INSTITUTO POLITCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS

BIOLGICAS
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGA
LABORATORIO DE ECOLOGA
MICROBIANA

EQUIPO 3 SEC 1
AGUIRRE CARBAJAL ITZEL
ALEJANDRA
GARCA FLORES MIGUEL ANGEL

EQUIPO 3 SEC 2
ANGUIANO AVIA
FERNANDO
GARCA URIBE TANIA
NAYELI

DETERMINACIN MICROBIOLGICA

ANLISIS DE LA CALIDAD DEL AGUA

II

OBJETIVO
En una muestra obtenida de un cuerpo de
agua determinar en base a la norma oficial
mexicana de anlisis NMX-AA-042-1987el
nmero ms probable (NMP):
Microorganismos coliformes totales
Microorganismos coliformes fecales
termotolerantes
Escherichia coli presuntiva
.

ANLISIS MICROBILOGICO DEL AGUA

AGUA

ENTEROPATGEN
OS

Vehculo de
microorganismos
patgenos causantes de
enfermedades.

BACTERIAS
Salmonella
Shigella
Vibrio
PROTOZOARIO
S
Entamoeba
histolytica
VIRUS
Hepatitis
Polio

Causantes de
diversas
enfermedades
Dificultad en
su aislamiento

COLIFORMES

Escherichia
coli
Klebsiella
spp
Citrobacter
sp
Enterobact
er sp

Bacilos cortos
G(-)
Aerobios o anaerobios
facultativos
No esporulados
Fermentadores de
lactosa

Productores de gas

TABLA 1.CRITERIOS ECOLGICOS DE LA CALIDAD DEL AGUA

FUENTE

NMP*/100mL

Abastecimiento para potabilizacin

de agua

1000

Riego agrcola

1000

Agua dulce

<200

Agua Marina

<200

Recreativo en contacto directo

<200

Agua potable

<2

De acuerdo a estos criterios la muestra obtenida

de las cascadas de Atlihuetzia que es clasificada
como agua dulce debe presentar valores
menores a 200 UFC/100 mL

*de organismos coliformes totales Gaceta Ecolgica. Enero de 1990. CE-

DETERMINACIN DEL NMERO MAS PROBABLE (NMP)

DE COLIFORMES TOTALES, COLIFORMES FECALES
(TERMOTOLERANTES) Y Escherichia coli PRESUNTIVA

Se basa en la Norma Mexicana de anlisis. NMX-AA042-1987

Mtodo para la deteccin y enumeracin en agua de
los m.o. antes mencionados mediante el cultivo en
un medio liquido en mltiples tubos y el clculo de
sus NMP
Es aplicable para todo tipo de agua
Las pruebas usadas en la deteccin y confirmacin
puede verse como parte de una secuencia continua.
De acuerdo al uso que se dar a la muestra ser el
nmero de pasos.

FUNDAMENTO

La determinacin de microorganismos
coliformes totales por el mtodo del
Nmero ms Probable (NMP), se
fundamenta en la capacidad de este
grupo microbiano de fermentar la
lactosa con produccin de cido y gas
al incubarlos a 35C 1C durante 48
h., utilizando un medio de cultivo que
contenga sales biliares.

PRUEBA PRESUNTIVA

37 C / 24 y 48
hrs,

Inoculacin de alcuotas
de la muestra, diluida o
sin diluir, en caldo
lactosado

Turbidez y
produccin de gas
son positivos para
coliformes

CALDO LACTOSADO

Es un caldo rico en nutrientes, que no contiene algn

tipo de inhibidor, contiene la siguiente formulacin:
FRMULA (en gramos por litro)
Extracto de carne.........3.0. Fuente
de C y
Peptona............5.0.
N2

Lactosa...........5.0.C ---- fermentable

Usado como prueba presuntiva de la presencia de

bacterias del grupo coliforme en agua, se usa con
concentracin doble debido a que es una muestra
muy contaminada, para asegurar el crecimiento de los
microorganismos presentes en la muestra

Como producto de la fermentacin de la lactosa se produce

finalmente acido y gas, evidenciado en la campana de
Durham.

PRUEBA CONFIRMATIVA
A 37 por 48
hrs

Crecimiento con
produccin de gas es
+ para coliformes
totales.

La resiembra de los
tubos positivos de la
prueba presuntiva en
tubos con caldo BLVB

44C por 48
hrs
En el mismo medio

Desarrollo con
produccin de gas es
+ para

Se emplea como medio de cultivo

caldo lactosa verde brillante bilis
por ser selectivo ya que solo
permite el desarrollo de aquellos
microorganismos que toleran
tanto las sales biliares como el
verde brillante.

CALDO TRIPTONA
Formula(g/L)
TRIPTONA .....10.0
CLORURO DE SODIO ....5.0
El triptfano es un a.a que puede ser oxidado por ciertas bacterias
para
formar 3 metabolitos, el indol, escatiol, y el indolacetico
La triptona presenta alto contenido en triptfano, el cual
es el sustrato utilizado por los microorganismos para la produccin
de indol, cido pirvico y amonaco.

Reactivo de
Kovacs
p-dimetilamino benzaldehdo
5g
Alcohol amlico 75
ml
HCl concentrado 25
ml
+

Complejo colorido
rojizo

PRUEBA COMPLETA

De tubos positivos de
BLVB sembrar por
estra cruzada en EMB

MEDIO EMB

FORMLA
Peptona ..........................................10.0.
Lactosa.............................................5.0.
Sacarosa............................................5.0.
Fosfato Di potsico ............................2.0.
Eosina.............................................0.4.
Azul de metileno.............................0.065.
Agar ................................ 13.5.
pH final: 7.2 0.2

FUNDAMENTO

Medio selectivo y diferencial.

Azul de metileno y eosina inhiben Gram
positivos
Lactosa y sacarosa permiten desarrollo de
Enterobacterias que los utilizan.
Escherichia coli colonias verde metlico
Lactosa positivo colonias rosas claro con
centro negro
Lactosa negativo colonias incoloras

FILTRACIN A TRAVS DE MEMBRANA

En base a la Norma mexicana de anlisis

NMX-AA-102-1987 se determina el nmero
de coliformes totales presentes en el agua
mediante la filtracin de volmenes
especficos de la muestra a travs de filtros
de membrana. Estn compuestos de
steres de celulosa, con poros de 0,45 mm
de dimetro que retienen los coliformes
totales y otras clases de bacterias
presentes en la muestra.

TABLA 2.-VOLUMEN DE AGUA A

ANALIZAR

Se utiliza el Medio Endo para el

recuento de coliformes totales. El lauril
sulfato y desoxicolato que forman parte
de la frmula del medio permite crecer
a los coliformes lactosa positivo pero
inhibe el crecimiento del resto de
bacterias acompaantes.

Las colonias lactosa positivo se

colorean de rojo por la liberacin de
fucsina del sulfato de fucsina. Las
colonias deE. coliy de los coliformes
muestran generalmente un brillo
metlico.

GRFICA 1.- RESULTADOS NMP SEC 1

2500
2000
1500
1000
500
0

NMP organismos
coliformes totales
NMP organismos
Coliformes fecales
NMP Escherichia coli
Presuntiva
NMP Escherichia coli
completa

GRFICA 2.- RESULTADOS NMP SEC 2

2500

2000

NMP Organismos
Coliformes Totales/100mL
NMP Organismos
Coliformes Fecales/100mL
NMP Escherichia coli
Presuntiva/100mL

1500

1000

500

0
1

TABLA 3.-RESULTADOS SECCIONES 1 Y 2

Nmero ms probable de Microorganismos

Coliformes Totales en Muestras de Agua
Equpo

Nmero
caracterstico
Sec 1

NMP organismos
coliformes
totales /100mL
Sec 1

Nmero
caracterstico
Sec 2

NMP
Organismos
Coliformes
Totales/100mL
Sec 2

3/3/3

2400

3, 3, 3

2400

3/3/3

2400

3, 3, 3

2400

3/3/3

2400

3, 3, 3

2400

3/3/3

2400

3, 3, 3

2400

3/3/3

2400

3, 3, 3

2400

3/3/3

2400

2, 2, 0

21

3/3/3

2400

3, 3, 3

2400

TABLA 4.-NMERO MS PROBABLE DE

MICROORGANISMOS COLIFORMES FECALES
EN MUESTRAS DE AGUA
Equipo/Estacin

Nmero
caracterstico
Sec 1

NMP
organismos
Coliformes
fecales /100mL
Sec 1

Nmero
caracterstico
Sec 2

NMP
Organismos
Coliformes
Fecales/100mL
Sec 2

3/3/3

2400

3, 3, 3

2400

3/3/3

2400

3, 3, 2

1100

3/3/3

2400

3, 3, 3

2400

3/3/3

2400

3, 3, 3

2400

3/3/3

2400

3, 3, 3

2400

3/3/3

2400

3, 3, 3

2400

3/3/3

2400

3, 3, 3

2400

TABLA 5.-NMERO MS PROBABLE EN PRUEBA

PRESUNTIVA PARA ESCHERICHIA COLI EN
MUESTRAS DE AGUA

Nmero
caracterstico
Sec 1

NMP Escherichia
coli Presuntiva /
100mL
Sec 1

Nmero
caracterstico
Sec 2

NMP Escherichia coli

Presuntiva/100mL
Sec 2

3/3/3

2400

3, 3, 3

2400

3/3/3

2400

3, 3, 3

2400

3/3/3

2400

3, 3, 3

2400

3/3/3

2400

3, 3, 3

2400

3/3/3

2400

3, 3, 3

2400

3/3/3

2400

3, 3, 3

2400

3/3/3

2400

2, 1, 0

15

Equipo/Estacin

TABLA 6.-PRUEBA COMPLETA PARA ESCHERICHIA COLI

EN MUESTRAS DE AGUA EN AGAR EOSINA AZUL DE
METILENO
Equipo/ Estacin
Prueba completa EMB Sec 2
1

10
1
0.1
10
1
0.1
10
1
0.1
10
1
0.1
10
1
0.1
10
1
0.1
10
1
0.1

+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+

TABLA 7.-PRUEBA COMPLETA PARA ESCHERICHIA

COLI EN MUESTRAS DE AGUA.

Sec 1
Equipo

Nmero caracterstico

NMP Escherichia coli

completa /100mL

3/3/3

2400

3/3/3

2400

2/3/3

53

2/3/3

53

1/3/3

29

3/2/1

150

3/3/3

2400

CONCLUSIONES
En base a las normas mexicanas de
anlisis NMX-AA-042-1987, NOM-127-SSA11994 y a los criterios ecolgicos de la
calidad del agua publicados en la Gaceta
ecolgica de Enero de 1990 CE-CCA001/89 la calidad microbiolgica del agua
muestreada es mala superando por mucho
los niveles mximos estipulados, por lo
que, no es apta para consumo humano u
animal, sin embargo, si es tratada puede
ser utilizada como agua de riego.

BIBLIOGRAFA

Gaceta Ecolgica Enero 1990 Crterios

Ecolgicos de la Calidad del Agua CECCA-001/89
Atlas, R.M. & Bartha, 2003. Ecologa
microbiana. Fundamentos y aplicaciones.
Addison Wesley Massachusets.
http://
www.salud.gob.mx/unidades/cdi/nom/127
ssa14.html
http://www2.inecc.gob.mx/publicaciones/
gacetas/191/criterios.html