacin desde la curva de calibracin y estn
expresados en mg/L del analito correspondiente.
7. En caso, de que el valor este fuera de rango del mximo de la curva de
calibracin, realice una dilucin y registre el valor del factor de dilucin (F.D.)
aplicado.
8. Registre los valores obtenidos.

Reactivos

6.3.1. Solucin estndar stock comercial de multielementos de metales, 100 mg/L, certificada.
6.3.2. Solucin estndar stock comercial de Sodio 1000 mg/L, certificada.
6.3.3. Gases calidad AAS: Acetileno 99.99% , Oxido nitroso 99.99%.
6.3.4. Agua grado reactivo, destilada o desionizada, tipo I.
6.3.5. Acido ntrico (HNO3) 65% 14 N, calidad AAS.(suprapur)
6.3.6. Acido clorhdrico (HCl) 37%, p.a.
6.3.7. Oxido de lantano (La2O3), 99.99%, calidad AAS.
6.3.8. Solucin de cloruro de lantano ( LaCl3, 1% p/v): Pesar 11,7 g (+/- 100mg) de La2O3 y
llevar a un matraz aforado de 1L, agregar un poco de agua grado reactivo para disolver el polvo,
agregar bajo campana lentamente 50 mL de HCl 37% ( Precaucin: Reaccin exotrmica!).
Agitar suavemente, hasta disolver todo el reactivo y luego aforar con agua grado reactivo. Estable
6 meses a temperatura ambiente.
6.3.9. Solucin de cido ntrico 20% v/v para eliminacin de trazas en lavado de material: En un
contenedor de plstico para lavar material, agregar 5 l de agua grado reactivo, luego, medir 1L de
HNO3 65% con una probeta, verter agitando lentamente al contenedor con el agua grado reactivo
y mezclar suavemente.
6.3.10. Solucin de cido ntrico 1M: en un matraz de 1 L agregar unos 200 mL de agua grado
reactivo, luego medir 71,5 mL de HNO3 65% 14N y agregar bajo campana lentamente al matraz
(Precaucin: Reaccin exotrmica!), aforar con agua grado reactivo y agitar. Almacenar en
frasco vidrio o plstico mbar. Duracin 6 meses a temperatura ambiente.

Selectividad Sodio

Para determinar la selectividad se

utiliz un material de referencia matriz
liquida multielementos trazables al NIST,
con adicin de oxido de lantano acorde a
la metodologa analtica, con lo cual se
pudo observar que el mtodo presenta
una buena selectividad.

Determinacin de Sodio
Digestin de la muestra

Moler y homogeneizar la muestra ..

Pesar exactamente en un crisol + 3 g de muestra dependiendo de la
concentracin esperada del o los analitos. Registre el peso.
Colocar el crisol con la muestra sin tapar en placa calefactora,
estufa o mufla a 100 C por 30 minutos.
Colocar el crisol con la muestra tapado en mufla a 525C por un
periodo de 3 a 5 hrs (< 8 hrs), hasta obtener cenizas blancas. De
obtenerse cenizas grises dejar enfriar y agregar al crisol de 0,5 a 3
mL aproximadamente de HNO3 65%, colocar el crisol destapado en
placa calefactora a unos 100C, hasta evaporar. (realizar
procedimiento bajo campana extractora de gases).Luego llevar
nuevamente mufla a 525C por 1 a 2 hrs hasta cenizas blancas.
Digerir las cenizas blancas contenidas en el crisol con 5 mL de
HNO3 1M en placa calefactora cuantitativamente llevar el licor de
cenizas a un matraz aforado de 50 mL, a travs de 2 lavados con
porciones de alrededor de 3 mL de HNO3 1M, agregar al matraz 5
mL de LaCl3, 1% p/v y aforar con HNO31M. La solucin esta lista
para ser leda.

Sodio 1

Sodio 2

Hierro
Mtodo Espectrofotometra de
Absorcin atmica con Llama

Metabolismo del hierro

Aunque solo existe en pequeas cantidades en los seres vivos, el hierro ha asumido en papel
vital en el crecimiento y en la supervivencia de los mismos y es necesario no solo para lograr una
adecuada oxigenacion tisular sino tambin para el metabolismo de la mayor parte de las clulas.
El hierro es el elemento numero 26 en la tabla peridica y tiene un peso atmico de 55,85. Es el
cuarto elemento en abundancia y el segundo metal ms abundante en la corteza terrestre. El
hierro fue seleccionado en la evolucin de los tiempos de entre muchos metales transicionales
para formar la ENERGIA VITAL en la fisiologa de los vertebrados.
En la actualidad con un incremento en el oxigeno atmosfrico el hierro se encuentra en el medio
ambiente casi exclusivamente en forma oxidada ( ferrica Fe+++) y en esta forma es poco
utilizable.
En los adultos sanos el hierro corporal total es de 3 a 4 gramos 35 mg/kg en las mujeres a 50
mg/kg en los hombre se encuentra distribuido en dos formas:
70% como hierro funcional (2.8g):
Eritrocitos (65%).
Tisular: mioglobinas (4%).
Enzimas dependientes del hierro (hem y no hem): 1%
Estas son enzimas esenciales para la funcin de las mitocondrias y que controlan la oxidacin
intracelular (citocromos, oxidasas del citrocromo, catalasas, peroxidasas).
Transferrina (0.1%), la cual se encuentra normalmente saturada en 1/3 con hierro.
La mayor atencin con relacin a este tipo de hierro se ha enfocado hacia el eritrn, ya que su
estatus de hierro puede ser fcilmente medible y constituye la principal fraccin del hierro
corporal.

30% como hierro de depsito (1g):

Ferritina (2/3).
Hemosiderina (1/3).
Hemoglobina: transporta el oxigeno a las celulas.
Transferrina: transporta el hierro a travs del plasma.
Ferritina: principal forma de deposito del hierro en los tejidos.
Estudios recientes de disponibilidad del hierro de los alimentos han demostrado que el hierro del
hem es absorbido bien, pero el hierro no hem se absorbe en general muy pobremente y este
ultimo es el hierro que predomina en la dieta de gran cantidad de gente en el
mundo.[cita requerida]
Hem: como hemoglobina y mioglobina, presente principalmente en la carne y derivados. No hem.
La absorcin del hierro hem no es afectada por ningun factor ni dietetico, ni de secrecin
gastrointestinal. Se absorbe tal cual dentro del anillo porfirinico. El hierro es liberado dentro de las
celulas de la mucosa por la HEM oxigenasa, enzima que abunda en las celulas intestinales del
duodeno.
Las absorcin del hierro no hem, por el contrario se encuentra afectada por una gran contidad de
factores dieteticos y de secrecin gastrointestinal que se analizanran posteriormente.
El hierro procedente de la dieta, especialmente el no hem, es hierro frrico y debe ser convertido
en hierro ferroso a nivel gstrico antes que ocurra su absorcin en esta forma (hierro ferroso) a
nivel duodenal principalmente.
Otros factores, independientes de la dieta que pueden influir en la absorcin del hierro son:

Funciones Hierro

El hierro se encuentra en prcticamente todos los seres vivos y cumple numerosas y variadas funciones.
Hay distintas protenas que contienen el grupo hemo, que consiste en el ligando porfirina con un tomo de hierro.
Algunos ejemplos:
La hemoglobina y la mioglobina; la primera transporta oxgeno, O2, y la segunda lo almacena.
Los citocromos; los citocromos c catalizan la reduccin de oxgeno a agua. Los citocromos P450 catalizan
la oxidacin de compuestos hidrofbicos, como frmacos o drogas, para que puedan ser excretados, y
participan en la sntesis de distintas molculas.
Las peroxidasas y catalasas catalizan la oxidacin de perxidos, H2O2, que son txicos.
Ejemplo de centro de una protena de Fe/S (ferredoxina)
Las protenas de hierro/azufre (Fe/S) participan en procesos de transferencia de electrones.
Tambin se puede encontrar protenas en donde tomos de hierro se enlazan entre s a travs de enlaces puente
de oxgeno. Se denominan protenas Fe-O-Fe. Algunos ejemplos:
Las bacterias metanotrficas, que emplean el metano, CH4, como fuente de energa y de carbono, usan
protenas de este tipo, llamadas monooxigenasas, para catalizar la oxidacin de este metano.
La hemeritrina transporta oxgeno en algunos organismos marinos.
Algunas ribonucletido reductasas contienen hierro. Catalizan la formacin de desoxinucletidos.
Los animales para transportar el hierro dentro del cuerpo emplean unas protenas llamadas transferrinas. Para
almacenarlo emplean la ferritina y la hemosiderina. El hierro entra en el organismo al ser absorbido en el intestino
delgado y es transportado o almacenado por esas protenas. La mayor parte del hierro se reutiliza y muy poco se
excreta.
Tanto el exceso como el defecto de hierro pueden provocar problemas en el organismo. El envenamiento por
hierro ocurre debido a la ingesta exagerada de est (como suplemento en el tratamiento de anemias).
La hemocromatosis corresponde a una enfermedad de origen gentico, en la cual ocurre una excesiva absorcin
del hierro, el cual se deposita en el hgado, causando disfuncin de este y eventualmente llegando a la cirrosis
heptica. En las transfusiones de sangre se emplean ligandos que forman con el hierro complejos de una alta
estabilidad para evitar que quede demasiado hierro libre.
Estos ligandos se conocen como siderforos. Muchos microorganismos emplean estos siderforos para captar el
hierro que necesitan. Tambin se pueden emplear como antibiticos, pues no dejan hierro libre disponible .

REFERENCIAS
Official methods of analysis AOAC 15 th
edition, vol 2, pg 1106,1107, ao 1990
M Series Atomic Absorption, Manual de
operacin,1999-2006 Thermo Electron
Manufacturing Ltda.
Spectrometers Manual de Mtodos,
9499 230 24011, Issue 4 280804.
Thermo Electron Corporation

Selectividad

Dada que las lneas de emisin de la lmpara del

ctodo hueco de Fe son muy estrechas es rara la
interferencia. Si interfiere en la dispersin de la luz la
combustin incompleta de la matriz orgnica o
Interferente espectral hierro 213,859 nm y el Zinc
213,856 lo cual produce una sobreposicin de 0,003 nm
Para determinar la selectividad se utiliz una matriz de
harina sin fortificar (grado de extraccin, 78%), y una
matriz de harina con adicin de estndar de hierro y
sulfato y pirofosfato de hierro con lo cual se pudo
observar que el mtodo presenta una buena
selectividad, ya que las matrices no se ven afectadas
por la presencia de otros analitos interferentes

Reactivos, insumos

Matraces aforados de 50 mL
Piseta
Esptula, toalla absorbente, plumn permanente
Cpsulas de porcelana para digestin de 25cm de dimetro
Elementos de seguridad como guantes y anteojos

Balanza analtica sensibilidad 0.1 mg

Campana de extraccin de gases
Espectrofotmetro de absorcin atmica con llama
Homogeneizador de muestras
Plancha calefactora
Agua para anlisis, desionizada
cido clorhdrico 37 % p.a.
cido ntrico 65% p.a
Estndar de Hierro o multielementos
Lmpara de hierro
Micropipeta de 100ul a 1000 ul

Curva de calibracin de
estndares
1.- Estndares de hierro solucin concentrada de
1000 mg/L. o St multielemenos 100 ppm
2.- Estndar de 5 mg/L: tomar 0,5 mL del estndar
concentrado de 1000 mg/L + 5 mL de HCL
concentrado y aforar a 100 mL con agua
desionizada.
3.- Estndar de 2 mg/L: tomar 0,2 mL del estndar
concentrado de 1000 mg/L + 5 mL de HCL
concentrado y aforar a 100 mL con agua
desionizada.
4.- Estndar de 1 mg/L: tomar 0,1 mL del estndar
concentrado de 1000 mg/L + 5 mL de HCL
concentrado y aforar a 100 mL con agua desionizada

Condiciones del equipo de FLAA

Longitud de Onda
248,3 nm
Franja de paso (slite)
0,2 nm
Tipo de Llama
Aire-acetileno
Flujo de Combustible
0,8 a1,0 L/min
Corriente de la lmpara 75
Tipo de seal
Continua
T de ignicin
800C
T de atomizacin
2300 C
Corrector de background on

Determinacin de Hierro
Digestin de la muestra
Moler y homogeneizar la muestra ..
Pesar exactamente en un crisol + 3 g de muestra dependiendo de la
concentracin esperada del o los analitos. Registre el peso.
Colocar el crisol con la muestra sin tapar en placa calefactora,
estufa o mufla a 100C por 30 minutos.
Colocar el crisol con la muestra tapado en mufla a 550C por un
periodo de 5 a 6 hrs (< 8 hrs), hasta obtener cenizas blancas. De
obtenerse cenizas grises dejar enfriar y agregar al crisol de 0,5 a 3
mL aproximadamente de HCL 1:1 colocar el crisol destapado en
placa calefactora a unos 100C, hasta evaporar. (realizar
procedimiento bajo campana extractora de gases).Luego llevar
nuevamente mufla a 550C por 1 a 2 hrs hasta cenizas blancas.
Digerir las cenizas blancas contenidas en el crisol con 5 mL de HCL
1:1 en placa calefactora cuantitativamente llevar el licor de cenizas
a un matraz aforado de 50 mL, a travs de 2 lavados con porciones
de alrededor de 3 mL de HCL 1:1, aforar con agua. La solucin esta
lista para ser leda.

Test de ANOVA- homogeneidad

Interpretacin, clculos, expresin e

informe
de los resultados
Para calcular la concentracin de sodio o hierro en la muestra en
mg/kg, aplique la siguiente formula:

mg/Kg del analito = L x 50 x F.D.

P
L: Lectura de la concentracin en mg/L obtenida por la interpolacin

de la curva de calibracin.
FD: Factor de dilucin. En caso de no realizar ninguna dilucin, es
igual a 1.
P: Peso de la muestra en gramos
Los resultados obtenidos se expresan en muestras slidas mg/Kg o
en muestras lquidas mg/L
ENO sodio en mg/100g y mg/porcin de consumo habitual

CIDO ASCRBICO
Mtodo J.Tillman

La Vitamina C o enantimero L
del cido ascrbico,
es un nutriente esencial para los primates superiores y
un pequeo nmero de otras especies. La presencia de
esta vitamina es requerida para un cierto nmero de
reacciones metablicas en todos los animales y plantas
y es creada internamente por casi todos los organismos,
siendo los humanos una notable excepcin. Es
ampliamente sabido que su deficiencia causa escorbuto
en humanos,1 2 3 de ah el nombre de ascrbico que se
le da al cido. Es tambin ampliamente usado como
aditivo alimentario.
El farmacforo de la vitamina C es el ion ascorbato. En
organismos vivos, el ascorbato es un antioxidante, pues
protege el cuerpo contra la oxidacin, y es un cofactor
en varias reaciones enzimticas vitales.

Efectos La vitamina C

ayuda al desarrollo de dientes y encas, huesos,

cartlagos, a la absorcin del hierro, al crecimiento y
reparacin del tejido conectivo normal (piel ms suave,
por la union de las clulas que necesitan esta vitamina
para unirse), a la produccin de colgeno (actuando
como cofactor en la hidroxilacin de los aminocidos
lisina y prolina), metabolizacin de grasas, la
cicatrizacin de heridas. Su carencia ocasiona el
escorbuto, tambin resulta esta vitamina un factor
potenciador para el sistema inmune aunque algunos
estudios ponen en duda esta ltima actividad de la
vitamina C.

Indicaciones

La Vitamina C es esencial para el desarrollo y mantenimiento del organismo, por lo que su consumo es obligatorio
para mantener una buena salud.
La vitamina C sirve para:
Evitar el envejecimiento prematuro (proteger el tejido conectivo, la "piel" de los vasos sanguneos).
Facilita la absorcin de otras vitaminas y minerales.
Antioxidante.
Evita las enfermedades degenerativas tales como arteriosclerosis, cncer, enfermedad de Alzheimer.
Evita las enfermedades cardacas (tema tratado ms adelante).
Desde los descubrimientos de Linus Pauling se aseveraba que la vitamina C reforzaba el sistema inmune y
prevena la gripe, pero investigaciones realizadas en los 1990s parecen refutar esta teora y, en todo caso, han
demostrado que el consumo en exceso (a diferencia de lo preconizado por Pauling y sus seguidores) de
suplementos de vitamina C son poco recomendables, porque,entre otras cosas, un consumo excesivo puede
provocar alteraciones gastrointestinales.
Requerimientos diarios
El ser humano parece ser extremadamente eficiente en la reutilizacin de la vitamina C, por lo que sus
requerimientos son 50 veces menores que en el resto de los simios. Al ser una vitamina hidrosoluble su
eliminacin por el rin por diuresis es extremadamente eficaz, por lo que los excesos se pueden eliminar en
menos de cuatro horas. Todo ello hace que haya muy poco consenso en cual es la cantidad mnima y la cantidad
mxima. Prueba de ellos damos las siguientes referencias:
40 miligramos por da: Food Standards Agency1 del Reino Unido
45 miligramos por da: La Organizacin Mundial de la Salud4
6095 miligramos por da: National Academy of Sciences5 de los Estados Unidos. Segun este organismo no se
deben exceder los 2000 miligramos por da.
400 miligramos por da: the Linus Pauling Institute.6
1.000 miligramos por da: Profesor Roc Ordman, para la investigacin de los radicales libres.7
3.000 miligramos por da (hasta 300.000 mg para enfermos): La Fundacin para la vitamina C.8
6.00012.000 miligramos por da: Thomas E. Levy, Colorado Integrative Medical Centre.9
6.00018.000 miligramos por da: Dosis que ingiere Linus Pauling.10
3.000200.000 miligramos por da: Robert Cathcart va subiendo la dosis hasta que aparece una diarrea.
Entonces recomienda la dosis ms elevada que no cause diarrea al paciente.11

Efectos Adversos

Se considera que las necesidades diarias

de cido ascrbico para un adulto no
exceden de los 60 mg y que cantidades
superiores a los 3 g diarios causan
acidificacin de la orina e incrementan el
consiguiente riesgo de clculos urinarios

Otros Usos
El cido ascrbico y sus sales ascorbatos de sodio, potasio y calcio
se utilizan de forma generalizada como antioxidantes y aditivos.
Estos compuestos son solubles en agua por lo que no protegen a
las grasas de la oxidacin; para este propsito pueden utilizarse los
steres del cido ascrbico solubles en grasas con cidos grasos
de cadena larga (palmitato y estearato de ascorbilo).
Principales fuentes naturales
Las principales fuentes naturales de vitamina C que actualmente se
conocen son todas vegetales, principalmente ciertas frutas (las que
poseen colores rojos o azulados suelen ser ricas en cido
ascrbico), a continuacin se enumeran los principales vegetales
que hacen aporte de esta vitamina: " grosella negra (Ribes
nigrum), los ajs, chiles, pimientos, morrones, pimentones, el perejil,
la guayaba, el fruto kiwi, el brcol o broccoli (Brassica oleracea
italica), el hbrido llamado loganberry, la grosella (Ribes rubrum) el
repollito de Bruselas tambin conocido como col de Bruselas, el goji
(Lycium barbarum), el lichi (Litchi chinensis) entre otros, sin
embargo en gran parte del mundo de cultura "Occidental" las
fuentes ms comunes para obtener vitamina C suelen ser los citrus:
limn, naranja, pomelo, bergamota y, fuera de los citrus, el tomate.

la vitamina C es una de las vitaminas que intervienen en el funcionamiento del

sistema inmunolgico, como lo hacen la vitamina A y la tiamina. Tambin es muy
importante como vitamina antioxidante, lo que de una u otra manera protege a
nuestro organismo de radicales libres u otras sustancias txicas. Por otro lado, al ser
hidrosoluble, el exceso es fcilmente eliminado en la orina.
Como curiosidad puede sealarse que esta vitamina slo es esencial en unos pocos
animales: los monos antropoides, el ser humano que ha perdido la capacidad de
sintetizarla naturalmente en su cuerpo; el ruiseor chino, una especie de trucha, los
cuyes y los murcilagos frugvoros.
Tipos de vitamina
La vitamina C se divide en naturales y sintticas. Las naturales se dividen en cido
ascrbico y ascorbato de sodio; por su parte las sintticas pueden tener distintas
variaciones.
Las ventajas de la vitamina C sintticas es su bajo precio y su fabricacin pues su
materia prima es el petrleo, sus desventajas son su baja efectividad y los efectos
secundarios que conlleva el consumo de elementos minerales en reemplazo de
vegetales.
En cambio, la vitamina C natural es sumamente efectiva, y de muy bajo precio pues
est presente en casi toda las frutas y vegetales (ctricos de preferencia); su
problema radica en que al extraerse y convertirse en cristales toma un fuerte sabor a
limn no bien tolerado por personas con sensibilidad en su estomago

REFERENCIAS
Association of Official Analytical Chemists
985.33 (1995)
United State Pharmacopeia U.S.P. XXIII
Methods for the determination of vitamins
in food, G. Brubacher Muller Mulot and
A.T. Southgate

Selectividad cido Ascrbico

Mtodo J.Tillman

La determinacin oxidimtrica no es
muy selectiva ya que la presencia de
otros analitos interferentes (compuestos
reductores, SO2,etc) tienden a producir
gastos elevados del titulante 2,6DFIF, con
lo cual generalmente da como resultados
valores sobreestimados.

CAMPO DE APLICACIN Y ALCANCE

El mtodo es aplicable a productos con o

sin almidn productos heterogneos,
verduras, frutas, leche y productos a base
de leche.

Reactivos

1.- cido L(+) ascrbico estndar

2.- cido meta-fosfrico p.a
3.- cido actico p.a
4.- 2,6-diclorofenol-indofenol sal sdica p.a
5.- EDTA sal sdica del cido etilendiaminotetraactico.
6.- Solucin estndar de cido ascrbico.- 1mg/mL. Pesar con exactitud
50 mg de Acido L(+) ascrbico estndar (U.S.P., B.P.). Transferir a un
matraz volumtrico de 50 mL. Diluir al volumen con la solucin de cido
meta-fosfrico al 2%.
7.- Solucin cido meta-fosfrico.- Disolver con agitacin 15 mg de pellets
de HPO3 glacial en 40 mL de cido actico glacial y 150 mL de H2O. Aforar
a 250 mL con H2O y filtrar rpidamente a travs de un papel filtro plegado
cuantitativo (Whatman N 541, rpido, 18,5 cm u otro equivalente).
8.- Solucin de EDTA.- Disolver con agitacin 0,9 g de EDTA en 200 mL de
H2O.
9.- Solucin precipitante.- Mezclar inmediatamente antes de su uso en
volmenes iguales de la solucin de EDTA y cido meta-fosfrico.

Extraccin
Extraccin del cido ascrbico mediante cido
meta-fosfrico, en donde el cido ascrbico
reduce el indicador de oxido-reduccin 2,6diclorofenol-indofenol, eliminando el color azul
inicial del compuesto en estado slido en
solucin neutra y alcalina; la solucin en medio
cido es de coloracin rosada y se reduce al
derivado leuco, incoloro, el cido ascrbico se
oxida a cido dehidroascrbico, lo cual permite
su determinacin por volumetra oxidimtrica

Solucin estndar
2,6-dicloro fenol-indo fenol sal sdica p.a.

Disolver 0,0625 de sal sdica en 50 mL de

H2O en un matraz volumtrico de 250 mL
al cual se le adiciona previamente 0,0525 g
de NaHCO3 grado reactivo. Agite
vigorosamente, cuando el colorante est
disuelto, diluya a 250 mL con H2O. Filtrar a
una botella mbar utilizando el papel filtro.
Guardar bajo refrigeracin.

Valoracin del ttulo de la solucin de

2,6 diclorofenol-indofenol sal sdica
Transfiera 2,0 mL de solucin estndar Acido L(+) ascrbico a cada

uno de los 3 matraces erlenmeyer que contienen 5 mL de la

solucin precipitante cada uno.
Empleando una bureta de 25 mL graduada en 0,05 mL y con una
llave de vidrio o tefln, titular rpidamente con la solucin estndar
de indofenol hasta obtener una coloracin rosada plida que
persista por 5 segundos.(Cada titulacin debe requerir
aproximadamente 15 mL, y debe corroborarse dentro de 0,1 mL).
Titule 3 blancos compuestos de 7 mL de solucin precipitante ms
15 mL de H2O. El blanco promedio es 0,1 mL.
Calcule el equivalente del colorante indofenol (F), equivalente a
cido ascrbico de un mL de la solucin estndar de indofenol.
mL DFIF de la titulacin del estndar de cido ascrbico - mL DFIF
de la titulacin del blanco = mL DFIF equivalente a 2 mg de cido
ascrbico (A)

Productos sin o con poco almidn, Ej.leche en polvo

Preparacin de la porcin de ensayo.

Pesar 10 g con una precisin de 0,1 g una cantidad del

producto a analizar que contenga aproximadamente 5 a

10 mg de cido ascrbico en un matraz de 100 mL con
H2O.
Pipetear 20-40 mL de la disolucin y un volumen igual
de la solucin precipitante a un vaso de precipitado de
125 mL. Designar el volumen como v y el de la
disolucin de la muestra como E.
Mezclar y centrifugar a 5.000 rpm por 5 - 10 min.
Filtrar el sobrenadante utilizando papel filtro.
Designar al filtrado como la solucin de ensayo. La
preparacin debe realizarse inmediatamente antes de la
determinacin.

Productos heterogneos

Ej. verdura, fruta

Homogeneizar una muestra de 50 a 100 g
con un volumen de cido meta-fosfrico
de 10% representando 1/5 del volumen
total es decir 50 mL de cido metafosfrico para un matraz de 250 mL y
enrasar con H2O destilada.
Centrifugar y/o filtrar la solucin obtenida
sobre un filtro plegado.

Valoracin
Pipetear tres alicuotas de 10 mL, de cada solucin de
ensayo (V), llevar cada una de las alicuotas a matraces
erlenmeyer separados y titular con el DFIF (X).
En forma similar, titular 2 blancos compuestos cada uno
de 10 mL de la solucin precipitante y 10 mL de H2O.
Adems agregu un volumen de H2O equivalente a los
mL de la solucin estndar de indofenol usados en la
titulacin de la solucin de ensayo.
Titule con la solucin estndar de indofenol hasta el
mismo color del punto final observado en la titulacin de
la alcuota estndar (B). El color rosa debe permanecer
a lo menos 5 segundos.

Cuantificacin e
Identificacin

Ejemplo leche en polvo

mg cido ascrbico/100 g de muestra = (X-B) x (A/E) x (V/Y) x (100/0,10)
donde
X = mL promedio obtenido en la titulacin de ensayo;
B = mL promedio obtenido de la titulacin del blanco
A = mg de cido ascrbico equivalente a 1 mL de
solucin estndar de indofenol
E = volumen de la muestra disuelta
V = volumen de la muestra de ensayo
Y = volumen de solucin de ensayo titulada = 10 mL
(100/0,10) = factor para expresar el contenido en 100 g de
producto final.

Expresin de Resultados.
Expresar el contenido de cido ascrbico en mg /100 g de producto final.

Parmetros
Sodio

Hierro

cido Ascrbico

Selectividad

Buena

Buena

Relativa (valoracin visual

oxidimtrica)

Linealidad

0,9968

0,9995

NA

Rangos de linealidad

0,6-3,0 ppm - 0,2-1,5 ppm

0,5-5,0 ppm

NA

Repetibilidad

0,01

0,02

NA

Reproducibilidad

0,1

0,2

NA

Repetibilidad

4%

2,8

0,7%

Reproducibilidad

15%

6,5

Entre analistas
No exceder de 1,2 mg/50mg/100g

Exactitud
(Recuperacin)

111-106 %

100-104%

LD

Menor a 0,2 ppm

0,11

0,25 mg

LC

Mayor a 0,2 ppm

0,38

1,5 mg

0,995

% CV Sistema

% CV Mtodo

Sensibilidad

Control de Calidad
Se efectuarn controles para comprobar la validez de

los ensayos realizados con el mtodo analtico recogido

en este procedimiento.
Nivel I:
Ensayos de intercomparacin, utilizacin de
materiales de referencia certificados y patrones de
referencia certificados, segn disponibilidad.
Nivel II: Materiales de referencia con o sin certificacin
externa y muestras fortificadas por el analista en la
validacin.
Nivel III. Durante el desarrollo de la serie de trabajo se
incluye:
Control de blanco al inicio de las lecturas
Control de estndar de concentracin conocida
Repeticin del estndar como control por cada diez
muestras.