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protenas
Prof. Dr. Francisco Prosdocimi
Caractersticas qumicas
dos aminocidos
Prof. Dr. Francisco Prosdocimi
Os aminocidos
Os aminocidos
presentes nas
protenas so
ismeros L
Carbo
no alfa
A biologia canhota
Glicina no
tem isomeria
ptica
Grupo R apolar e
alifticos
Aminocidos apolares e hidrofbicos
Ligaes de Van der Waals
Ala, Val, Leu, Iso
Interaes hidrofbicas
Pro
Iminocido, menor flexibilidade estrutural
Grupo R aromticos
Aminocidos hidrofbicos
Tirosina pode formar pontes de
hidrognio com a gua
Modificaes pstraducionais
Fosforilao do OH
da tirosina
Fenilalanina
Mais apolar
Grupos R polares, no
carregados
Solubilidade intermediria em gua
Serina e treonina
Grupos hidroxil
Asparagina e glutamina
Grupo amida
Cistena
Grupo sulfidril
Ligaes dissulfeto
Grupos R carregados
Aminocidos bsicos
Carga positiva
Lisina, segundo grupo amino
Arginina, grupo guanidina
Histidina, grupo aromtico
imidazol
Aminocidos cidos
Carga negativa
Possuem segundo grupo
cido carboxlico
Aminocidos
incomuns
Modificaes ps-traducionais
4-hidroxiprolina
5-hidroxilisina
6-N-metil-lisina
Gama-carboxiglutamato
Fosforilao de resduos
Selenocistena
Selnio ao invs de enxofre na Cys
adicionado durante a traduo por
mecanismo especfico e regulado
pH e pKa
Constantes de dissociao
dependem do pH do meio e so
diferentes para diferentes molculas
Ionizao
< pH; > [H]+
estado no-ionizado
Aminocidos so
ionizveis
Substncias
anfteras:
possuem natureza
dual
Podem funcionar
assim como
cidos ou bases
Doam ou recebem
prtons
Titulao de um
aminocidos
pKa: tendncia de um
grupo fornecer um
prton ao meio
Aminocidos podem
perder at 2 prtons
para o meio
Concluso: a funo
das protenas depende
do pH ao qual esto
submetidas
Curvas de titulao
predizem a carga eltrica
dos aminocidos
Alguns aminocidos podem ter tomos
ionizveis tambm em sua cadeia lateral
Peptdeos e protenas
Prof. Dr. Francisco Prosdocimi
Polipeptdeo
>Insulina [Homo sapiens]
MALWMRLLPLLALLALWGPDPAAAFVN
QHLCGSHLVEALYLVCGERGFFYTPKT
RREAEDLQVGQVELGGGPGAGSLQPLA
LEGSLQKRGIVEQCCTSICSLYQLENY
CN
Peptdeos tbm so
ionizveis
Ou seja,
possuem curva
de titulao
caracterstica
Funcionam em
faixas de pH
timas
Uso de
aminocidos
Varia bastante entre
as protenas
No permite predizer
com preciso o
comportamento
molecular da
molcula
Trabalhando com
protenas
Prof. Dr. Francisco Prosdocimi
Afinidade da protena
definido tambm pelo
pH
Cromatografia de
afinidade
Adiciona-se matriz
da coluna algum tipo
de molcula
ligante da molcula
de interesse
Molcula ligadora de
ATP; adiciona-se ATP
matriz
Elui-se com soluo
de ATP
Eletroforese -Histrico
1955, Smithies
1967, Loening
Vou ali
correr um
gelzinho e
j volto
Tenho que ir
seno vou perder
meu gel
Eletroforese
Movimento de partculas
dispersas num fludo sob
influncia de um campo eltrico
uniforme
DNA, carga negativa
Tem tendncia a se dirigir ao
polo positivo quando sujeito a
um campo eltrico
Eletroforese, etapas
1.Preparao do gel
2.Aplicao das amostras
3.Eletroforese
4.Colorao
5. Anlise dos resultados
Preparao
do gel
Horizontal X Vertical
Agarose X Poliacrilamida
Definio do mapa
das amostras por
canaleta
Corrida do gel
Aplicao do campo
eltrico
Fonte eltrica gera
fluxo de ons atravs
da soluo tampo
Terminais positivo e
negativo
Tempo adequado,
seno o DNA sai do gel
Melhor resoluo
Eletroforese de um
resultado de cromatografia
O marcador de peso
molecular
Comprado de uma empresa
Possui protenas de peso molecular bem conhecido
Geis
bidimensionais
Corre-se o gel normalmente
em uma dimenso... E
depois vira-se-o e corre-se
em outra dimenso
Cada ponto representa
aproximadamente uma
protena original presente na
amostra
Maiores gis do maiores
resoluo
Protenas no separadas
podem ser quantificadas
Deve-se saber
qual o substrato
que a enzima
usa
Deve-se poder
medir o produto
da ao
enzimtica
Uma unidade
de enzima
digere 1mol de
substrato por
minuto a 25C
As estruturas
primrias das
protenas so
conhecidas
Sequenciamento de
peptdeos
Degradao de Edman
Marca e remove apenas o
resduo N-terminal
Mtodo ineficiente,
permite sequenciamento de
pequenas pores das
molculas
Sequenciamento do RNAm
muito mais simples e
preciso; permite sequenciar
protenas enormes como a
titina
Produo de peptdeos
Purificao a
partir de tecidos
Engenharia
gentica
Sntese qumica
direta
Alinhamento de
sequncias
Os organismos
possuem, em grande
medida, as mesmas
protenas (ortlogas)
Derivam do ancestral
comum entre os
organismos
O alinhamento permite
que identifiquemos as
pores mais
importantes
(conservadas) da
protena
Evoluo molecular
Quanto mais similares as
sequncias das protenas dos
organismos, mais prximos eles so
evolutivamente
Concluses
Diferentes caractersticas qumicas das cadeias laterais
dos aminocidos definem caractersticas de peptdeos e
protenas
Os resduos de aminocidos so ligados s centenas
ou milhares para formar peptdeos e protenas
As protenas podem ser modificadas pstraducionalmente
As protenas podem ser separadas por carga, tamanho e
afinidade e assim estudadas isoladamente
cromatografia e eletroforese
As protenas podem ser sequenciadas e sua estrutura
primria (seq. de aminocidos conhecida)
As sequncias das protenas so excelentes marcadores
da evoluo da vida na terra