HEMOPROTEINAS

GERMANIA MICOLTA S
2010

MIOGLOBINA

 La Mb es extremadamente compacta, compuesta en el 75% de

hlices
Cuatro de estas hlices terminan en Pro
Los aminocidos interiores son en la mayora no polares
Los 2 nicos aminocidos polares encontrados internamente son
histidinicos (una proximal y otra distal), las cuales conforman el sitio
activo para enlazar el dioxgeno
El polipptido de una mioglobina en forma comprimida corresponde a
8 -hlices diestras designadas desde A hasta H, conectadas por
cortas regiones no helicoidales
La estructura terciaria de la Mioglobina es tpica de una protena
globular soluble en agua

 La importancia fisiolgica de la mioglobina se relaciona con su

habilidad para enlazar oxgeno molecular.
La mioglobina es una protena hemo monmero encontrada
principalmente en el tejido muscular donde sirve como un sitio de
almacenaje intracelular para oxgeno.
Durante perodos de ausencia de oxgeno, la oximioglobina suelta
su oxgeno enlazado, el cual es usado para propsitos metablicos.
Los primeros investigadores en resolver la estructura de la Mb en
la forma deoxymioglobina fue J. C. Kendrew y H. C Watson a los
inicios de 1966. La deoxy-hemoglobina en su primera versin a
inicios de 1975 propuesta por G. Fermi, fue declarada obsoleta, la
cual en 1984, fue publicada por el grupo de G. Fermi como una
estructura cuaternaria

Mioglobina de esperma de ballenaTomado de Biological Inorganic Chemistry. An

introduction. A. Crhiston

La mioglobina es una protena Hemo monmera, ubicada en el tejido

muscular donde acta como un sitio intracelular para almacenar oxigeno.
Cuando se presenta una falta de oxigeno la oximioglobina lo libera siendo
usado en procesos metablicos

 Cada mioglobina contiene un grupo prosttico hemo insertado en el

bolsillo hidrofbico de la protena. Cada residuo hemo contiene un
in ferroso Fe2+. El oxigeno trasportado a travs del torrente
sanguneo en los vertebrados y en muchos invertebrados por la
hemoproteina se enlaza directamente al hierro ferroso.
En la forma deoxy de la Hb y Mb, el FeII es de alto spin y su estado
fundamental tiene un S = 2 , lo que indica que tiene 4 electrones
desapareados. La presencia de electrones pareados en lugar de los
desapareados, se favorece por un rpido cambio a 3O2 con un S =1.
La forma oxy de la Hb y Mb es diamagntica ( S = 0) cuando se
coordina en forma terminal el O2 en un arreglo doblado. La
asignacin del estado de oxidacin es explicada por 2 grupos de
investigadores: Pauling- Corell y Weiss

Forma deoxy
(paramagntico)
S= 2

FeII (d6) alto spin

Pauling

Weiss

Forma Oxy
(diamagntico)
S=0

Fe

Fe

FeIII

O
O

FeIV

O
O

FeII

Fe

Fuertemente
antiparalelo
Acople spin- spin

FeIII (d5) bajo spin

+ 2O2 (enlazado)

FeII (d6) bajo spin

+ 1O2 (enlazado)

Fe

O
O

FeIII

Representacin de OM

Fe

Fe

dx2-y2

dz2

dxy

dxy

dxy

dxz dyz

dxz dyz

dxz dyz

O2
Modelo de Pauling

Fe

O2
Modelo de Weiss

Las interacciones hidrofbicas entre el anillo tetrapirrolico y el grupo R del

aminocido hidrofbico sobre el interior del pliegue de la protena, estabiliza
fuertemente el hemo.
En resumen un tomo de nitrgeno de un grupo histidinico localizada sobre el
plano del anillo hemo se coordina con el tomo de hierro estabilizando la
interaccin entre el hemo y la protena. En la oximioglobina el sitio enlazante
que queda sobre el Fe, es ocupada por el oxigeno, cuyo enlace es
estabilizado por un segundo residuo de histidina.

 Las estructuras secundarias y terciarias de varias subunidades de

hemoglobina son similares, mostrando una extensa homologacin en la
composicin de aminocidos, las variaciones en la composicin de
aminocidos

existentes, imparte a las hemoglobinas oxigenadas

diferencias marcadas en las propiedades trasportadoras de oxgeno

En resumen la estructura cuaternaria de la hemoglobina ofrece una
interaccin alostrica importante fisiolgicamente entre las subunidades,
propiedad que carece la mioglobina monmera
Las curvas de oxigenacin frente a la presin de oxgeno, PO2 ,

para la

hemoglobina y mioglobina en condiciones fisiolgicas son diferentes

Cuando el oxgeno se enlaza a la primera subunidad de deoxi- hemoglobina la unin
incrementa la afinidad de las subunidades restantes por el oxigeno, generando una curva de
oxigenacin de tipo sigmoidal lo que significa que al enlazarse el primer oxigeno se facilita el
enlace del segundo, etc.

El grafico muestra la curva de la mioglobina hiperblica y la

hemoglobina sigmoidal

A valores bajos de PO2,

la mioglobina tiene
mayor afinidad por O2
que la hemoglobina

El msculo en ejercicio, el valor de PO2, es bajo, por lo que en estas

condiciones la hemoglobina cede oxigeno a la mioglobina, que
constituye la reserva de oxigeno muscular.

 Como la oxihemoglobina circula al tejido desoxigenado, el oxigeno es

descargado y la afinidad de la hemoglobina por el oxgeno se reduce.
En tejidos muy activos cuando hay presiones bajas de oxgeno, la
afinidad enlazante de la hemoglobina por O2 se reduce, permitiendo una
mxima liberacin del oxigeno al tejido
Por el contrario, la curva de oxigenacin de la mioglobina es
hiperblica, indicando la ausencia de interacciones alostericas en este
proceso
Las propiedades alostericas de la hemoglobina se presentan al
interaccionar el oxigeno con el Fe del hemo del grupo prottico y los
efectos resultantes de esta interaccin sobre la estructura cuaternaria de
la protena. Cuando el O2 se enlaza al hierro de la deoxy-hemoglobina
empuja al Fe hacia el plano del hemo.
Ya que el Fe esta enlazado a la histidina F8, este residuo tambien se
mueve hacia el plano del anillo hemo. El cambio conformacional a la
histidina F8 se transmite.

 Los cambios conformacionales en la superficie de la subunidad ofrecen un

nuevo conjunto de interacciones entre las subunidades adyacentes. Los
cambios finales incluyen el rompimiento de los puentes salinos y la
formacin de nuevos enlaces de hidrogeno y nuevas interacciones
hidrofobicas, todo lo cual contribuye a una nueva estructura cuaternaria.
Los ltimos cambios en la interaccin de las subunidades se trasmiten de
la superficie al bolsillo enlazante hemo de la segunda subunidad y da como
resultado un acceso fcil del oxigeno al hierro del segundo hemo y as una
mayor afinidad de la molcula de hemoglobina por una segunda molcula
de oxigeno.
La configuracin terciaria de afinidad baja, hemoglobina des-oxigenada
(HB) se conoce como estado tenso (T). De igual manera, la estructura
cuaternaria totalmente oxigenada (HbO2) se conoce como estado relajado
(R)

La deoxy o forma T es estabilizada por 8 puentes salinos los cuales se rompen

en la transicin a la forma oxy o estado R

Modelo para la cooperacin de las 4 subunidades en Hb: incremento de la

coordinacin de O2 favorece la transicin a mayor afinidad por O2 estructura
Relajada

0.2

0.4

0.3

Esquema de las diferencias geomtricas para los 4 estados del ambiente

hemo en las subunidades de la Hb
Tomado de Kaim and Schwederski. Bioinorganic Chemistry: Inorganic Elements in
the chemistry of life. NY. Willey 1994

El grafico muestra la curva de la mioglobina hiperblica y la

hemoglobina sigmoidal

A valores bajos de PO2,

la mioglobina tiene
mayor afinidad por O2
que la hemoglobina

El msculo en ejercicio, el valor de PO2, es bajo, por lo que en estas

condiciones la hemoglobina cede oxigeno a la mioglobina, que
constituye la reserva de oxigeno muscular.

 La curva de oxigenacin de la mioglobina revela un equilibrio simple

expresado por :

Mb + O2

k1
k-1

MbO2

K1' PO

MbO 2
saturacin

Mb total 1 K1' PO

K1 O 2
1 K1 O 2

La ecuacin de Hill describe la fraccin de las macromolculas saturadas

por el ligando como una funcin de la concentracin del ligando. Es usado
para determinar el grado de cooperacin del ligando enlazado a la enzima o
el receptor.

Ecuacin de Hill para la Mioglobina

K1' PO2 K O 2
1

Donde es la fraccin del ligando enlazado al sitio

n = coeficiente de Hill
n = 1 la reaccin no es cooperativa que es el caso de la mioglobina

Ecuacin de Hill para la Hemoglobina

n
' n
K PO2 K O2
1
n=3

El n 1 indica que existe una interaccin cooperativa entre las subunidades

de la hemoglobina
Observe, la ecuacin surge al considerar el equilibrio de disociacin de la
reaccin, donde se involucra la ley de accin de masas y se puede obtener
una constante de equilibrio para la reaccin

Compuesto Modelo

Fe(TPP)(N-MeIm)
TPP =meso tetrafenil porfirina
MeIm = N-metilimidazol

Fe(Tpiv)PP
Meso-tetraquis(,,-o-pivalamidafenil)porfirina

El grupo de Collman en los aos 1970 sintetizaron y estudiaron estos compuestos

usndolos como modelos, para resolver el problema de la forma enlazante del oxigeno.
Era importante tener sustituciones en los anillos porfirnicos para evitar que el Fe se
oxidara y la union al oxigeno se hiciera tipo puente

Se conocen otros modelos representativos para la Hb, conocidos como

canastas o bolsillos porfirnicos.
El xito de los modelos fue el de proporcionar ligandos alquil imidazoles
proximales para producir efectos estricos sobre el lado distal de la
porfirina y formar un bolsillo hidrofbico para acomplejar el oxigeno y
evitar la formacin de complejos oxo.
En resumen los investigadores lograron su objetivo
1. Modificando el imidazol para preservar el estado T (tenso)
2.

Modificar la porfirina estricamente para prevenir la adicin de un

ligando grande en la 6a posicin del Fe, colocando una muralla
protectora a la porfirina

3.

Unir el sistema penta coordinado a un soporte rgido, como silica gel,

reduciendo su movilidad y habilidad de adicionar un 6 ligando

La estabilidad de los complejos hemo-O2 son mas de tipo cintico, que termodinmico.

Tomado de Bioinorganic chemistry: A short course, 2ed. Rosett M. Roat-Malone, N.Y, John
Wiley-, 2007, p 378

Se favorece la estabilidad Hemo-O2 por:

1. Colocar el hemo en un bolsillo hidrofbico dentro de la enzima que es
inaccesible a molculas de agua y protones
2. El modo enlazante doblado del di oxigeno favorecido por la forma del bolsillo
del grupo prosttico previene la formacin de dimeros oxo.
3. La donacin enlazante del ion superoxido hibridizado sp2 al orbital vacio dz2
del Fe(II) se facilita por la orientacin doblada del di oxigeno enlazado

Existen 3 condiciones importantes que afectan a la curva de

oxigenacin de la hemoglobina:
El pH
La temperatura
La concentracin del 2,3 difosfoglicerato.

La hemoglobina no solo transporta el oxgeno, sino que se encarga del

trasporte del CO2

Transporte del CO2

Adicional a trasportar el oxigeno de los pulmones a los tejidos perifricos, la
molcula de hemoglobina juega un papel importante en el trasporte de
CO2 en la direccin opuesta.
El N terminal del grupo amino de la forma T de la hemoglobina esta
disponible para reaccionar con el CO2 y cerca del 15% del CO2 formado
en los tejidos es trasportado a los pulmones covalentemente enlazado al N
terminal del nitrgeno como carbamato
CO2 + Hb-NH2 <-----> H+ + Hb-NH-COOEn los pulmones la alta presin parcial del oxigeno favorece la formacin
de la forma R de la hemoglobina, resultando el inverso de la reaccin de
formacin del carbamato, dando la salida y exhalacin del CO2.

Efecto de la concentracin del H+

Durante la conversin de la forma T a la forma R varios grupos R sobre la

superficie de la subunidad de la hemoglobina se encuentra disponible para
disociar protones:
CO2 + Hb-NH2 <-----> H+ + Hb-NH-COO4O2 + Hb <--------> nH+ + Hb(O2)4

Las 2 ecuaciones ilustran que la conformacin de la hemoglobina y su

oxigeno enlazado son sensibles a la concentracin de Ion hidrgeno.
Este efecto se conoce como efecto Bohr en el cual, un incremento de la
concentracin del Ion hidrogeno decrece la cantidad de oxigeno enlazado
por la hemoglobina a cualquier concentracin de oxigeno (Presin parcial
del O2).

Efecto Bohr

un incremento de la
concentracin del Ion
hidrogeno decrece la
cantidad de oxigeno
enlazado por la
hemoglobina a cualquier
concentracin de oxigeno
(Presin parcial del O2).

Representacin del transporte de CO2 del tejido a la sangre con liberacin

.
de O2 al tejido
El proceso opuesto ocurre cuando el O2 tomado por los alvolos en los pulmones y se
expele CO2. El mejor mecanismo para el trasporte de CO2 a los pulmones a travs del

plasma es como HCO .

3
El H+ producido en el plasma por
la ionizacin del cido carbnico
es controlado por la solucin
tampn de (HPO 24) y protenas.
Adicionalmente algo del 15% del
CO2 es transportado de los
tejidos a los pulmones como
carbamato de hemoglobina
El CO2 de los tejidos se
transporta como gas disuelto y
como bicarbonato, producido por
la enzima anhidraza carbnica

Transporte de CO2 y efecto Bohr

Papel del 2,3-bisfosfoglicerato (2,3-BPG)

El compuesto 2,3-bisfosfoglicerato (2,3-BPG), es un potente alostrico

de las propiedades enlazante del oxigeno en la hemoglobina.
En el confrmelo desoxigenado T, hay una cavidad capaz de enlazar en
el centro de la molcula un 2,3-BPG, estabilizando el estado T.

Sntesis del 2,3-bisfosfoglicerato en eritrocitos

sustrato
representa la va de
reaccin ms rpida para
el consumo de glucosa en
eritrocitos

Note que cuando la

glucosa es oxidada por
esta va, el eritrocito
pierde la habilidad de
ganar 2 moles de ATP de
oxidacin glicolitica de
1,3-BPG a 3fosfoglicerato va la
reaccin fosfoglicerato
quinasa

Inversamente, cuando el 2,3BPG no esta disponible, o no

se enlaza a la cavidad central,
la Hb puede convertirse mas
rpidamente en HbO2

Un incremento en la H+,
incrementa la concentracin de
2,3-BPG, favoreciendo la
conversin de la forma R de la
Hb a la forma T y decreciendo la
cantidad de oxigeno enlazado a
la Hb a cualquier concentracin
de oxgeno presente.

Molculas de hemoglobina con diferencias en la composicin de sus

subunidades se conoce que poseen diferentes propiedades enlazantes
hacia el 2,3-BPG con diferentes respuestas alostericas hacia el 2,3BPG.
Por ejemplo, HbF (forma fetal de la hemoglobina) enlaza

2,3-BPG

mucho menos vidamente que la HbA (forma de la hemoglobina del

adulto) dando como resultado que

HbF en los fetos de mujeres en

embarazo enlazan oxigeno con mayor afinidad que la HbA de las

madres, as que el feto tiene acceso preferencial al oxigeno trasportado
por la madre en el sistema circulatorio

BIBLIOGRAFIA
http://www.umass.edu/molvis/tutorials/hemoglobin/index.htm JUNIO 2009