Ingeniera en Nanotecnologa

Cultivo de tejidos
vegetales:

Callos

Aragn Romero Ruth

Alejandra
Sabas Flores Bentez
Samantha Ala

Biotecnologa II

Cultivo de tejidos vegetales

Organizados
Explantes meristemticos
Races
Embriones

No organizados
Callos
Suspensiones celulares
Protoplastos

Estructura vegetal

DEFINICIN DE CALLO
Tejido
desorganizado
formado por una masa de
clulas vegetales tumorales
debido a que stas crecen
de manera descontrolada.

Brote
adventicio

Callos de maiz

http://www.ira.cinvestav.mx/Investigaci%C3%B3n/DepartamentodeIngenier%C3%ADaGen%C3%A9tica/ProfesoresInvestigadores/DraJofreyGarfiasAlbaEstela/CultivodeTejidosyTransformaci
%C3%B3nGen%C3%A9tica/tabid/298/language/es-MX/Default.aspx

MTODOS DE OBTENCIN
DE CALLOS
Naturalmente
Cortes en la planta
Estrs
In vitro
Explante + base hormonal
Desdiferenciacin celular
Regeneracin

MTODO NATURAL
El tejido calloso se forma en

respuesta
a
daos
mecnicos
sufridos
por
influencia
del
medio
ambiente o por invasin de
tejidos
por
ciertos
microorganismos
Tronco con tejido calloso
Calva C. G., Rios L. E. (1999). CULTIVO DE CALLOS Y ACUMULACIN DE METABOLITOS SECUNDARIOS. Aspectos aplicados de la biotecnologa. pp 267-

MTODOS
VITRO

IN

CLULAS MERISTEMTICAS
Se distinguen de otras clulas por:
tamao relativamente pequeo
citoplasma denso
pared celular fina
gran ncleo

Escuela Universitaria de Ingeniera tcnica agrcola. Clulas meristemticas (2004) Disponible en Internet:
http://lan.inea.org:8010/web/materiales/web/histologia/celulas_meristematicas.htm

PASOS A SEGUIR PARA EL

CULTIVO DE CALLOS
a) Induccin,

comienzan

su

crecimiento.
Proliferacin celular y aumento
de masa celular.
b) Induccin de la diferenciacin
c) Envejecimiento y prdida de la
capacidad
de
crecimiento
acelerado

1. Eleccin de la planta donante

2. Desinfestacin; eliminar todo organismo que se encuentre en su

superficie del fragmento de tejido u rgano vegetal

3. Inocular un medio de cultivo gelificado con el explante.

Obtencin de callo de zanahoria

Calva Calva, G., & Prez Vargas, J., (2005) CULTIVO DE CLULAS Y TEJIDOS VEGETALES: FUENTE DE ALIMENTOS PARA EL FUTURO,
Revista Digital Universitaria, 6(11), Pp 1067-6079.

4. Incuba bajo condiciones ambientales de luz, temperatura y

humedad controladas.
5. Regular las condiciones fisicoqumicas y nutricionales
Temperatura 25-28 C, pH entre 5.2- 6.5 y luz de 0 a 12,000 lux
6. Formacin de una masa celular amorfa.

Callos de crisantemo. A. Callo amarillo embriognico. B. Callo friable

blanco. C. Callo friable rojo. D. Callognesis y caulognesis.

MEDIO DE CULTIVO
Soporte
Agar, agarosa, polisacridos, lana de vidrio, papel de filtro, arena
Sales minerales
Molibdeno para la nitrato reductasa y el magnesio para algunas
cinasas
Vitaminas
Vitaminas B1, B2, B6, vitamina H, vitamina E, cido flico
Fuente de carbono
Sacarosa, glucosa y en menor grado la maltosa
Fuentes de nitrgeno
Nitrato, amonio, urea, extracto de levadura y aminocidos
Reguladores de desarrollo

Murashige T., Skoog F. (1962). A REVISED MEDIUM FOR RAPID GROWTH AND BIOASSAYS WITH TOBACCO TISSUE
CULTURES. Physiol. Plant. 15(3):473-497

VENTAJAS

Incrementa la respiracin celular.

Incrementa actividad de enzimas glicolticas.

Aumenta el nmero de ribosomas y polirribosomas.

DESVENTAJAS

Desaparecen productos de reserva.

REGULADORES DE DESARROLLO
Fitohormonas y sus inhibidores
Ej. Auxinas (cido 2,4-diclorofenoxiactico) , giberelinas y citoquininas

(bencilaminopurina)

Los callos obtenidos mediante este procedimiento pueden:

a) Subcultivarse para su mantenimiento y propagacin.
b) Inducir su diferenciacin para formar rganos o embriones.
c) Pasar a un medio de cultivo lquido para obtener clulas en

suspensin.

Figura 4. Etapas de la regeneracin in Vitro de maz.

Crozier A., Kamiya Y., Bishop G., Yokota T., (2000). BIOSYNTHESIS OF HORMONES AND ELICITORS MOLECULES. Biochemistry and Molecular
Biology of Plants. USA: American Society of Plant Physiologists, pp. 850-929.

DESVENTAJAS DEL MTODO DE CULTIVO

DE CALLOS
No ayuda en la micropropagacin.
Pueden provocar variaciones somaclonales

Regeneracin limitada a genotipos especficos

A veces los cambios no son prcticos y no
ayudan a la mejora de la planta.
Para que la organognesis ocurra se deben producir

cambios que conduzcan a la organizacin celular.

TRANSFORMACIN DE PLANTAS
El tejido con el DNA forneo puede rediferenciarse hasta

generar plantas transgnicas con propiedades genticas,

bioqumicas y morfolgicas diferentes a la planta madre.

BACTERIAS DEL SUELO

Ej. Agrobacterium tumefasciens se obtiene un tumor celular

conocido como agalla de la corona

Ej. Agrobacterium induce el crecimiento de races areas

pilosas

Figura 2. Ttumor inducido por infeccin con Agrobacterium

tumefasciens en un planta de tabaco (A); callos embriognicos
(B), brotes (C), e induccin de races (D), de Vanilla planifolia;
Park S., Y Facchini P. J. (2000). AGROBACTERIUM RHIZOGENES-MEDIATED TRANSFORMATION OF OPIUM POPPY, PAPAVER SOMNIFERUM L., AND
CALIFORNIA POPPY, J. Exp. Bot. 51(347): 1005-1016.

BIOBALSTICA
Bombardeo

vegetales
cubiertas
forneo.

de
tejidos
con
partculas
con
el
DNA

APLICACIN
Una vez obtenidos los callos a partir de
algn explante, pueden disgregarse para
obtener una suspensin de clulas.
Esta suspensin puede:

utilizarse para generar embriones somticos y

semillas sintticas

cultivarse para producir metabolitos secundarios

con gran utilidad para las industrias; por

ejemplo, mentol, vincristina, taxol y algunos
edulcorantes.

.
Segretn, M. E., (2008) LOS CULTIVOS CELULARES Y SUS APLICACIONES II Argentina:

Figura 7. Cultivo de clulas y rganos

vegetales.

E
N
O
I
S
U
L
C
S
N
O
C