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Universidade Estadual do Rio Grande do Sul

Tecnologia em Agroindustria
Disciplina: Materias-primas de origem vegetal

Anlise de Sementes
Prof. Dra. Adriana Cibele de Mesquita Dantas

Introduo

Finalidade da anlise de sementes:

Avaliar, por meio de procedimentos tcnicos, a qualidade e a identidade


da semente.

Realizadas em laboratrios oficiais de anlise ou em outros laboratrios


de anlise credenciados pelo Ministrio da Agricultura, Pecuria e
Abastecimento (Mapa)

Padres e procedimentos estabelecidos em normas e atos


complementares

Garantia para produtores, comerciantes e agricultores, de reduzir riscos


de obtenao de sementes de qualidade desconhecida

Histrico

Mistura de sementes comerciais


EUA 1890-1915 mistura de trevo doce e amarelo em
alfafa
Criao de Laboratrios necessidade de regulamentar
o comrcio de sementes
1 Laboratrio de Anlise de Sementes 1869
Alemanha
1924 Fundaao da Europa Associao Internacional
de Analise de Sementes ISTA
1917 EUA - R.A.S. oficial publicada
1939 Criaao da Lei Federal de Sementes dos EUA

R.A.S. em 2009

Alinhamento ISTA, o que facilita o comrcio internacional e abre a


possibilidade de novos mercados para o Brasil

Adequar a legislao brasileira resoluo do MERCOSUL, que


determina que as regras de anlise de sementes sigam as
recomendaes da International Seed Testing Association ISTA.

Padres para controle de qualidade de organismos geneticamente


modificados e a questo do teste de vigor, para o clculo de
plantabilidade na agricultura de preciso.

Exige investimentos para a modernizao de equipamentos,


incorporao de avanos tecnolgicos e para a atualizao dos
profissionais

ISTA - International Seed Testing Association

Normatizao para testes para sementes,


com sede em Zurique, na Sua.
Certificao que assegura a qualidade e
confiabilidade na exportao de lotes de
sementes.
Objetiva normatizar as diversas anlises
que so realizadas em sementes de
vrias espcies em todo mundo.
Em 1869, o pesquisador alemo Friedrich
Nobbe criou a primeira metodologia
cientfica para analisar a qualidade de
uma semente.
Diversas tcnicas foram desenvolvidas
em todo mundo, para analisar a qualidade
das sementes de diversas espcies.
Entidade internacional que coordena e
valida os estudos que so realizados por
diversos especialistas em vrios pases.

Amostragem para anlise de semente

Objetivo de determinar a qualidade das sementes de um lote.

A quantidade de sementes analisadas , em geral, muito pequena em relao


ao tamanho do lote.

Representar ao mximo a qualidade de todo lote (ex. 80g de semente de arroz


poder representar 20.000 Kg).

Retiradas pores iguais de sementes de diversos recipientes (embalagens, ou


de diferentes pontos do depsito, no caso de sementes armazenadas a
granel).

Lote uma quantidade definida de sementes, homognea e identificada.


Importante: Homogeneidade do lote de Sementes

Denominao das amostras


Amostra simples Cada pequena porao de sementes retiradas
de diversos lugares do lote por amostradores apropriados
Amostra composta a formada pela combinaao e mistura de
todas as amostras simples retiradas do lote reunida em um
recipiente
Amostra mdia Reduao da amostra composta, com peso
mnimo especificado nas R.A.S. enviada ao laboratrio
Amostras de trabalho - amostras mdias homogeinizada e
reduzida adequadamente para cada teste

Peso mximo de sementes por lote

Sementes grandes culturas at um mximo de 20.000


Kg para sementes de dimenses iguais ou maiores do que
as de trigo e de 10.000 Kg para sementes menores;

Sementes de olercolas e de essencias florestais at um


mximo de 5.000 Kg para as sementes iguais ou maiores
do que quiabo e de 1.000 Kg para as sementes menores;

Sementes de gramneas e leguminosas forrageiras,


forrageiras at
um mximo de 12.000 Kg para as sementes de dimenses
iguais ou maiores do que as de sorgo granfero e 5.000 Kg
para sementes menores.

Amostradores

Prescrio para coleta de amostras

Amostradores do tipo simples (Amostrador Nobbe)


Usar amostrador com 6 a 9 aberturas (cilndrico, com o mnimo de 34 cm).
Insere o amostrador na embalagem em ngulo de 30, com as aberturas
para baixo, e girar 180.
Extrai o nmero mnimo de amostras simples, de acordo com a tabela
abaixo:

A quantidade mnima de 1,0 kg, para as grandes culturas em geral.


Acondiciona-se a amostra em embalagem permevel, inviolvel, identificada
com os dados do produtor e do lote (nome, endereo, espcie, cultivar,
categoria, safra, nmero e peso do lote, tratamento, data de coleta, nome e
assinatura do responsvel pela coleta).

Amostragem sementes armazenadas a


granel ou durante o beneficiamento

Para a amostragem, as R.A.S. prescrevem:

Amostras simples (caso de lotes inferiores a 1.500 Kg);

Lotes de at 50 Kg de sementes: no menos de trs amostras


simples;
Lotes de 51 a 500 Kg de sementes: pelo menos cinco amostras
simples;
Lotes de 501 a 3.000 Kg de sementes: uma amostra simples de
cada 300 Kg, porm, no menos de cinco
Lotes de 3.000 a 20.000 Kg de sementes: uma amostra simples
de cada 500 Kg, no coletar menos de dez

Amostras simples (caso de lotes inferiores a 5.000 Kg)

Amostragem sementes acondicionadas em sacos


ou recipientes de tamanho semelhante

A exigncia mnima a seguinte:

Lotes de at cinco sacos: cada saco deve ser amostrado,


coletando-se cinco amostras simples pelo menos;
Lotes de seis a 30 sacos: uma amostra a cada trs sacos,
porm, no menos de cinco amostras simples (caso de lotes
inferiores a 15 sacos);
Lotes de 31 a 100 sacos: uma amostra de cada cinco sacos,
porm no menos de dez amostras simples (caso de lotes
inferiores a 50 sacos);
Lotes de 101 ou mais sacos: no mnimo 30 sacos devero ser
amostrados.

Amostragem manual

Para espcies de sementes que no deslizam


facilmente, como gramas palhentas:

Gneros: Agropyron, Agrostis, Alopecurus,


Anthoxanthum, Axonopus, Bromus, Chloris, Cynodon,
Dactylis, Festuca, Lolium, Panicum, Paspalum, Poa,
Trisetum, Zoysia, algodo entre outros.

Manter os dedos bem apertados as sementes de


maneira a no deix-las escapar

Acondicionamento das amostras

Pela reduo da amostra composta obtm-se a amostra mdia, que


deve ter um peso mnimo adequado (especificado nas R.A.S.)

No caso de gramneas forrageiras tem-se recomendado 300g de


sementes, a mesma quantidade pode ser usada para leguminosas de
sementes pequenas (Stylosanthes e soja perene).

A amostra mdia assim obtida, deve ser enviada ao laboratrio em


recipientes apropriados de acordo com o tipo de anlise a que se
destina:

Testes de pureza fsica, de germinao e de vigor, devem ser


acondicionadas em embalagens porosas (pano, papel ou papelo),

Testes de umidade e ao peso hectoltrico, em embalagens hermticas


(vidro ou saco plstico).

Amostra mdia de sementes

Termo de Tomada de Amostra (TTA), coletada por uma pessoa fsica credenciada pelo
MAPA

Acondicionada em embalagem apropriada,lacrada, devidamente identificada e conter o


peso mnimo exigido pelas R.A.S.

Peso mnimo da amostra mdia, em gramas, das espcies agrcolas analisadas pelo LASP,
so os seguintes:
Gossypium hirsutum L. (Algodo)
Oryza sativa L. (Arroz) 1000g
Phaseolus vulgaris L. (Feijo)
2000g
Vigna unguiculata L. (Feijo Vigna)
Zea mays L. (Milho)
1000g
Sorghum bicolor L. (Sorgo)
900g
Sesamum indiocum L. (Gergelim)
Ricinus communis L. (Mamona) 2000g
Helianthus annus L. (Girassol) 1000g
Glycine max L. (Soja) 1000g

2000g
1000g
1000g

Cuidados com a amostra

A semente um ser vivo e precisa de cuidados especiais, at


que chegue o momento da anlise;

Armazenar as amostras em local fresco, seco e ventilado;

Evitar o transporte das amostras expostas ao sol ou ao calor;

Evitar o transporte das amostras com produtos qumicos


(herbicidas, adubos, inseticidas, fungicidas);

Evitar umidade no transporte.

Amostra de trabalho
SOLO

EQUIPAMENTOS PARA DIVISO E


HOMOGENEIZAO DE SEMENTES

CNICO
(BOERNER)

Qualidade de Sementes
Conjunto de caractersticas que determinam o valor para a
semeadura ou o potencial de desempenho de um lote de
sementes

Atributos:
Identidade

gentica
Atributos fsicos
Fisiolgicos
Sanitrios.
Os quatro componentes da qualidade apresentam importncia
equivalente

Identidade gentica
Melhoramento gentico

cultivares novos
MULTIPLICAO SEM
ALTERAO GENTICA

SEMENTE CERTIFICADA

Atributo Fsico

Formao, integridade fsica e teor gua da semente

Sementes formadas com qualidade superior;

Sementes ntegras;

Teor de gua adequado regula os processos


metablicos

Atributo Fisiolgico

Viabilidade e vigor da semente

Semente vivel Produo de uma planta normal

Vigor - Potencial de desenvolvimento, rpido e


uniforme das estruturas do embrio e da emergncia
da plantula

Bom desempenho
ambiente

em

condies

variadas

de

Maturidade Fisiolgica

Na maturidade fisiolgica da semente a qualidade mxima; aps


esse estdio a conservao da semente depende do ambiente em
campo, da colheita e do armazenamento.

Atributo Sanidade

Associao de patgenos com a semente (fungos,


vrus, bactrias e nematides) especialmente os
transmissveis pela semente;

Os fungos reduzem a qualidade da semente.

Microorganismos Inculo de doenas em reas de


produo;

Introduo de doenas e pragas em reas ou regies


isentas

Testes de avaliao da qualidade das sementes

Teste de Pureza varietal


Teste de Germinaao
Teste bioqumico de viabilidade
Determinaao do Teor de umidade
Teste de sanidade
Determinaoes adicionais (peso volumtrico
peso de mil sementes, tamanho de sementes,
etc.)

Teste de Pureza Fsica

Determina a composio da amostra

Identidade das espcies de sementes e dos demais materiais que


compem a amostra

Sementes Puras:
Da espcie predominante; madura, fragmentos maiores que do
tamanho original da semente;

Outras sementes: espcie diferente da semente pura;

Material inerte: Inclui sementes, fragmentos e outros materiais e


estruturas NO DEFINIDOS como semente pura ou outras
sementes.

Cedrella sp.

a, b) Semente pura; c) fragmentos de sementes maiores que


do tamanho original; d) Material inerte.

MATERIAL INERTE
Amostra de
trabalho

OUTRAS
SEMENTES

TESTE DE
PUREZA FSICA
separao dos
componentes
SEMENTE PURA

PUREZA FSICA - Brachiaria brizantha

AMOSTRA TRABALHO

SEMENTES PURAS

TOTAL
IMPUREZAS

MATERIAL INERTE

OUTRAS SEMENTES

Teste de Germinao - viabilidade


AMOSTRA TRABALHO : SEMENTE PURAS

Determinar a germinao mxima das sementes de um lote

Avaliao

PLNTULA NORMAL: TEM POTENCIAL PARA SE


DESENVOLVER E ORIGINAR UMA PLANTA SOB CONDIES
FAVORVEIS DE AMBIENTE.

PLNTULA ANORMAL: NO TEM POTENCIAL.......

SEMENTE NO GERMINADA: DORMENTE, MORTA

Resultado % de plntulas normais

13

Amostra de trabalho Sementes


puras; Papel toalha

Teste de Germinaao

Cmara de germinaao:
gua, calor, oxigenio e luz

Avaliao

controle

15

Coleptilo
Seedling normal
Raiz seminal

Raiz primria

16

Coleoptilo
Coleoptilo

Raiz primria
Epictilo

Seedlings anormais

Expresso da germinao

Teste tetrazlico - viabilidade


Amostra de trabalho sementes puras

Nos tecidos vivos, enzimas reagem com o sal de Tetrazlio

Distingui os tecidos vivos dos mortos e estabelecer o nvel de


viabilidade da semente

Baseia na alterao da colorao dos tecidos vivos, reflete a atividade


das enzimas desidrogenases envolvidas na atividade respiratria.

A desidrogenase do cido mlico, cataliza a reao dos ons H+


liberados pela reao dos tecidos vivos com o sal (2,3,5 - trifenil cloreto
de tetrazlio), formando uma substncia de cor vermelha, estvel e no
difusvel, denominada trifenilformazan.

Resultado % de semente vivel

Se o sal de tetrazlio reduzido, formando o


composto vermelho, houve atividade
respiratria nas mitocndrias, significando que
h viabilidade celular e do tecido.
Os tecidos no viveis no reagem e no so
coloridos.

HIDRATAO
SEMENTES
6h a 30C

AMOSTRA SEMENTE
(2X50; 2x100; 4x50)
PREPARO

COLORAO

AVALIAO SEMENTE

0,075% TETRAZLIO, 6h a 30C

RESULTADO % SEMENTES VIVEIS

19

a. Sementes viveis

b. Sementes no viveis

Grau de Umidade

Ponto de colheita determinado pelo teor de


umidade
Amostra de Trabalho da Amostra Mdia
(embalagem prova de vapor de gua)

MTODO ESTUFA: 105 3C por 24h


Resultado em % de gua

RECIPIENTES COM AS
SEMENTES

ESTUFA

MATERIAL E EQUIPAMENTOS
PARA DETERMINAR A GUA
DA SEMENTE
BALANA

Qualidade Fisiolgica

Testes de vigor baseados na integridade dos sistemas


de membranas da semente

Identifica o processo de deteriorao na sua fase


inicial e permitir que medidas corretivas sejam
tomadas para reduzir ou minimizar o seu efeito na
qualidade fisiolgica da semente.

Dentre os mtodos que se baseiam nesse princpio


destacam-se os testes da condutividade eltrica,
lixiviao de potssio e pH do exsudato.

TESTE DE CONDUTIVIDADE ELTRICA


A medio da condutividade eltrica por meio da quantidade de
eletrlitos liberados pela semente na gua de embebio
QUATRO REPETIES DE 50 SEMENTES PURAS,
PREVIAMENTE PESADAS

GUA DESTILADA: 25mL


TEMPERATURA 20C

Imerso das
sementes por
24h

AVALIAO
DA
SEMENTE:
LIXIVIAO
DE
ELETRLITOS (uScm-1g-1semente); TEOR DE GUA (%)
Resultado uScm-1g-1semente

TESTE DE
CONDUTIVIDADE
ELTRICA

CONDUTIVMETRO

Sanidade

DETERMINAR OS MICRORGANISMOS
ASSOCIADOS S SEMENTES DE UMA
AMOSTRA

A sanidade da semente refere-se basicamente


avaliao da associao da semente com
fungos, bactrias, vrus, nematides e insetos,
especialmente os transmissveis pela semente.

Mancha de caf em sementes de soja Vrus


mosaico comum

Esclerdios em lote de sementes de girassol

Espiguetas de braquiria contaminadas por carvo Ustilago sp (Roehrs, 2006)

Teste do Vigor
Propriedades
que
determinam
o
potencial
de
desenvolvimento das estruturas essenciais do embrio e
de emergncia da plntula, de forma rpida e uniforme,
sob condies variadas de ambiente

Taxa e uniformidade de germinao da semente;

Germinao da semente e emergncia da plantula em


ambiente adverso para esses processos;

MANUTENO DA QUALIDADE DA SEMENTE APS O


ARMAZENAMENTO

Teste do Envelhecimento acelerado (EA)


SEMENTES PURAS SO EXPOSTAS :
TEMPERATURA
UMIDADE RELATIVA

42C
100%

AVALIAO DA SEMENTE: TEOR DE GUA (%);


Resultado % de plntulas normais

36h

ENVELHECIMENTO ACELERADO (EA)

CAIXAS PLSTICAS: 40mL GUA


UMA CAMADA DE SEMENTES

CMARA PARA EA

AVALIAO: TESTE GERMINAO

GERMINAO SEMENTE E
DESENVOLVIMENTO PLNTULA

VELOCIDADE DE GERMINAO
COMPRIMENTO DA PLNTULA
CLASSIFICAO VIGOR PLNTULA
MASSA DE MATRIA SECA

GERMINAO SEMENTE E
DESENVOLVIMENTO PLNTULA

COMPRIMENTO DA PLNTULA (Fotos: KIKUTI, 2007)

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broto

Teste de crescimento de seedlings

Radicula

Tamanho do seedling

Testes bioqumicos complementares

Testes de identificao varietal: fenol, hidrxido de potssio e da


peroxidase.

Fenol
Simples, rpido e indicado para classificar cultivares de cereais.
A reao da colorao do fenol constante para cada cultivar e envolve
a participao de enzimas, como a tirosinase e outras substncias
fenlicas presentes na semente.

Em arroz o teste de fenol aplicado embebidas por 16 horas em substrato


umedecido com gua destilada, a fim de ativar o sistema enzimtico.

Sementes so examinadas e agrupadas de acordo com a cor das glumelas


ou em reao positiva, escurecimento das glumelas ou reao negativa,
permanncia da cor original das glumelas

ANLISE DE IMAGENS
Utilizao de cmera fotogrfica, filmadora, scanner, raios x, geralmente
associados ao computador
Captar imagens de sementes, de plntulas e microrganismos com a finalidade
de identific-los e verificar a integridade dessas estruturas ou os materiais
associados a essas estruturas.
Os trabalhos so conduzidos com diversas espcies, para avaliaes de danos
mecnicos, leses causadas por insetos e a morfologia interna de sementes
de milho, soja, arroz, feijo, sorgo, essncias florestais e hortalias.

SEMENTE FORMADA

SEMENTE NO FORMADA

SEMENTES DE ALFACE: IMAGENS OBTIDAS COM RAIOS X.


(KIKUTI, 2007)

Anlise isoenzimtica
A perda de gua pelos tecidos da semente envolve profundas alteraes
metablicas e estruturais que condicionam tolerncia dessecao s sementes.
Marcadores isoenzimticos determinam alteraes bioqumicas decorrentes do
processo deteriorativo das sementes, atuam no processo respiratrio
Malato desidrogenase - metabolismo de ligao nitrognio-carbono;
Glutamato desidrogenase - metabolismo dos lipdios;
Esterase e fosfatase cida e alcalina - relacionadas desestruturao do sistema
de membranas

Padro eletrofortico de sementes de ervilha, cultivar Maria, lote I, para o sistema enzimtico
malato desidrogenase, aps hidratao em atmosfera saturada (AS) e substrato umedecido
(SU) at teores de gua de 10, 12 e 14%. I(test): sementes no hidratadas do lote I, com teor de
gua de 8,4%.

Padro eletrofortico de protenas

Sementes que toleram a dessecao dispem de alguns mecanismos de


proteo

Manter os sistemas de membranas das clulas, as estruturas das


macromolculas e as substncias de reserva em condies de readquirir suas
funes fisiolgicas quando as sementes so reembebidas.

Durante a maturao das sementes ocorrem mudanas na natureza das


protenas a serem sintetizadas;

A dessecao de sementes em desenvolvimento caracterizada pelo acmulo


de um grupo particular de mRNAs e protenas LEA, late embryogenesis
accumulated relacionadas;

Protenas do tipo LEA so ricas em glicina e outros aminocidos hidroflicos e


apresentam poucos resduos hidrofbicos,

Determinao da pureza varietal com


marcadores moleculares microssatlites

A avaliao da pureza gentica de sementes com base


em marcadores moleculares de DNA conclusiva, uma
vez que os mesmos no sofrem influncia ambiental e
os dados obtidos so reprodutveis e estveis.

Marcadores moleculares microssatlites so indicados


para este tipo de anlise, por serem altamente
polimrficos em soja, altamente reprodutveis,
codominantes.

MTODOS NA DETECO DE SEMENTES DE SOJA


GENETICAMENTE MODIFICADA RESISTENTE AO
GLIFOSATO

A utilizao de herbicidas de amplo espectro de atuao pode ser


favorecida, pois haveria o controle de vrios tipos de plantas daninhas
com menor nmero de aplicaes, sem prejudicar a cultura;

A soja Roundup Ready (RR) consiste numa cultivar geneticamente


modificada que tem a caracterstica de tolerncia ao herbicida no
seletivo, glifosato (N-fosfonometilglicina);

Aao do herbicida sistmico de ao total, que inibe a enzima 5enolpiruvil shiquimato-3-fosfato sintetase (EPSP sintetase ou EPSPS) e
impede que a planta forme aminocidos essenciais para a sntese de
protenas e, tambm, alguns metablitos secundrios;

O gene que confere tolerncia enzima EPSPS, denominado CP4,


proveniente da bactria de solo do gnero Agrobacterium.

METODOLOGIA DO RT-PCR UTILIZADO PARA IDENTIFICAO


DO mRNA DA -AMILASE EM SEMENTES DE MILHO

Detectar as diversas reaes metablicas que envolvem sntese e


degradao de molculas durante o desenvolvimento, a germinao e
a deteriorao de sementes;

Atividade de a-amilase durante a germinao das sementes expresso de -amilase tem sido conduzidos em cevada, trigo e arroz

Expresso de genes ltk, responsveis pela transduo de sinais


durante o desenvolvimento do endosperma

A utilizao de tcnicas de identificao de RNA mensageiro (mRNA)


durante o processo de germinao pode definir a cintica de
produo de -amilase, bem como a influncia de fatores abiticos
(umidade, temperatura) na atividade dessa enzima.

RT-PCR
(Reverse TranscriptasePolimerase Chain Reaction)

Qualidade da Semente x Produo

Colheita e processamento, principalmente as alteraes fsicas (danos


mecnicos);

Depende da espcie, do cultivar, do teor de gua da semente e da tecnologia de


produo;

Os efeitos adversos decorrentes das alteraes fsicas se intensificam durante o


armazenamento;

A conservao aps a colheita: a dormncia, o teor de gua da semente, a


secagem, a temperatura do ambiente de armazenamento, os fungos (Aspergillus
sp. e Penicillium sp.) e outras prticas.

Qualidade de Sementes
Produzir plntula normal
Boa emergncia e estabelecimento da
plntula em campo
Plantas vigorosas e uniformes
Reflexos diretos na produtividade
Potencial para conservao
Valor comercial de um lote de sementes

Controle de Qualidade

Prevenir problemas e causas


Desenvolver e sugerir
metodologias e tecnologias
aproriadas de acordo com o
sistema de produo de
sementes
Ex.: Perdas diminuidas ou
evitadas sem que haja
acrescimo no custo de
produo (regulagem da
sementeira)