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CURSO TALLER
VALIDACIN DE ENSAYOS
ANALTICOS
Expositor: Jos Camero Jimnez
Diciembre, 2005
VALIDACIN
VALIDAR :
Confirmar el cumplimiento de los requisitos
particulares para un uso especificado propuesto,
por medio del examen y la presentacin de
evidencias objetivas.
ISO 8402: 1994
ASEGURAMIENTO DE
CALIDAD DE RESULTADOS
En los tiempos actuales el concepto de
Calidad va tomando cuerpo en muchas de las
actividades humanas. El laboratorio de
ensayos no es la excepcin.
Cada actividad humana genera productos con
un determinado valor econmico. En el caso de
los
laboratorios,
este
producto
es
la
informacin cualitativa o cuantitativa que se
obtiene respecto al resultado de ensayo de la
muestra a analizar.
ASEGURAMIENTO DE
CALIDAD DE RESULTADOS
(continuacin)
El
concepto
de
Calidad
se
relaciona
estrechamente
con
las
buenas
prcticas
profesionales y la satisfaccin del cliente. Para
aplicar y sistematizar estas buenas prcticas en
todos los sectores del laboratorio es conveniente
implementar un adecuado Sistema de Calidad,
que asegure una ptima relacin laboratorio /
cliente.
ASEGURAMIENTO DE
CALIDAD DE RESULTADOS
(continuacin)
La estadstica aplicada y los conceptos generales
de Gestin de Calidad, integran la base
indispensable para la construccin del Sistema
de Calidad del laboratorio. Puede decirse
entonces que esta rama de las matemticas es el
instrumento que "mide" la Calidad de los
resultados analticos, siguiendo siempre los
lineamientos generales de la norma internacional
ISO/IEC 17025, mximo referente en cuanto a
requisitos generales para la competencia de los
laboratorios de ensayo y de calibracin.
ASEGURAMIENTO DE
CALIDAD DE RESULTADOS
(continuacin)
El objetivo es brindar una informacin con
mayor credibilidad, til para la toma de
decisiones en el marco econmico, comercial
y vigilancia epidemiolgica, de las muestras
analizadas.
Es necesario que los ensayos de los
laboratorios cumplan determinados requisitos
que garanticen la calidad de su desarrollo y a
la vez, brinden informacin sobre las
caractersticas de la muestra analizada.
MAPA
CONCEPTUAL
DEL
ASEGURAMIENT
O DE CALIDAD
ASEGURAMIENTO DE CALIDAD
DE RESULTADOS (continuacin)
Aseguramiento de la calidad:
ASEGURAMIENTO DE
CALIDAD DE RESULTADOS
(continuacin)
La precisin
es la cercana de una serie
de mediciones alrededor del valor
promedio. Siendo afectada por errores
aleatorios, que causan dispersin.
La veracidad (ausencia de desvo) es la
medida de cercana a la media de una
serie de valores al valor considerado como
verdadero y depende de la ausencia de
errores sistemticos.
The
fitness
for
purposse
of
Definir
criterios
de
revalidacin
PLANEAMIENTO DE
VALIDACIN
Definir tipo
y frecuencia
de verificacin de
control de calidad
Definir Objetivo
Definir parmetros
de validacin
1
12
Prepara
procedimiento
rutina
Definir procedimiento
operacional
de validacin
2
3
11
Desarrollo
PLANEAMIENTO DE
VALIDACION
de la ACUICULTURA
10
5
8
Definir los
Ensayos de
validacin
Ejecutar los
ensayos completos
Ajustar los
parmetros
de validacin
Ejecutar ensayos
preliminares
Caracterizar
materiales
Verificar
compatibilidad
de equipos
PARMETROS DE VALIDACIN
Incertidumbre
9
Sensibilidad
7
Rango de
Trabajo
Veracidad
Precisin
Robustez
4
3
Selectividad /
Especificidad
Linealidad
LDM y LCM
PARMETROS DE VALIDACIN
1. Veracidad:
Grado de concordancia
existente entre el valor medio obtenido de una
gran serie de resultados y un valor aceptado
como referencia.
(ISO 5725 - 1)
PARMETROS DE VALIDACIN
2. Precisin:
Grado de coincidencia
existente entre los resultados independientes
de un ensayo, obtenidos en condicones
estipuladas.
(ISO 5725 - 1)
PARMETROS DE VALIDACIN
Exactitud:
Grado
de
concordancia
existente entre el resultado del ensayo y un
valor aceptado de referencia.
(ISO 5725 - 1)
EX
A
C
TI
TU
D
PRECISION
VERACIDAD
+
PARMETROS DE VALIDACIN
3.
Selectividad/Especificidad:
The
fitness
for
purpose
of
PARMETROS DE VALIDACIN
Es la menor cantidad de un
analto en una muestra la cual puede ser
detectada
pero
no
necesariamente
cuantificada con un valor exacto.
(EURACHEM Guide
analytical methods)
The
fitness
for
purpose
of
PARMETROS DE VALIDACIN
The
fitness
for
purpose
of
PARMETROS DE VALIDACIN
5. Linealidad:
Es la relacin entre la
concentracin de analito y respuesta del
mtodo.
Esta
relacin,
denominada
comnmente curva patrn o curva de
calibracin.
Define la capacidad del mtodo para obtener
los resultados de la prueba proporcionales a la
concentracin del analito.
(EURACHEM Guide
analytical methods)
The
fitness
for
purpose
of
PARMETROS DE VALIDACIN
6. Rango de Trabajo:
Es el intervalo
entre la ms alta y ms baja concentracin del
analito de la muestra, para la cual se ha
demostrado que el mtodo analtico tiene un
nivel apropiado de precisin, veracidad y
linealidad.
(Text on validation of analytical
Harmonized Tripartite Guideline)
procedures.
ICH
PARMETROS DE VALIDACIN
7. Sensibilidad:
Es el cambio en la
respuesta de un instrumento de medida
dividido por el cambio correspondiente en el
estmulo.
(Text on validation of analytical
Harmonized Tripartite Guideline)
procedures.
ICH
PARMETROS DE VALIDACIN
8. Robustez:
Es la medida de la
resistencia de un mtodo al cambio de
respuesta cuando se introducen pequeas
variaciones en el procedimiento.
(EURACHEM Guide
analytical methods)
The
fitness
for
purpose
of
PARMETROS DE VALIDACIN
9.
Incertidumbre:
Un parmetro
asociado con el resultado de una medicin,
que caracteriza la dispersin de los valores
que podran ser atribuidos razonablemente al
mensurando.
(EURACHEM Cuantificacin
Mediciones Analticas )
de
la
Incertidumbre
en
DETERMINACIN DE
VERACIDAD
Repeticin 1
MRC
Repeticin 2
Repeticin 3
Se determina por :
Prueba T-Student.
Prueba de Wilcoxon.
Repeticin 4
...
Repeticin n
Prueba T-Student
Para poder aplicar este modelo se deben tener en
cuenta los requisitos siguientes:
1) Las muestras fueron extradas de una poblacin
normal o aproximadamente normal.
2) La seleccin de las muestras se hizo en forma
aleatoria.
3) Las repeticiones son independientes entre s.
Si alguno de ellos no se cumple, las conclusiones
que se obtengan no son vlidas.
f(z)
F(t)
Regla emprica
/2
-4
-3
/2
1-
-2
-1
-t /2
0
t
z
t 2/2
Prueba T-Student
T experimental : Se determina de la siguiente manera:
texp erimental
tabla
T tabla : Se determina de la siguiente manera:
n 1,1
2
ppm
863
849
856
868
861
860
872
878
853
868
Repeticiones
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
ppm
851
849
864
865
856
862
860
848
864
862
Repeticiones
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
ppm
858
858
869
864
871
868
856
869
872
875
Prueba de Normalidad
Normal Probability Plot
.999
.99
Probability
.95
.80
.50
.20
.05
.01
.001
848
858
868
878
Fierro
Av erage: 862.3
StDev : 7.91398
N: 30
Mean
Fierro
30
862.30
StDev SE Mean
7.91
1.44
T
-2.56
P
0.016
%Grasa
8.57
8.58
8.54
8.22
8.27
8.53
8.46
8.46
8.27
8.39
Repeticiones
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
%Grasa
8.21
8.53
8.55
8.28
8.48
8.22
8.22
8.4
8.22
8.38
Repeticiones
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
%Grasa
8.35
8.29
8.45
8.31
8.21
8.52
8.56
8.57
8.36
8.23
Prueba de Normalidad
Normal Probability Plot
.999
.99
Probability
.95
.80
.50
.20
.05
.01
.001
8.2
8.3
8.4
8.5
%Grasa
Av erage: 8.38767
StDev : 0.134079
N: 30
N
%Grasa
30
N for
Wilcoxon
Test
Statistic
29
187.0
Estimated
P
0.517
Median
8.390
DETERMINACIN DE
VERACIDAD
Mtodo Estandarizado
Muestr
a
Repeticin 1
Repeticin 1
Repeticin 2
Repeticin 2
Repeticin 3
Repeticin 3
Repeticin 4
Repeticin 4
...
...
Repeticin n
Repeticin n
Se determina por :
Prueba T-Student dos muestras.
Prueba de Mann Whitney.
Ha: 1 2
H0: 1 - 2 = 0
Ha: 1 2
x1 x2
Comparamos
con 0.
x1 x2
Varianza de :
x1 x2
As:
n1
n2
2
1
2
2
x1 x2
Varianza de :
12 22
1
2 1
Var ( x1 x2 )
( )
n1
n2
n1 n2
Pero 2 es desconocido, y debemos estimarlo!
Si slo tenemos las x el mejor estimador de 2 es:
n1
1
2
s
(
x
x
)
i
n1 1 i 1
2
1
n2
1
2
s
( yi y )
n2 1 i 1
2
2
s
n1 n2 2
n1
n2
(x x) ( y y)
i 1
i 1
2 .
( x1 x 2 ) ( 1 2 )
1
1
s
n1 n 2
Met. Stan.
501
502
504
500
510
481
501
512
523
506
Met. Valid
510
490
499
495
507
492
507
505
495
495
Met. Stan.
492
504
500
506
502
500
502
510
497
516
Met. Valid
499
504
493
498
506
495
498
501
500
500
Met. Stan.
493
505
499
491
482
496
486
489
495
496
Prueba de Normalidad
Normal Probability Plot
.999
.99
Probability
.95
.80
.50
.20
.05
.01
.001
490
500
510
MetVal
Av erage: 500.9
StDev : 6.61946
N: 30
Prueba de Normalidad
Normal Probability Plot
.999
.99
Probability
.95
.80
.50
.20
.05
.01
.001
480
485
490
495
500
505
510
515
520
525
MetStan
Av erage: 500.033
StDev : 9.34947
N: 30
Mean
30
500.90
6.62
1.2
MetStan 30
500.03
9.35
1.7
MetVal
StDev SE Mean
Met. Stan.
7.44
7.48
7.52
7.61
7.52
7.63
7.42
7.46
7.54
7.71
Met. Valid
7.56
7.71
7.69
7.52
7.74
7.69
7.47
7.48
7.62
7.4
Met. Stan.
7.46
7.59
7.68
7.69
7.78
7.78
7.55
7.55
7.61
7.48
Met. Valid
7.78
7.58
7.49
7.55
7.63
7.42
7.62
7.74
7.46
7.58
Met. Stan.
7.51
7.56
7.74
7.46
7.78
7.49
7.76
7.55
7.82
7.73
Prueba de Normalidad
Normal Probability Plot
.999
.99
Probability
.95
.80
.50
.20
.05
.01
.001
7.4
7.5
7.6
7.7
7.8
MetVal
Av erage: 7.58733
StDev : 0.111446
N: 30
Prueba de Normalidad
Normal Probability Plot
.999
.99
Probability
.95
.80
.50
.20
.05
.01
.001
7.4
7.5
7.6
7.7
7.8
MetStan
Av erage: 7.59667
StDev : 0.121267
N: 30
Mann-Whitney Confidence
Interval and Test
MetVal
N = 30
MetStan
N = 30
Median =
7.5700
Median =
7.5550
0.0000
DETERMINACIN DE
VERACIDAD
Repeticin 1
Muestr
a2
Repeticin 2
Mtodo a
Validar
Repeticin 1
Se determina por :
Repeticin 2
.
.
.
Muestr
an
Prueba T-Student de
las diferencias o Recta
de Regresin.
Repeticin n
Repeticin n
Met. Stan.
52
59
70
74
281
226
385
434
330
80
Met. Valid
324
60
74
486
146
165
83
90
102
112
Met. Stan.
330
58
72
490
151
169
79
88
104
114
Met. Valid
120
142
174
202
246
284
358
401
468
500
Met. Stan.
116
148
169
198
251
291
349
396
471
496
Prueba de Normalidad
Normal Probability Plot
.999
.99
Probability
.95
.80
.50
.20
.05
.01
.001
-5
Diferencia
Av erage: -0.666667
StDev : 4.31783
N: 30
30
30
Wilcoxon
Statistic
188.5
Estimated
P
0.371
Median
-0.5000
Mean
StDev SE Mean
Diferenc
30
-0.667
4.318
0.788
T
-0.85
P
0.40
Regression Analysis
The regression equation is
Predictor
Coef
Constant
0.748
0.472
Met.Val
0.000
1.00090
StDev
1.453
0.00558
T
0.32
179.29
Analysis of Variance
Source
Regression
0.000
DF
1
Residual Error 28
Total
29
SS
620128
540
MS
620128 32144.76
19
620668
DETERMINACIN DE
PRECISIN
Repeticin 1
MRC
Repeticin 2
Repeticin 3
Se determina por :
RSD de Horwitz.
Repeticin 4
...
Repeticin n
RSD
Horwitz
RSDexp erimental
100%
x
ppm
863
849
856
868
861
860
872
878
853
868
Repeticiones
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
ppm
851
849
864
865
856
862
860
848
864
862
Repeticiones
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
ppm
858
858
869
864
871
868
856
869
872
875
RSD
Horwitz
Desviacin Estandar
Promedio
RSD experimental
MRC
RSD Horwitz
7.91
862.3
0.918%
866
5.8%
DETERMINACIN DE
PRECISIN
Mtodo Estandarizado
Muestr
a
Repeticin 1
Repeticin 1
Repeticin 2
Repeticin 2
Repeticin 3
Repeticin 3
Repeticin 4
Repeticin 4
...
...
Repeticin n
Repeticin n
Se determina por :
Prueba F.
Prueba F
F experimental : Se determina de la siguiente manera:
Fexp erimental
Max( S12 , S 22 )
2
2
Min( S1 , S 2 )
1
F-Te
2
5
10
11
12
13
P-Value
: 0.068
t Levene's Te
Test Statistic: 1.626
2
P-Value
480
490
500
Resultados
510
520
: 0.207
REPETIBILIDAD Y
REPRODUCIBILIDAD DE LOS
RESULTADOS DE ENSAYOS
DEFINICIONES
Condiciones de Repetibilidad
Condiciones en las que un mismo operador obtiene
resultados de ensayo independientes con el mismo
mtodo en muestras idnticas en el mismo laboratorios
y utilizando el mismo equipo dentro de
pequeos
intervalos de tiempo ( ISO 5725-1, 3.14)
REPETIBILIDAD Y
REPRODUCIBILIDAD DE LOS
RESULTADOS DE ENSAYOS
Condiciones de Reproducibilidad
Condiciones en las que se obtiene resultados de ensayo con el
mismo mtodo en muestras idnticas, con operadores diferentes
y utilizando equipos diferentes ( ISO 5725-1, 3.18)
REPETIBILIDAD Y
REPRODUCIBILIDAD DE LOS
RESULTADOS DE ENSAYOS
Desviacin Estndar de Repetibilidad
( Sr)
Es la desviacin Estndar de los resultados de ensayo
obtenidos en condiciones de repetibilidad.
Se calcula como :
Sr
(n 1)S (n 1)
i 1
2
i
i 1
REPETIBILIDAD Y
REPRODUCIBILIDAD DE LOS
RESULTADOS DE ENSAYOS
Desviacin Estndar de Reproducibilidad
( SR )
Es la desviacin Estndar de los resultados de ensayo
obtenidos encondicionesde reproducibilidad
S R (S S )
2
r
2
L
REPETIBILIDAD Y
REPRODUCIBILIDAD DE LOS
RESULTADOS DE ENSAYOS
Donde :
SL : Desviacin estndar de los Laboratorios.
S (S S ) n
2
L
1
S
p 1
2
d
2
d
2
r
n y
p
i 1
n y
p
i 1
REPETIBILIDAD Y
REPRODUCIBILIDAD DE LOS
RESULTADOS DE ENSAYOS
Ratio de Precisin :
S
Ratio
Sr
REPETIBILIDAD Y
REPRODUCIBILIDAD DE LOS
RESULTADOS DE ENSAYOS
Desviacin Estndar Relativa :
Es medido con el coeficiente de variabilidad o desviacin
estndar relativa, que son definidos y utilizados como
medidas de la dispersin de resultados de ensayo en
condiciones de repetibilidad o de reproducibilidad.
REPETIBILIDAD Y
REPRODUCIBILIDAD DE LOS
RESULTADOS DE ENSAYOS
Desviacin Estndar
Relativa :
Desviacin Estndar Relativa de
Reproducibilidad
SR
RSDR
*100%
m
Sr
RSDr *100%
m
REPETIBILIDAD Y
REPRODUCIBILIDAD DE LOS
RESULTADOS DE ENSAYOS
LABORATORIOS
A
B
C
ENSAYOS
7.76
7.88
8.02
7.88
7.74
8.01
7.9
8.67
8.01
n
3
3
3
REPETIBILIDAD Y
REPRODUCIBILIDAD DE LOS
RESULTADOS DE ENSAYOS
2
T1 nI YI
T (n 1) S
5
T2 nI YI
T3 nI
T4 nI
T5
S
T3 p
2
r
T2T3 T1
2
2
Sl
Sr
T3 ( p 1)
T3 ( p 1)
T 2 T
4
3
REPETIBILIDAD Y
REPRODUCIBILIDAD DE LOS
RESULTADOS DE ENSAYOS
T1
71.871
T2
574.134
T3
T4
T5
9.000
27.000
0.416
S 2r
S 2L
0.069
0.055
m
Sr
7.986
0.263
S2R
0.125
REPETIBILIDAD Y
REPRODUCIBILIDAD DE LOS
RESULTADOS DE ENSAYOS
Reproducibilidad del grupo
S2R
S2R
SR
S2r + S2L
0.125
0.353
REPETIBILIDAD Y
REPRODUCIBILIDAD DE LOS
RESULTADOS DE ENSAYOS
Ratio de Precisin
Ratio de Precisin de los laboratorios
Laboratorios Desviacin estndar Ratio de Precisin
A
0.076
2.090
B
0.422
11.634
C
0.156
4.302
REPETIBILIDAD Y
REPRODUCIBILIDAD DE LOS
RESULTADOS DE ENSAYOS
Desviacin Estndar Relativa
Desviacin estndar relativa
Laboratorios Desviacin estndar Promedios Globales RSD
A
0.076
7.847 0.965
B
0.422
8.190 5.147
C
0.156
7.920 1.968
REPETIBILIDAD Y
REPRODUCIBILIDAD DE LOS
RESULTADOS DE ENSAYOS
La desviacin estandar relativa bajo condiciones
de reproducibilidad y repetibilidad es
como sigue :
RSD R = (SR/m)*100% = 1.85%
RSD r = (Sr/m)*100 % = 0.5%
REPETIBILIDAD Y
REPRODUCIBILIDAD DE LOS
RESULTADOS DE ENSAYOS
LABORATORIOS
A
B
C
ENSAYOS
24.760
25.260
25.180
24.800
25.300
25.210
24.770
25.230
25.150
REPETIBILIDAD Y
REPRODUCIBILIDAD DE LOS
RESULTADOS DE ENSAYOS
T1
225.660
T2
T3
5658.454
T4
27.000
T5
S 2r
S 2L
0.005
m
Sr
S2R
9.000
0.001
0.067
25.073
0.029
0.068
REPETIBILIDAD Y
REPRODUCIBILIDAD DE LOS
RESULTADOS DE ENSAYOS
Reproducibilidad del grupo
S2R
S2R
SR
S 2 r + S 2L
0.068
0.261
DETERMINACIN DE
SELECTIVIDAD /
ESPECIFICIDAD
Prueba
de
Especificidad
:
Se
realiza
muy
frecuentemente en tcnicas instrumentales como :
espectofotometra de UV o cromatografa lquida.
Por ejemplo para tcnicas cromatogrficas, se debe de
comparar visualmente los cromatogramas en los
diferentes parmetros importantes como : resolucin,
retencin relativa ( factor de separacin), etc.
DETERMINACIN DE
SELECTIVIDAD /
ESPECIFICIDAD
Espectro de una
muestra de Harina de
Pescado con 500 ppm
de Histamina.
Espectro de la
solucin de muestra
de Harina de pescado
con 500 ppm de
Histamina mas blanco
reactivo
DETERMINACIN DE
SELECTIVIDAD /
ESPECIFICIDAD
Prueba de Selectividad :
Valores Esperados
MRC
MRC
MRC
MRC
MRC
MRC
MRC
Valores Observados
Estndar 1
Resultado 1
Estndar 2
Resultado 2
Estndar 3
Resultado 3
Estndar 4
Resultado 4
Estndar 5
Resultado 5
Estndar 6
Resultado 6
Estndar 7
Resultado 7
DETERMINACIN DE
SELECTIVIDAD
Valores Esperados
Valores Observados
Se determina por :
Prueba T para la
diferencias.
Prueba Wilcoxon para
las diferencias.
Prueba Chi Cuadrado
PRUEBA CHI-CUADRADO
Por lo general, los resultados en un experimento, casi no
coinciden con los valores predichos por la teora o el
modelo en el cual se est trabajando. Esto es as por las
fluctuaciones aleatorias en las mediciones o error en la
medicin. El problema es poder determinar si esas
diferencias se deben al azar, o bien no se ajustan al
modelo terico estudiado, en cuyo caso este deber ser
modificado y vuelto a investigar.
Para verificar este hecho utilizamos pruebas estadsticas
como : Prueba
de Chi-cuadrado, La prueba de
Verosimilitud ( G ), Modelo de Mc-Nemar
PRUEBA CHI-CUADRADO
Estadstico de Contraste:
(Oi Ei )
X
Ei
i 1
2
Oi : Frecuencia Observada.
Ei : Frecuencia Esperada
K : Nmero de Categoras.
PRUEBA CHI-CUADRADO
Estadstico de Tabla:
(1 , k r 1)
PRUEBA CHI-CUADRADO
Criterio:
Se acepta la hiptesis nula, siempre y cuando el
valor de tabla sea mayor o igual al estadstico de
contraste.
Oi
G 2 Oi ln( )
Ei
i 1
Oi : Frecuencia Observada.
Ei : Frecuencia Esperada
K : Nmero de Categoras.
(1 , k r 1)
CATEGORIAS
NORMALES
150
178
MUTANTES
50
22
TOTAL
200
200
PRUEBA CHI-CUADRADO
2
(
O
E
)
2
i
X i
Ei
i 1
k
CATEGORIAS
VARIABLE
ESPERADO
OBSERVADO
SUMANDOS
NORMALES
150
178
5.227
NUMERO DE CATEGORIAS
X2 CALCULADO
NIVEL DE CONFIANZA
X2 TABLA
MUTANTES
50
22
15.680
2
20.907
0.95
3.84
PRUEBA CHI-CUADRADO
CONCLUSIN:
Se tiene evidencia para poder afirmar que el
experimento no cumple las leyes mendelianas, esto
pude ser debido al gen ligado,o una falla de
mtodo en los cruces, etc.
Oi
G 2 Oi ln( )
Ei
i 1
CATEGORIAS
VARIABLE
ESPERADO
OBSERVADO
SUMANDOS
NORMALES
150
178
60.929
NUMERO DE CATEGORIAS
X2 CALCULADO
NIVEL DE CONFIANZA
X2 TABLA
MUTANTES
50
22
-36.123
2
24.806
0.95
3.84
total
total
A
1
m arg fila1 m arg fila 2
total
total
B
1
m arg colum1 m arg colum2
PRUEBA CHI-CUADRADO
CON CORRECCIN DE YATES
Estadstico de Contraste:
X
2
( Oi E i 0.5)
i 1
Ei
Oi : Frecuencia Observada.
Ei : Frecuencia Esperada
K : Nmero de Categoras.
Mtodo
Blanco 4
Lmite de Cuantificacin
del Mtodo
Blanco 5
Blanco 6
Donde
Blanco 7
k = 5, 6 10
DETERMINACIN DE LA
LINEALIDAD
X
Conc. 1
Respuesta
Equipo 1
Conc. 2
Respuesta
Equipo 2
Conc. 3
Respuesta
Equipo 3
Conc. 4
Respuesta
Equipo 4
Conc. 5
Respuesta
Equipo 5
DETERMINACIN DE LA
LINEALIDAD
Demostrar :
1. La relacin
entre X e Y
existe.
2. La relacin
sea lineal.
3. Los residuos
de la regresin
debe estar
libre de
tendencias.
DETERMINACIN DE LA
LINEALIDAD
La relacin entre X e Y existe.
1.
r n i 1
n
2
2
x
y
y
i
i
i 1
i 1
DETERMINACIN DE LA
LINEALIDAD
2. La relacin sea lineal.
Puede determinarse de las siguientes maneras :
Si todas las desviaciones son menores al 5%
yi
%desviacin
1 100%
a bxi
(FAO Gua de Validacin)
DETERMINACIN DE LA
LINEALIDAD
Demostrar en el anlisis de varianza de
la regresin que los coeficientes lineales
son significativos.
a0
y
b0
Analysis of Variance
Source
DF
SS
Regression
0.000
0.28417
0.28417 3091.96
Residual Error
0.00037
0.00009
Total
0.28453
MS
DETERMINACIN DE LA
LINEALIDAD
3. Los residuos de la regresin debe
estar libre de tendencias.
Plot of Residuos
Residuos
0.01
0.00
-0.01
Index
DETERMINACIN DE LA
LINEALIDAD
Descriptive Statistics
Variable: Residuos
Anderson-Darling Normality Test
A-Squared:
P-Value:
-0.010
-0.005
0.000
0.005
0.010
0.015
0.153
0.913
Mean
StDev
Variance
Skewness
Kurtosis
N
3.33E-05
8.57E-03
7.35E-05
0.187499
0.454023
6
Minimum
1st Quartile
Median
3rd Quartile
Maximum
-1.2E-02
-6.3E-03
-7.0E-04
7.15E-03
1.30E-02
0.00
0.01
9.03E-03
2.10E-02
1.02E-02
DETERMINACIN DE
SENSIBILIDAD
DETERMINACIN :
La sensibilidad es cuantificada mediante el coeficiente
de sensibilidad que es determinado de la siguiente
manera :
Re spuesta
Y
Sensibilidad
Concentracin X
DETERMINACIN DE LA
ROBUSTEZ
Se determina por :
Prueba de Anlisis de
Varianza.
Prueba de Youden - Steiner.
DETERMINACIN DE LA
ROBUSTEZ
Prueba de Anlisis de Varianza.
VARIACIN
ENTRE GRUPOS
DENTRO GRUPOS
ERROR
TOTAL
G.L.
k-1
(n-1)k
SS
SSA
SSE
kn-1
SST
MS
SSA/(k-1)
SSE/k(n-1)
F
MSA/MSE
Ftabular F k 1, kn k ,1
Como el valor experimental de F es mayor
que el tabular, podemos concluir que al
menos una de las variaciones influye en los
resultados.
DETERMINACIN DE LA
ROBUSTEZ
Prueba de Youden - Steiner.
Factores
Repeticiones
Resultado
s
Y1
Y2
Y3
Y4
Y5
Y6
Y7
Y8
DETERMINACIN DE LA
ROBUSTEZ
Los efectos de los factores se calculan de la
siguiente manera:
Efecto A
Donde :
Y
Y
YA
4
Y1 Y2 Y3 Y4
Y5 Y6 Y7 Y8
DETERMINACIN DE LA
ROBUSTEZ
El efecto es significativo si :
Efecto A 2.24 S r
DETERMINACIN DE LA
ROBUSTEZ
FACTORES DE VARIABILIDAD :
FACTOR A :
Estndar ( A )
Variable ( a )
Tiempo de Extraccin
2 minutos
1 minuto
FACTOR B :
Estndar ( B )
Variable ( b )
FACTOR C:
Estndar ( C )
Variable ( c )
Tipo de columna
Columna en forma de tubo recto
Columna con dos diametros interiores
FACTOR D:
Estndar ( D )
Variable ( d )
FACTOR E:
Estndar ( E )
Variable ( e )
Tipo de lectura
Lectura segn mtodo
Lectura despues de 1 hora expuesta a la luz.
DETERMINACIN DE LA
ROBUSTEZ
RESULTADOS
FACTORES
A
A
a
a
A
a
A
A
a
B
B
B
b
b
B
b
B
b
C
C
C
C
c
c
C
c
c
D
d
D
D
D
d
d
D
d
E
E
e
E
E
E
e
e
e
DETERMINACIN DE LA
ROBUSTEZ
FACTOR
Aoa
Bob
Coc
Dod
Eoe
Resultado
Sr
2
a
B
C
D
e
3
a
b
C
D
E
4
A
b
c
D
E
5
a
B
c
d
E
6
A
b
C
d
e
7
A
B
c
D
e
8
a
b
c
d
e
988
966
972
980
982
966
978
968
9.93
DETERMINACIN DE LA
ROBUSTEZ
Valor Observ.
Factor1
Factor2
Factor3
Factor4
Factor5
Valor Tabla
6
7
-4
-2
11
22.244
22.244
22.244
22.244
22.244
El
El
El
El
El
Conclusin
Factor no Influye
Factor no Influye
Factor no Influye
Factor no Influye
Factor no Influye
DETERMINACIN DE LA
INCERTIDUMBRE
Conceptos previos
Teora de Errores
Error e Incertidumbre
El error es siempre desconocido, pero
puede estimarse una cota superior para
su valor absoluto. Esta cota se
denomina incertidumbre de la
medida y se denota por X. De la
definicin de error y de incertidumbre
deducimos que el valor real de la
medida se encuentra en el intervalo:
ESQUEMA ILUSTRATIVO
DE LA CONTRIBUCIN DE
ERRORES ALEATORIOS Y
SISTEMTICOS EN EL
CONCEPTO DE
INCERTIDUMBRE
ERROR
( DE UNA MEDIDA)
ERROR SISTEMATICO
ERROR SISTEMATICO
CONOCIDO
CORRECCION
ERROR ALEATORIO
ERROR SISTEMATICO
DESCONOCIDO
ERROR PERMANENTE
RESULTADO
INCERTIDUMBRE
MUESTRA
PROCESO ANALITICO
INCERTIDUMBRE DE :
HERRAMIENTAS
METROLOGICAS
PATRON
RESULTADOS + INCERTIDUMBRE
MATERIAL VOLUMETRICO
EQUIPOS DE MEDIDA
CALIBRACION GENERAL
CALIBRACION METODOLOGICA
UNA ETAPA DEL PROCESO
UNA PESADA
UNA DILUCION
ELCONJUNTO DEL PROCESO
VALIDACION
Error Vs Incertidumbre
Es importante diferenciar los trminos
error
incertidumbre.
Error .- Es la diferencia entre el valor medido y el
valor convencionalmente
verdadero, del objeto que se est midiendo.
Medicin
Caracterstica
de calidad
Personas
Materias
Primas
Importancia de la Incertidumbre
de la Medicin
Usted
puede
interesarse
en
las
incertidumbres
de
medicin
porque
simplemente desea obtener mediciones de
buena calidad y comprender los resultados.
Sin embargo, hay otras razones ms
particulares para conocer las incertidumbres
de medicin.
Importancia de la Incertidumbre
de la Medicin
Hoy en da es muy importante que los
resultados de medicin analticos vayan
acompaados de su incertidumbre. As lo
establece la norma ISO/EIC 17025 , como
sigue:
Importancia de la Incertidumbre
de la Medicin
Importancia de la Incertidumbre
de la Medicin
Satisfacer una tolerancia, donde usted necesita
conocer la incertidumbre antes que pueda decidir
cuando se satisface, o no, la tolerancia establecida.
Necesidad de leer y comprender un certificado
de calibracin o una especificacin escrita de un
ensayo o una medicin.
Importancia de la Incertidumbre
de la Medicin
Las equivocaciones que cometen los
operadores no son incertidumbres de
medicin, son errores groseros. Ellas no deben
tomarse en cuenta para calcular las
incertidumbres. Deben evitarse trabajando
cuidadosamente y mediante la aplicacin de
los controles adecuados.
Importancia de la Incertidumbre
de la Medicin
Las tolerancias no son incertidumbres. Ellas
son los lmites de aceptacin que se han
elegido para un proceso o un producto
Las especificaciones no son incertidumbres.
Una especificacin indica a Usted lo que
espera de un producto. Las especificaciones
pueden tener un alcance amplio, incluso
cualidades no tcnicas, como el aspecto.
Importancia de la Incertidumbre
de la Medicin
La exactitud o su antnimo la inexactitud, no
es lo mismo que incertidumbre.
Desafortunadamente, el uso de los dos trminos
es confuso. Hablando correctamente, exactitud es
un trmino cualitativo, o sea se puede decir que
una medicin es exacta o inexacta. La
incertidumbre es cuantitativa.Las tolerancias no
son incertidumbres. Ellas son los lmites de
aceptacin que se han elegido para un proceso o
un producto.
Importancia de la Incertidumbre
de la Medicin
El anlisis estadstico no es lo mismo que el
anlisis de la incertidumbre. La estadstica
puede usarse para establecer un sinnmero de
conclusiones que no tienen que ser acerca de
incertidumbres. El anlisis de la incertidumbre
solamente utiliza una parte de la estadstica.
Estimacin Incertidumbre
Tipo A
x x
i 1
n 1
Sea la siguiente
frmula :
y realizando
repeticiones
obtenemos :
F
S f ( F , T ,W )
TW
Estimacin Incertidumbre
Tipo B
Distribuciones de Probabilidad
Las ms usadas son :
Distribucin
Distribucin
Distribucin
Distribucin
Distribucin
Rectangular.
Triangular.
Normal.
U.
Poisson.
Distribucin Rectangular
La grfica de su funcin
de distribucin es :
1
f ( x)
2a
Determinacin de la varianza :
2 x 2 f ( x)x
Especificamente para la distribucin rectangular
:
a
2
x
a
x
2a
3
a
2
Ejemplo:
En algunos instrumento de medicin (por ejemplo
de longitud) , la resolucin es conocida ( R ) y se
sabe que el valor X puede estar entre :
x 0 .5 R
En este caso la distribucin rectangular es un
buen modelo donde la incertidumbre estndar
sera :
0 .5 R
UR
3
Distribucin Triangular
La grfica de su funcin
de distribucin es :
x a
0
a 2
f ( x)
a 2 ;0 x a
Determinacin de la varianza :
2 x 2 f ( x)x
Especificamente para la distribucin triangular :
2
a
6
2
Ejemplo:
Si en algn instrumento de medicin de
temperatura, este tiende a que el valor central,
que se encuentra entre sus graduaciones, es el
ms probable y entre medida y medida dista 0.2
F.
En este caso la distribucin triangular es un buen
modelo donde la incertidumbre estndar sera :
0 .1 F
UT
0.0408 F
6
Distribucin Normal
La grfica de su funcin
de distribucin es :
1
f ( x, , )
e
2
x2
2
2
Distribucin U
La grfica de su funcin
de distribucin es :
f ( x)
1
x a x
2
; a x a
Determinacin de la varianza :
2 x 2 f ( x)x
Por lo cual la desviacin estndar sera:
Ejemplo:
Supongamos que la temperatura de la sala de
ensayo contribuye a la incertidumbre y est vara
de + 5C adems que muy dificilmente tomaria
los valores lmites.
En este caso la distribucin U es un buen modelo
donde la incertidumbre estndar sera :
5C
UT
3.54C
2
Distribucin Poisson
La grfica de su funcin
de distribucin es :
m xem
P ( x, m )
x!
Ejemplo:
Supongamos que realizamos recuentos de
colonias de bacterias en placas, las cuales se
distribuyen de acuerdo a una distribucin de
Poisson,teniendo como resultado :
64x104 cfu/ml
En este caso la incertidumbre estndar sera :
cfu
m 64 x10 8 x10
ml
4
Modelos de Clculo de
Incertidumbre
Ventajas:
Se puede estimar la variabilidad de cada etapa
(incertidumbre parcial ), cuantificando el aporte
de cada etapa a la incertidumbre total.
Ayuda a mejorar el conocimiento de las
tcnicas y principios analticos.
Desventajas:
La fragmentacin por etapas para el clculo
de las incertidumbres parciales puede ser a
veces complicado, pues se tiene que tener
mucho conocimiento sobre el mtodo de
ensayo.
Conclusin:
Propagacin de
Incertidumbre
Coeficientes de Sensibilidad
Los coeficientes de sensibilidad son muy
importantes para la estimacin de la
incertidumbre combinada, debido a que
ponderan la implicancia de cada variable que
contribuye a la incertidumbre respecto a la
variable respuesta.
En el ejemplo : f = F ( x1 , x2 , x3 , x4 , ... , xn )
Los coeficientes de sensibilidad
para cada variable seran :
f
ci
xi
F
S f ( F , T ,W )
TW
S
1
S
F TW F
S
F S
cT
2
T T W
T
S
F
S
cW
2
W TW
W
cF
S 13637
16.0in 2
F
852
S 13637
cT
1.09100in 3
T
0.125
S 13637
lb
cW
27285 3
W
0.4998
in
cF
Propagacin de Incertidumbres
A.Propagacin
correlacionadas
con
cantidades
u c u
2
c
2 2
i i
uc
c u
2 2
i i
no
F
S f ( F , T ,W )
TW
uc cF2 u F2 cT2 uT2 cW2 uW2
(16.01) 2 (39.93) 2 (109100) 2 (0.001) 2 (27286) 2 (0.000837) 2
lb
570 2
in
B.Propagacin
con
cantidades
correlacionadas
Esto ocurre cuando las cantidades no son
independientes. Esto es la variacin de Xj
afecta a Xi, por ejemplo.
n 1
u c u 2
2
c
2 2
i i
c c u u r(x , x )
i 1 j i 1
j i
S ( xi, x j )
r ( xi, x j )
S ( xi )S ( x j )
Donde :
S ( xi, x j )
Es la covarianza entre Xi e Xj
Y adems S ( x i ) y S ( x j )son las desviaciones
estndar respectivas.
u c u 2
2
c
2 2
i i
c c u u r(x , x )
i 1 j i 1
j i
Determinando la covarianza de T y W:
n
1
7
2
s (T , W )
(
T
T
)(
W
W
)
1
.
5
10
in
i
i
n(n 1) i 1
S (T , W )
1.5 10 7 in 2
r (T , W )
0.179
4
S (T ) S (W ) (0.001in)(8.37 10 in)
Quedando :
lb
uc 571 2
in
Clculo de la Incertidumbre
Expandida
La incertidumbre expandida vendria a
ser igual a :
U kuc ( y )
Grados de Libertad
Efectivos
Para
esto debemos
de
obtener
las
contribuciones de cada una de las variables y
sus respectivos grados de libertad.
veff
4
c
4
i
u ( y)
n
4
c u ( xi )
vi
i 1
1 u ( xi )
v
2 u ( xi )
Aseguramiento de Calidad de
Resultados
ISO 5725 -2
ESTADISTICA DE MANDEL
Estadstica de Consistencia de Mandel entre
Analistas ( h )
Planteamiento de Hiptesis:
Hipotesis nula : El Analista es consistente
Hipotesis alternante : El Analista no es consistente
Estadstico de Contraste:
Se utilizar el siguiente estadstico:
hi
Donde ,
yi y
2
1 p
( yi y )
p 1 i 1
p = Nmeros de analistas
n= Nmero de repeticiones del ensayo por analista.
ESTADISTICA DE MANDEL
Criterio:
Se comparar con la estadistica de Tabla de Mandel.
Si el valor de h, de la prueba, es menor o igual al valor
tabular de 5%,
la hiptesis nula es aceptada.
Si el valor de h, de la prueba, se encuentra entre los valores
tabulares de 5% y 1 %, se considera valor rezagado.
Si el valor de h, de la prueba, es mayor que el valor tabular
1 %, se considera valor no consistente y se elimina del
anlisis.
ESTADISTICA DE MANDEL
EJEMPLO :
Resultado de los ensayos
Porcentaje de Grasa en Harina de Pescado
LABORATORIOS
A
B
C
ENSAYOS
7.76
7.88
8.02
7.88
7.74
8.01
7.9
8.67
8.01
ESTADISTICA DE MANDEL
Promedios y desviaciones
estndar de cada laboratorio
ESTADISTICA DE MANDEL
0.076
0.422
0.156
ESTADISTICA DE MANDEL
Prueba de Mandel (h):
Clculo de la consistencia entre laboratorios
1.15
1.15
ESTADISTICA DE MANDEL
Estadstica de Consistencia de Mandel dentro de Analistas ( k )
Planteamiento de Hiptesis:
Hipotesis nula : Los resultados del analista son consistentes
Hipotesis alternante : Los resultados del analista son consistentes
Estadstico de Contraste:
Se utilizar el siguiente estadstico:
ki
Donde ,
Si
S
i 1
2
i
p = Nmeros de analistas
S= Desviacin Estndar de cada analista.
ESTADISTICA DE MANDEL
Criterio:
Se comparar con la estadistica de Tabla de Mandel.
Si el valor de k, de la prueba, es menor o igual al valor tabular de 5%,
la hiptesis nula es aceptada.
Si el valor de k, de la prueba, se encuentra entre los valores tabulares de
5% y 1 %, se considera valor rezagado.
Si el valor de k, de la prueba, es mayor que el valor tabular 1 %,
se considera valor no consistente y se elimina del anlisis.
ESTADISTICA DE MANDEL
ESTADISTICA DE MANDEL
Interpretacin de los resultados de
las pruebas de consistencia
ESTADISTICO DE COCHRAN
ESTADISTICO DE COCHRAN
Estadstico de Contraste:
Se utilizar el siguiente estadstico:
C
Donde ,
Si max
p
S
i 1
2
i
p = Nmeros de analistas
S = Desviacin Estndar del analista.
ESTADISTICO DE COCHRAN
Criterio:
Se comparar con la estadstica de Tabla de Cochran.
Si el valor de C, de la prueba, es menor o igual al valor
tabular de 5%, la hiptesis nula es aceptada.
Si el valor de C, de la prueba, se encuentra entre los valores
tabulares de 5% y 1 %, se considera valor rezagado.
Si el valor de C, de la prueba, es mayor que el valor tabular
1 %, se considera valor no preciso y se elimina del anlisis.
ESTADISTICO DE COCHRAN
VALIDEZ DE LOS RESULTADOS:
Prueba de Cochran (Variabilidad dentro del Laboratorio)
Prueba de Cochran (C )
LABORATORIOS
A
B
C
ENSAYOS
7.76
7.88
8.02
7.88
7.74
8.01
7.9
8.67
8.01
ESTADISTICO DE COCHRAN
Laboratorios Promedios Globales Desviacin estndar
A
7.847
0.076
B
8.190
0.422
C
7.920
0.156
Prueba de Cochran:
0.855
ESTADISTICO DE COCHRAN
Interpretacin de los resultados
ESTADISTICA DE GRUBBS
4.1
Estadstica de Grubss ( G )
Planteamiento de Hiptesis:
Hipotesis nula : El Analista no obtiene un resultado
atpico.
Hipotesis alternante : El Analista obtiene un
resultado atpico .
ESTADISTICA DE GRUBBS
Estadstico de Contraste:
Se utilizar el siguiente estadstico:
y extr y
Donde ,
Donde:
1
2
S
( yi y )
p 1 i 1
p = Nmeros de analistas
S = Desviacin Estandar General.
ESTADISTICA DE GRUBBS
Criterio:
Se comparar con la estadistica de Tabla de Cochran.
Si el valor de G, de la prueba, es menor o igual
al valor tabular de 5%, la hiptesis nula es aceptada.
Si el valor de G, de la prueba, se encuentra entre los
valores tabulares de 5% y 1 %, se considera valor rezagado.
Si el valor de G, de la prueba, es mayor que el valor tabular
1 %, se considera valor atpico y se elimina del anlisis.
ESTADISTICA DE GRUBBS
ENSAYOS
7.76
7.88
8.02
7.88
7.74
8.01
7.90
8.67
8.01
ESTADISTICA DE GRUBBS
Laboratorios Promedios Globales Desviacin estndar
A
7.847
0.076
B
8.190
0.422
C
7.920
0.156
Prueba de Grubbs
x1
x2
x3
Promedio
s
7.847
7.920
8.190
7.986
0.181
ESTADISTICA DE GRUBBS
Valores crticos de Grubbs ( G)
G1 Simple bajo
G3 simple alto
0.768
1.13
n=3
1.155
1.155
ESTADISTICA DE GRUBBS
Interpretacin de los resultados