EL MICROAMBIENTE INMUNE EN LA

LEISHMANIASIS CUTNEA
M.N. JABBOUR,1 G. ISSA,1 K. CHARAFEDDINE,1 Y. SIMAAN,2 M. KARAM,2 H.
KHALIFEH,3 R. HABIB,4 I. KHALIFEH1,*

28 OCTUBRE DE 2014

Dra. Patricia Patio Guinand

INTRODUCCIN
3 formas clnicas de leishmaniasis:
Cutnea, Mucocutnea, Visceral
Parsito: protozoario
Vector: flebtomo
LEISHMANIASIS CUTNEA 2 formas
Viejo mundo: sur de Europa, Medio oriente, Asia y frica
Afganistn, Siria, Irn.

Nuevo Mundo: latinoamrica

Incidencia: 75/100 000 casos

Vector no slo se ha encontrado en reas endmicas

reas no endmicas:
Cambios climticos, traslado de mascotas, alteraciones ambientales
Phlebotomus perniciosus, Phlebotomus neglectus

INTRODUCCIN
LEISHMANIASIS CUTNEA
Leishmaniasis cutnea aguda: menos de 1 ao
Leishmaniasis crnica: ms de 1 ao
Tratada parcialmente o mal tratada, resistente, recurrente o recidivante

Clulas Lagherhans:
Clulas presentadoras de antgeno derivadas de la MO
Expresan receptores: adenosin trifosfato y CD1a
CD1a-Lagherhans: representan del 2 4% clulas

epidrmicas. Son raras en la dermis

Alteraciones de CD1 han sido descritas en Leishmaniasis
cutnea
Disminucin del receptor CD1a descrito en LC
Leishmania tropica, Leishmania braziliensis guayanesis

INTRODUCCIN
Amastigotes de leishmania localizados intracitoplasmtico

dentro de macrfagos y clulas de Langerhans expresan

CD1a
Clulas inflamatorias en LC:
Clulas T: CD4:CD8 radio 1,05
Macrfagos
NK
Granulocitos

Se ha identificado disminucin gradual de Clulas de

Largerhans CD1a en LC
No existe una correlacin definida entre la distribucin de
expresin de CD1a entre los ndices parasitarios y los
patrones de Ridley

INTRODUCCIN
PATRONES DE RIDLEY: patrones histolgicos descritos

para la Leishmaniasis cutnea

I: infiltracin drmica difusa sin necrosis
II: infiltracin drmica en parches
III: infiltracin drmica difusa con necrosis
IV: formacin temprana del granuloma
V: formacin de granuloma epiteliode

OBJETIVO
Evaluar la expresin de CD1a y los infiltrados

inflamatorios dentro de las lesiones agudas de

leishmaniasis cutnea, en asociacin con los ndices
parasitarios y los patrones de Ridley
Objetivo adicional
Determinar si la inmunoexpresin CD1a por amastigotes de

Leishmania es un hallazgo nico in vivo o persistentemente

presente dentro de los promastigotes de Leishmania presente en
los cultivos

MATERIALES Y MTODOS
SELECCIN DE CASOS Y CLASIFICACIN

HISTOPATOLGICA
Biopsias de pacientes diagnosticados con LC
American University of Beirut Medical Center between 1992 and 2013
Seleccionados en base a la disponibilidad de tejido incluido en parafina

para cada patrn correspondiente Ridley

33 biopsias por punch interfase piel sana piel lesional
31 Leishmania tropica 2 Leishmania major
NMERO DE CASOS

PATRN
RIDLEY

14

BAJO (0 2)

11

MEDIO (3 4)

ALTO (5 6)

NMERO
CASOS

NDICE
PARASITARIO

MATERIALES Y MTODOS
INMUNOHISTOQUMICA
Tejidos de piel parafinados fijados con formol
Tejidos de lesiones de LC y tejido sano de mama obtenido de
ciruga plstica para los controles
Sistema de tincin automtica
Se utilizaron anticuerpos contra: CD1a, CD68, CD3, CD4, CD8,
CD20 y CD138
Clulas de Langerhans CD1a-se cuantificaron por mm en el
epidermis y dermis.
Los remanentes fueron cuantificados de acuerdo a un sistema de
clasificacin de 4 niveles
0 (0-4%); 1 (5-24%); 2 (25- 49%); 3 (50-74%) y 4 (75-100%)

MATERIALES Y MTODOS
CULTIVOS DE LEISHMANIA
L. Major se cultivaron a 22 25 C en un medio monofsico
estndar y se subcultivaron semanalmente.
El medio de cultivo se realiz de un caldo suplementado con suero
bovino fetal al 20%, 100 IU / ml de penicilina y 100 IU / ml de
estreptomicina
La citologa se prepararon centrifugando la muestra a 200 g
durante 10 min
El sobrenadante se descart, mientras que el concentrado se
coloc entre dos papeles de filtro, para producir celda citolgica
incluida en parafina

MATERIALES Y MTODOS
ANLISIS ESTADSTICO
Chi-cuadrado y rago Mann-Whitney se utilizaron para anlisis
univariado en el caso de variables categricas y continuas
respectivamente.
Relacin entre los recuentos CD1a (epidrmico, drmica y total) y
el patrn de Ridley o ndice parasitario se realiz mediante anlisis
de la varianza
P inferior a 0,05 siempre se utiliz para indicar la significancia
estadstica
SPSS versin 21.0 se utiliz para el anlisis estadstico

RESULTADOS
HALLAZGOS CLNICO- PATOLGICOS
Edad promedio del diagnstico 15 aos
Rango: 10 20 aos

Radio hombre:mujer 2,5:1,4

Duracin enfermedad en piel: 4 meses aprox
Rango: 4 6 meses
Tamao de la lesin: disminuyo ligeramente del

ndice parasitario (0-2) al ndice parasitario (56) por una pequea diferencia de 1 am
Representacin histolgica de patrones de
Ridley
A y B: Patrn=2 ndice parasitario=4
C y D: Patrn=3 ndice parasitario=3
E y F: Patrn=4 ndice parasitario=6
G y H: Patrn=5 ndice parasitario=5

RESULTADOS
EXPRESIN DE CD1a Y CD68 EN LC
Anlisis de expresin de CD1a-Langerhans en los diferentes CL
Patrones Ridley vs control de tejido normal de la piel revel
CD1a epidrmicos disminuidos en comparacin con tejidos de piel lesional

25 clulas / mm2 frente a 400 clulas / mm2 en la piel de control.

En la dermis estaban aumentados en 35 clulas / mm2 vs 0 a 2 clulas /
mm2 en el tejido de la piel de control (P <0,001).
No hubo diferencia significativa entre los patrones de Ridley y el

nmero de CD1a en epidermis y dermis (P> 0,05)

RESULTADOS
EXPRESIN DE CD1a Y CD68

EN LC

Control

IP: 1

Se encontr una relacin inversa

entre el ndice parasitario y la

expresin epidrmica y drmica de
CD1a (P <0,001). A raz de un
aumento en el ndice parasitario
Si aumentaba el ndice parasitario
disminua la cuenta de CD1a
De (0-2) a (5-6), la expresin total de

CD1a disminuy de 60 clulas / mm 2 a

4 clulas / mm2 (P <0,001)
Se observo una captacin uniforme,

intensa y difusa de CD1a y CD68 por

los amastigotes.
Mayor aumento como expresan CD1,
CD68

IP: 3

IP: 6

RESULTADOS
DISTRIBUCIN DE LAS CLULAS

INFLAMATORIAS EN LC
Expresin difusa de CD3 y CD68 (Fig. 5a-c).
CD68: elevado en patrones de Ridley 4 y 5

resultado que concuerda con los granulomas

observados en tales patrones (Fig. 5c).
Se observaron los linfocitos T CD3 para formar un
anillo
En el patrn de Ridley 3, se observ la expresin

de clulas plasmticas CD138 (Fig. 5d).

CD4 Y CD8 patrn de tincin leve. (<25% de
todas las clulas) en todos los patrones de
Ridley
Se observ una fraccin de minuto de dispersos
CD20 (+) las clulas B.
En general, no hubo diferencia significativa en
CD3, CD68, CD4, CD8, CD20 y la expresin de
CD138 a travs de los patrones de Ridley = (25) (P> 0,05).

DISCUSIN
CLULAS DE LANGERHANS
Correlacin inversa entre el ndice parasitario y la expresin de

CD1a en la fase aguda de LC

Durante la interaccin celular el antgeno leucocitario clase I y el CD8
de la clula T madura CD1a desempea un papel fundamental
mediante la interaccin con la molcula HLA de clase I
En modelos murinos de CL,
Las clulas de Langerhans epidrmicas, junto con los macrfagos,

ingieren parsito L. Major, transportan el antgeno, migran y se diferencian

en clulas presentadoras antgeno dentro de los ganglios linfticos que
inducen una respuesta de hipersensibilidad retardada por T CD8
El antgeno del parsito persiste dentro de las clulas de Langerhans

permitiendo la estimulacin continua de las clulas T, proporcionando

inmunidad contra la infeccin

DISCUSIN
CLULAS DE LANGERHANS
2 mecanismos para explicar la disminucin de CD1a
Disminucin de los receptores de CD1a:
Amastigotes de Leishmania (dentro de los macrfagos) expresan CD1 y los
promastigotes cultivados no
Disminucin en la poblacin de las clulas presentadoras de antgeno

secundaria a la migracin de los ganglios linfticos

DISCUSIN
CLULAS T REGULADORAS EN LA LC
Alteracin de la respuesta anti Leishmania est lograda por la
reduccin de las clulas de Langerhans produciendo lesiones ms
pequeas.
Pool clulas LC:
75% Clulas T reguladoras DOBLE NEGATIVAS (CD3+CD4-CD8-)
25% clulas T involucradas en la produccin de citoquinas

inflamatorias: IFN, TNF, y antiinflamatorias: IL-10

Este estudio Poblacin significativa de clulas doble negativas

DISCUSIN
RESPUESTA INMUNITARIA CON BAJO NDICE

PARASITARIO
Inicialmente: clulas de Langerhans asumen el papel de clulas

presentadoras de antgeno y secretoras de citocinas:

IL 12 activar clulas CD4 activas respuesta Th1
Activacin CD4 IFN, IL-17, IL-4 induce expresin de molculas

CD86, CD80 inhibicin clulas T doble negativas que anulan

respuesta Th1

IP bajo favorece respuesta Th1

Leishmania se mantiene dentro de las clulas dendrticas

DISCUSIN
RESPUESTA INMUNITARIA CON ALTO NDICE

PARASITARIO
Leishmania inhibe la maduracin, diferenciacin y migracin de las

clulas dendrticas
Disminucin de CD1 atenuacin de la liberacin de IL-12, IL-40
y atenuacin de la respuesta th1
Disminucin de IFN, CD80, CD86 no inhiben los linfocitos T

citotxico y las clulas T doble negativas

Produce: atenuacin Th1 y aumento de las clulas T reguladoras
El paso de la infeccin de la fase aguda a la fase crnica, se asocia con,
diminucin de CD1 pasando de un cambio de respuesta Th1 a Th2.

DISCUSIN
TARGETING LA RESPUESTA INMUNE
El objetivo de estudiar los mecanismos inmunes es el potencial
terapeutico inmunolgico vacuna o inmunomoduladores
Vacunas: proporcionan inmunidad celular contra el parsito, lo que

resulta aumento de IFN, IL-17, IL-2, TNF y disminucin de IL-4

Pulsos de clulas dendrticas con antgenos de Leishmania aumentan la
IL-12

CONCLUSIONES
Relacin inversa entre la expresin de CD1a por las

clulas de Langerhans y el ndice parasitario durante la

aguda CL.
Esto va acompaado de un aumento de la clulas doble

negativas T-reguladoras, inhibiendo la respuesta Th1 y la

memoria a largo plazo
Compleja interaccin clula-clula entre clulas de

Langerhans, clulas T-reguladoras y clulas T efectoras

representa posibles blancos en inmunoterapia en la LC
refractaria a tratamiento