UNIVERSIDAD NACIONAL DE HUANCAVELICA

CTEDRA: BIOQUIMICA

CONCEPTOS BSICOS DE CINTICA

QUMICA
En una reaccin de orden cero, la velocidad de
formacin del producto es independiente de la
concentracin de sustrato: v = k
En una reaccin de primer orden la velocidad de
formacin de los productos es directamente
proporcional a la concentracin del sustrato: v = k [A].
As, en la reaccin:
sacarosa + agua
glucosa + fructosa
La velocidad de hidrlisis de la sacarosa es, en todo
momento, proporcional a la concentracin de
sacarosa. Dicho matemticamente, donde [A] es la
concentracin de sacarosa a cada tiempo (t) y k es la
constante de proporcionalidad. Se dice que sta es
una reaccin de primer orden.

Una reaccin de segundo orden es aquella

en la que la velocidad de formacin del
producto depende de la concentracin de
dos sustratos (como en una reaccin de
condensacin):
v = k [A1] [A2]
del cuadrado de la concentracin de un
nico sustrato (reaccin de dimerizacin): v
= k [A]2

CINTICA ENZIMTICA
La cintica enzimtica estudia la velocidad de las
reacciones catalizadas por enzimas. Estos
estudios proporcionan informacin directa acerca
del mecanismo de la reaccin cataltica y de la
especificidad de la enzima.
La velocidad de una reaccin catalizada por un
enzima puede medirse con relativa facilidad, ya
que en muchos casos no es necesario purificar o
aislar el enzima.

 La medida se realiza siempre en las

condiciones
ptimas
de
pH,
temperatura, presencia de cofactores, etc,
y se utilizan concentraciones saturantes
de sustrato.
En estas condiciones, la velocidad de
reaccin observada es la velocidad
mxima (Vmax).
La velocidad puede determinarse bien
midiendo la aparicin de los productos o la
desaparicin de los reactivos.

 Al seguir la velocidad de aparicin de producto (o

de desaparicin del sustrato) en funcin del tiempo
se obtiene la llamada curva de avance de la
reaccin, o simplemente, la cintica de la
reaccin.
A medida que la reaccin transcurre, la velocidad
de acumulacin del producto va disminuyendo
porque se va consumiendo el sustrato de la
reaccin. Para evitar esta complicacin se procede
a medir la velocidad inicial de la reaccin (v0).

 La velocidad inicial de la reaccin es igual

a la pendiente de la curva de avance a
tiempo cero. De esta forma, la medida de
v0 se realiza antes de que se consuma el
10% del total del sustrato, de forma que
pueda considerarse la [S] como
esencialmente constante a lo largo del
experimento.

 Adems, en estas condiciones no es

necesario considerar la reaccin
inversa, ya que la cantidad de producto
formada es tan pequea que la reaccin
inversa apenas ocurre. De esta forma se
simplifican enormemente las ecuaciones
de velocidad.

 Para estudiar la cintica enzimtica se mide el

efecto de la concentracin inicial de sustrato
sobre la velocidad inicial de la reaccin,
manteniendo la cantidad de enzima constante. Si
representamos v0 frente a [S]0 obtenemos una
grfica como la de la Figura siguiente.

 Cuando [S]0 es pequea, la velocidad

inicial es directamente proporcional a la
concentracin de sustrato, y por tanto, la
reaccin es de primer orden.
A altas [S]0, la enzima se encuentra
saturada por el sustrato, y la velocidad ya
no depende de [S]0. En este punto, la
reaccin es de orden cero y la velocidad
es mxima (Vmax).

 El sustrato se une a la enzima en una regin

determinada llamada sitio activo. El fenmeno de
saturacin junto con otras evidencias llevaron a
postular la existencia de un complejo enzima
sustrato (E S) como etapa previa a la formacin
de productos.
En 1913 Leonor Michelis dedujo la relacin entre la
velocidad mxima (vm) de una reaccin catalizada
enzimticamente en trminos de la formacin del
complejo E S. En base a estas consideraciones
es lgico suponer que a altas concentraciones de
sustrato, todos los sitios activos de la enzima estn
ocupados y por lo tanto la velocidad alcanza un
mximo.

Una enzima E se combina con un sustrato S para

formar el complejo E S, con una constante de
velocidad k1. Este complejo E S puede seguir dos
caminos:

a) puede proceder para formar el producto

con una constante de velocidad k3

b) el camino alternativo es disocindose,

generando nuevamente E y S con una
constante de velocidad k2.

 En el esquema anterior k1, k2 y k3 son las

constantes cinticas individuales de cada
proceso y tambin reciben el nombre de
constantes microscpicas de velocidad.
Segn esto, podemos afirmar que:
v1 = k1 [E] [S]
v2 = k2 [ES]
v3 = k3 [ES]
Se puede distinguir entre enzima libre (E) y
enzima unido al sustrato (ES), de forma que
la concentracin total de enzima [ET], (que
es constante a lo largo de la reaccin) es:
[ET] = [E] + [ES] Como [E] = [ET] - [ES], resulta
que: v1= k1[S] [ET] - k1 [S] [ES]

 Este modelo cintico adopta la hiptesis del

estado estacionario, segn la cual la
concentracin del complejo enzima-sustrato es
pequea y constante a lo largo de la reaccin.
Por tanto, la velocidad de formacin del
complejo enzima-sustrato (v1) es igual a la de
su disociacin (v2+ v3):
v1 = v2 + v3

 Adems, como [ES] es constante, la velocidad

de formacin de los productos es constante:
v = v3 = k3 [ES] =constante.
Como v1=v2+v3, podemos decir que:
k1[S] [ET] - k1 [S] [ES] = k2 [ES] + k3 [ES]
Despejando [ES], queda que:
siendo
en donde la expresin (k2+k3)/k1 se ha
sustitudo por Km, o constante de MichaelisMenten. Este enlace nos aporta una
explicacin
sobre
las
razones que hacen de la Km un parmetro cint
ico importante
.

 Por lo tanto, en el estado estacionario, la

velocidad de formacin del producto es:
v = v3 = k3 [ES] =
Para cualquier reaccin enzimtica, [ET], k3 y
Km son constantes. Vamos a considerar dos
casos extremos:
A concentraciones de sustrato pequeas
([S] << KM) v = (k3 [ET]/Km) [S]. Como los
trminos entre parntesis son constantes,
pueden englobarse en una nueva constante,
kobs, de forma que la expresin queda reducida
a: v = kobs [S], con lo cual la reaccin es un
proceso cintico de primer orden.

 A concentraciones de sustrato elevadas

([S] >> KM), v = k3 [ET]. La velocidad de
reaccin
es
independiente
de
la
concentracin del sustrato, y por tanto, la
reaccin es un proceso cintico de orden
cero. Adems, tanto k3 como [ET] son
constantes, y nos permite definir un nuevo
parmetro, la velocidad mxima de la
reaccin (Vmax): Vmax = k3 [ET], que es
la velocidad que se alcanzara cuando todo
el enzima disponible se encuentra unido al
sustrato.

 Si introducimos el parmetro Vmax en la

ecuacin general de la velocidad, obtenemos
la expresin ms conocida de la ecuacin
de Michaelis-Menten:

 Hay enzimas que no obedecen la ecuacin de

Michaelis-Menten. Se dice que su cintica no es
Michaeliana. Esto ocurre con las enzimas
alostricas, cuya v frente a [S] no es una
hiprbola, sino una sigmoide. En la cintica
sigmoidea, pequeas variaciones en la [S] en
una zona crtica (cercana a la Km) se traduce en
grandes variaciones en la velocidad de reaccin.

CLCULO DE LA Km Y DE LA
Vmax DE UN ENZIMA
La representacin grfica de la ecuacin de
Michaelis-Menten (v0 frente a [S]0) es una
hiprbola. La Vmax corresponde al valor mximo
al que tiende la curva experimental, y la KM
corresponde a la concentracin de sustrato a la
cual la velocidad de la reaccin es la mitad de la
Vmax.

CONCLUSIONES SOBRE LA
CINTICA DE MICHAELIS
Caractersticas de Km: la constante de Michaelis-Menten
es caracterstica de una enzima y particular para un
substrato. Refleja la afinidad de la enzima por ese substrato.
Km es numricamente igual a la concentracin de substrato
a la cual la velocidad de reaccin es la mitad de la Vmax
(Km= Vmax/2). Este parmetro, Km no vara con la
concentracin de enzima.
Significado de una Km pequea: un valor numrico
pequeo de Km refleja una alta afinidad de la enzima por
su substrato porque a una baja concentracin del mismo, la
enzima a desarrollado ya la mitad de la velocidad mxima.

 Significado de una Km grande: el valor numrico

grande de Km refleja una baja afinidad de la
enzima por su substrato porque a una concentracin
elevada del mismo, la enzima desarrolla la mitad de
la velocidad mxima.
Relacin de la velocidad con la concentracin de
enzima: la velocidad de la reaccin es directamente
proporcional a la concentracin de la enzima a
cualquier concentracin de substrato. Por ejemplo,
si la concentracin de enzima es disminuida a la
mitad, la velocidad inicial de la reaccin (v0) es
reducida tambin a la mitad de la original.
Orden de la reaccin: cuando S es mas pequea
que la Km, la velocidad de la reaccin es
aproximadamente igual a la concentracin de
substrato.

LINEWEAVER BURK
Para determinar grficamente los valores de Km y
Vmax es ms sencillo utilizar la representacin
doble recproca (1/v0 frente a 1/[S]0), ya que es una
lnea recta. Esta representacin doble recproca
recibe el nombre de representacin de
Lineweaver-Burk . Es una recta en la cual:
La pendiente es Km/Vmax
La abscisa en el origen (1/v0 = 0) es -1/KM
La ordenada en el origen (1/[S]0 = 0) es 1/Vmax
De esta forma, a partir de los datos experimentales
se puede calcular grficamente, los valores de Km
y Vmax de un enzima para diversos sustratos.

y = a.m + b

Efecto del pH y de la temperatura

sobre la actividad enzimtica.
Efecto del pH: afecta al estado de disociacin de los
grupos, aunque todas las protenas no se ven afectadas de
igual forma porque algunas no tienen grupos disociables.
La mayor parte de los enzimas tienen un pH ptimo. Si hay
pequeos cambios de pH no se desnaturaliza la enzima. El
pH puede afectar de dos maneras:
- La unin del sustrato es mejor o peor que antes.
- Que afecte a la velocidad cataltica de la reaccin.

 Efecto de la temperatura: cuando la

temperatura sube la velocidad de
reaccin
aumenta.
Existe
una
temperatura mxima a la cual la protena
se desnaturaliza dejando de ser
funcional. La mayor parte de los enzimas
se desnaturalizan a unos 50C. La
ribonucleasa
se
desnaturaliza
a
temperaturas superiores a los 70C.