REGULACIN A NIVEL DE

PROCESAMIENTO
POST-TRANSCRIPCIONAL
Presentan:

Cataln Maya Emmanuel

Garca Ruvalcaba Dulce Elizabeth
Prez Vergara Ana Delia
Tello Garca Luis Abdas

Procesamiento
postranscripcional:
Proceso de maduracin del RNA a
travs del cual se eliminan los
intrones de un transcrito primario
para evitar que sea degradado
por enzimas una vez que salga
del ncleo.

A nivel postranscripcional, la regulacin de la

expresin de los genes eucariotas se
subdivide en:

Splicing diferencial
Diferentes sitios de poliadenilacin
Estabilidad de los mRNA
Almacenamiento de los mRNA

Splicing diferencial
Ocurre cuando un solo gen da
lugar a ms de una secuencia de
mRNA

En algunos casos, un solo transcrito

primario se empalma en ms de una
forma, y los exones internos pueden
sustituirse, aadirse o eliminarse.

Al cambiar sitios de splicing se

puede introducir un codn de
terminacin o cambiar un marco
de lectura

Eleccin del sitio de

poliadenilacin
Otra posibilidad de obtener
varios tipos de mRNAs a partir de
un mismo transcrito primario
reside en la variabilidad de
eleccin del sitio de
poliadenilacin.

Pueden modificar el extremo carboxiterminal de la protena

Los diferentes productos de maduracin

terminan en polipptidos que poseen
actividades totalmente diferentes

Estabilidad de los mRNAs

La modificacin de la duracin de la vida de los
mensajeros es un factor importante en la
regulacin de la expresin de algunos genes.

/ de protenas
Ejemplo : La sntesis de histonas est estrechamente
acoplada a la replicacin del DNA, teniendo por
efecto una perfecta adecuacin entre la cantidad de
histonas fabricadas y la del DNA sintetizado.

El almacenamiento
de los mRNA
Despus de un estmulo, la variacin en
la concentracin de protenas y de
mensajeros citoplasmticos puede ser
muy rpido mientras que la velocidad de
la transcripcin cambia poco,
sobreentendindose un nivel de
regulacin postranscripcional que
estriba en la liberacin de un mRNA
que estaba almacenado.

Efecto de la temperatura en el
procesamiento postranscripcional
del intrn VP1 del SV40 insertado en
vectores de expresin
transfectados en clulas de peces

Instituto Superior de Ciencias Mdicas Carlos J

Finlay
Centro de Inmunologa y Productos Biolgicos
(CENIPBI)Betancourt
Oscar Hernndez

Hiptesis
La baja efectividad de las secuencias no homologas utilizadas
como activadores, se deben a las fallas en la maquinaria
transcripcional o postranscripcional debido a las bajas
temperaturas propias de los cultivos celulares de los peces.

Objetivo
Evaluar el efecto de este factor sobre el
mecanismo molecular, mediante el
empleo del intron VP1 del virus 40 del
simio (SV40) insertado en varios vectores
de expresin haciendo uso de dos lneas
celulares de peces.

En qu punto o puntos
acta exactamente el
mecanismo?
Las construcciones genticas derivaron del

plsmido pSVL

A los cuales se les insertaron los

promotores:

CMV (citomegalovirus humano)

RSV (virus del sarcoma de Rous)
TK (timidina quinasa)

Cada vector con un promotor dio lugar a tres

construcciones genticas:

Una sin intrn

Otra con el intrn VP1 del virus 40 del simio (SV40)
Y una tercera con el primer intrn INTT de la hormona de
crecimiento de trucha.

Para evaluar el efecto de cada intrn ensayado, se conformaron tres

series integradas por tres vectores de expresin para cada gen usado:
La enzima cloramfenicol acetil transferasa (CAT)
La hormona de crecimiento de tilapia (HCti).
Serie control
Vectores
carentes de
intrones
Vectores con
el INTT
fusionado al
ADNc del cat
INTT-cat

cat
CMV-cat
RSV-cat
TK-cat

Vectores
portadores
del intrn
VP1
VP1-cat

CMV-INTT-cat
RSV-INTT-cat
TK-INTT-cat

CMV-VP1-cat
RSV-VP1-cat
TK-VP1-cat

Cul es la seal o cmo

recibe la seal para actuar?
Se utilizaron las lneas celulares de peces:
EPC (clulas epiteliales de carpa)
TO2 (clulas de ovario de tilapia)

La temperatura para el cultivo vari segn la lnea celular:

EPC a 30 C,
TO2 a 30 C, y posterior a la transfeccin, se cultivaron a 37
C.
Los ensayos se realizaron de forma transitoria por un periodo
de 72 h

Incrementa o disminuye la expresin

Se muestra que la inhibicin de la expresin de los genes cat y HCti
por parte de los vectores que incluyeron el intrn de SV40, a temperaturas
inferiores de 37 C se debi a fallas ocurridas a nivel postranscripcional
en el procesamiento del mismo (corte y empalme)

< 37
C

Est claro que la temperatura es un factor fsico

relacionado con los procesos celulares, e influye en el
correcto funcionamiento y control de estos.

Esta
comparacin
permite evaluar el efecto
que tuvo la insercin de
los intrones VP1 e INTT
sobre la expresin del
gen
asociado
a
la
temperatura,
eso
se
muestra como la media
de las trans-fecciones
realizadas en duplicado
para vector de la serie.

Estos resultados, corroboran la

expresin del gen HCti en el
medio de cultivo a 37C que
confirma el efecto positivo de
este factor sobre la expresin.

El vector que porta el

intron
VP1
genero
la
acumulacin
de
un
transcripto
primario
de
talla superior a la esperada
, el mecanismo de corte y
empalme no fue suficiente
cuando se utilizo esta
secuencia viral en la lnea
celular,
inhibiendo
los
niveles de protena CAT

A 37C la secuencia heterologa

empleada
(VP1)
es
correctamente procesada, se
muestra la seal del ARNm
correspondiente
a
la
construccin
del
gen,
comparable con la de los
vectores utilizados.
Confirma el efecto positivo que
presenta el incremento de la
temperatura sobre el correcto
procesamiento
de
esta
secuencia heterologa, posterior
a la transcripcin.

El intrn VP1 del SV40 se encuentra entre las

secuencias empleadas como activador transcripcional
para incrementar la produccin de algunas protenas.
Sin embargo se observ que no era muy efectivo para
tal propsito en clulas de peces, lo que llev a
investigar r el motivo de dicha ineficiencia.
Varios trabajos hacan referencia a que factores fsicos
tales como la temperatura tenan un papel importante
a nivel molecular.
En este trabajo se observ que efectivamente la
temperatura afecta a la maquinaria
postranscripcional evitando as que se lleve a cabo el
correcto procesamiento (durante el corte y empalme
splicing ) del transcrito primario de la secuencia de
dicho gen por lo que se genera una acumulacin de este
precursor inhibiendo los niveles de la protena CAT.

 Se mostro por primera vez el efecto positivo que

ejerce
la
temperatura
sobre
el
mecanismo
postranscripcional de splicing en un intron aislado
de un virus que afecta a clulas de mamfero y que es
insertado en vectores de expresin que fueron
transfectados en clulas de peces.
Se sugiere un cambio de conformacin en la
molcula
precursora
que
favorece
el
mecanismo a 37C y brinda las bases para el
diseo de nuevos experimentos que confirmen esta
hiptesis.