MANIPULACION DE

ANIMALES DE
LABORATORIO PARA LA
INVESTIGACION
BIOFARMACEUTICA

INTEGRANTES:
AQUINO HUAMAN,
VICTOR
BRAVO MAYTA,
JUAN
LIMAYMANTA
GONZALES, JIMMY
CASO LOMBARDI,
JOSE
MARINO PEREZ,
MAX

POLITICAS Y
RESPONSABILIDADES
INSTITUCIONALES

Capacita al .

Visitas
rutinarias

Personal operario
y otros expertos.

identificar

Afecta???
?

RIESGO
evaluar

Cuanto y
cuando???

INSTALACIONE
S

ANIMALES

SEGURIDAD DEL
PERSONAL
EQUIPO DE
PROTECCION
PERSONAL

HIGIENE

PREVENCIN

males de experimentaci

Cientos de millones de animales son utilizados

cada ao en pruebas de toxicidad, como
recursos de aprendizaje en las facultades o
modelos
de
investigacin
en
diversos
laboratorios de todo el mundo. Ratones y ratas,
hmsters, conejos, jerbos, perros padecen
nuestros experimentos de biologa, bioqumica,
fisiologa, psicologa.

Investigaciones recientes sugieren que ms de

115 millones de vertebrados (ms de 12
millones de ellos en la UE) podran ser usados
anualmente en experimentacin en todo el
mundo.

Se estima que los diez pases que ms usan

animales en experimentos son Estados Unidos,
Japn, China, Australia, Francia, Canad, Reino
Unido, Alemania, Taiwn y Brasil (Tomado de la
web oficial de la European Coalition to End
Animal Experiments (ECEAE).

Uno de los pilares de esta era del consumo es

la novedad. Para satisfacer esta demanda, el
mercado incentiva el lanzamiento, cada ao, de
nuevos productos, que han de ser probado en
los ojos, la piel, los intestinos y los pulmones de
animales, cuyo nico delito para ser sometidos
a semejante tortura es ser fisiolgicamente
parecidos a nosotros. Es decir, entre otras
cosas, sufren como nosotros.

Es difcil imaginar cundo llegar el da en que

no haya un solo laboratorio con animales.
Mientras tanto, es necesario que haya comits
de tica en cada uno de ellos y que en esos
comits se escuche la voz del movimiento
animalista.

MUESTREO EN ANIMALES DE
EXPERIMENTACION EN
LABORTORIO
Expositor : Juan
Bravo Maita

EXTRACCION DE SANGRE

LA TOMA DE MUESTRA DE SANGRE PROVOCA ESTRS EN LOS ANIMALES

POR SU MANIPULACION . SE DBE TENER EN CUENTA LOS CAMBIOS
FISIOLOGICOS POR ESTRS PARA PODER VALIDAR LOS RESULTADOS DEL
EXPERIMENTO
LA TOMA DE MUESTRA PUEDE SER DE ACCESO VENOS , ARTERIAL, O
PUNCION CARDIACA
PREPARACION DEL LUGAR

ES IMPORTANTE MANTENER LA ASEPCIA

DEPILACION DEL ANIMAL Y LOCALIZACION DE LA FUENTE DE MUESTREO
LA ZONA RAZURADA DEBE DE SER DESINFECTADA CON YODO POVIDONA
O ALCOHOL
LA SUJECION DEBE SER SUAVE CON PERSONAL CON EXPERIENCIA
EN PEQUEOS ANIMAELS DEBEN SER ANESTESIADOS LOS ANIMALES
GRANDES SIN ANESTECIA

ES UNA TECNICA PARA

DISMINUIR EL DAO Y EL
ESTRS AL ANIMAL POR
HEMORRAGIAS
DEBE SER UTILIZADA PARA
EVITAR ENTRADAS REPETIDAS
AL MISMO LUGAR Y EVITAR
SANGRADO PROFUSO
SE BUSCA EVITAR EL
MOVIMIENTO DEL ANIMALES

CANULACION

Canulacion corta (menos de un dia)

Canulacion larga(dos dia a mas)

EQUIPAMIENTO PARA LA CANULACION

Propileno
Polipropileno
Polietileno
Nylon
Goma siliconada
Canulas de tygon (se recomienda
con suero con heparina)

SANGRADO ARTERIAL

LA VENTAJA DE ESTE METODO

CON LA EXTRACCION VENOSA
Y LA CANULACION ES QUE SE
OBTIENE VOLUMENES
GRANDES DE SANGRE EN
CORTO TIEMPO
ESTE METODO ES MUY
DELICADO , PUES PUEDE
PROBOCAR TROMBOS Y
AFECTAR LA IRRIGACION DE
ALGUNSO ORGANOS
EN ESTE METODO AUMENTAN
EL RIESGO DE HEMORRAGIAS
LETALES

SIEMPRE SE LLEVA BAJO

ANESTECIA GENERAL A
TODOS LOS ANIMALES
DE LABORATORIO
SE PINCHA EN
VENTRICULO
IZQUIERDO

PUNCION CARDIACA

Se usa para sangras a blanco y

muestras nicas de sangre en cobayos y
hamsters
Se tiene que asegurar la muerte del
animal en una puncin final
Se puede hacer sangras consecutivas
pero justificada y con cnulas de larga
duracin

VOLUMENES DE SANGRE A
EXTRAER

VIAS DE ADMINISTRACION
La industria
farmacutica ha
investigado las dosis
permitibles para cada
animal las vas que son
mas efectivas

VIA INTRAPERITONEAL: es una de las vas ms

utilizadas en el laboratorio.

En el caso del conejo, se toma por el dorso, se

vuelve hacia arriba presentando la regin abdominal,
se sujeta firmemente de las patas posteriores y se
inyecta en angulo de 45 en la parte alta del
cuadrante inferior izquierdo del rea abdominal.

En el ratn y la rata, se expone la regin abdominal y

se inyecta en el cuadrante inferior izquierdo.

VIA ORAL: Por esta va se administran

soluciones y suspensiones por medio de
una sonda de pequeo calibre que permite
la introduccin del frmaco a la cmara
gstrica por el hocico del animal. Esta
tcnica se aplica con el conejo, la rata y el
ratn.

VIA INTRAVENOSA: En el conejo se elige

la vena marginal de la oreja, en donde se
inserta la aguja con el bisel hacia arriba. En
ratas y ratones se puede utilizar la vena
marginal de la cola.

VIA INTRAMUSCULAR: En el caso de esta va, se presenta el dorso del

animal y el frmaco se deposita con una aguja de 27 X 13 mm en la parte
posterior de los cuartos traseros.

VIA SUBCUTANEA: El frmaco es depositado por debajo de la piel del

dorso con una aguja de 27 x 6 mm, levantando la piel con una mano e
introduciendo la aguja con la otra.

VIA INTRADERMICA: Son ensayos de respuesta

inmune, inflamatorias o de sensibilidad . Volumenes a
usar 0.05 a 0.01ml dependiendo del grosor de la piel

Eutanasia

Mecanismos

HIPOXIA
Depresin directa de las
neuronas que
comprometen las
funciones vitales
Disrupcin fsica de la
actividad cerebral

Mtodos
Fsicos

Disparo
Concusin
Aturdimiento
Elctrico
Dislocacin
Cervical
Maceracin
Irradiacin
con
Microondas

Mtodos
Qumicos

Agentes
Inhalatorios

Monxido de
Carbono
Dixido de
Carbono
Halotano

Anestsicos
Inhalatorios
Voltiles

Enflurano
Isoflurano

Agentes
Inyectables

Barbitricos

Mtodos NO
aceptables
para Eutanasia

Descompresin
/ vaco
Hipotermia
Hipertermia
Ahogamiento/
Extraccin de
agua
Rotura de
cuello
Perxido de
Nitrgeno
Cloroformo

RESTRICCIONES DE
NECESIDADES
BSICAS
DURANTE LA
EXPERIMENTACIN

Restriccin
Fsica

La restriccin fsica es el uso

de medios manuales o
mecnicos
para
limitar
algunos
o
todos
los
movimientos normales del
animal con el propsito de
examinarlo,
tomar
muestras,
administrar
medicamentos
y
otras
manipulaciones teraputicas

En la mayora de las
ocasiones en que se aplica,
los
animales
son
inmovilizados por lapsos
breves,
generalmente
minutos.

-Los aparatos de restriccin

no deben considerarse como
mtodos
de
alojamiento
normales.
-Los aparatos de restriccin
no deben usarse por simple
conveniencia al manipular o
manejar animales.

Restriccin de Lquido o
Cuando
las
alimento
situaciones
experimentales
requieran
restringir
la
ingestin
de
lquido
o
alimento,
debern
brindarse, por lo
menos,
las
cantidades
mnimas
para
permitir
el
desarrollo de los
animales jvenes
y para mantener
el bienestar a
largo plazo de

La restriccin es medida
como un porcentaje de la
ingestin ad libitum o del
consumo diario, o como
cambio
porcentual
conforme al peso
corporal del animal.
En el caso de limitacin
de liquido se deben tomar
precauciones para evitar
la deshidratacin aguda o
crnica
Se debe prestar especial
atencin
al
aseguramiento de que los
animales consuman una
dieta
adecuadamente
balanceada

Mltiples Intervenciones
Quirrgicas Mayores
La ciruga mayor penetra o
expone una cavidad corporal
o produce un menoscabo
substancial de la funcin
fsica o fisiolgica.

La
realizacin
de
varias
intervenciones
quirrgicas
mayores,
con
recuperacin entre ellas, en el
mismo animal no est aprobada,
pero puede permitirse si el
investigador
la
justifica
cientficamente

LIMITACIONES DE
LOS ESTUDIOS DE
BIOEQUIVALENCIA:
ASPECTOS
PRACTICOS

El objetivo general de los

estudios
de
bioequivalencia
es
comparar
dos
formulaciones diferentes
de un mismo frmaco para
establecer su similitud.
Este tipo de estudios son
frecuentes tanto en la fase
de
desarrollo
de
un
frmaco como durante la
etapa comercial de un
medicamento.

La razn de ser de los

estudios
de
bioequivalencia
con
medicamentos
genricos
es
la
demostracin de su
similitud de acuerdo a
unos
limites preestablecidos
para que se pueda
garantizar
la
intercambiabilidad
entre
distintos
productos
farmacuticos

Limitaciones de los estudios

de bioequivalencia
Limitaciones prcticas por la
indefinicin de las
recomendaciones
internacionales sobre diseo y
desarrollo de los estudios,
anlisis farmacocintico y
estadstico
Limitaciones del
diseo cruzado
clsico segn las
caractersticas del
frmaco.

Dudas en la
interpretacin de los
resultados.

Limitaciones conceptuales
en cuanto a la
intercambiabilidad de los
preparados y en cuanto a
la extrapolacin de los
datos a la poblacin
general.

LIMITACIONES PARA EL
ESTUDIO DE BIOEQUIVALENCIA
1.- Limitaciones practicas por la definicin de las recomendaciones internacionales
sobre diseo y desarrollo de los estudios, anlisis farmacocintico y estadstico
Publicaciones cientficas y de recomendaciones que nos sealan cual es el camino a seguir para desarrollar un
estudio de bioequivalencia

Tipo
Tipo de
de diseo
diseo ms
ms recomendable
recomendable
(cruzado)
Forma
de
distribucin
(cruzado) Forma de distribucin de
de los
los
tratamientos
(asignacin
aleatoria
para
tratamientos (asignacin aleatoria para
secuencias)
secuencias)

Tipo
Tipo de
de parmetros
parmetros
farmacocinticos
farmacocinticos a
a analizar
analizar
(rea
bajo
la
curva
(rea bajo la curva y
y
concentracin
mxima)
concentracin mxima)

Forma
Forma de
de analizar
analizar
estadsticamente
estadsticamente los
los
resultados
(anlisis
estadstico
resultados (anlisis estadstico
de
de parmetros
parmetros AUC
AUC y
y Cmax)
Cmax)

Forma
Forma de
de evaluar
evaluar posibles
posibles
problemas
estadsticos
problemas estadsticos (el
(el efecto
efecto
secuencia
o
algunos
datos
secuencia o algunos datos
aberrantes.)
aberrantes.)

LIMITACIONES PRACTICAS POR LA DEFINICIN DE LAS

RECOMENDACIONES INTERNACIONALES SOBRE DISEO Y
DESARROLLO DE LOS ESTUDIOS, ANLISIS FARMACOCINTICO Y
ESTADSTICO
Tambin seala que el nmero de participantes en el estudio no debe ser

Tambin seala que el nmero de participantes en el estudio no debe ser

menor de 12 (recomendable de acuerdo a los parmetros farmacocinticos)
Periodo de lavado suficiente para evitar efectos de arrastre

Establecer tiempos de muestreo adecuados para determinar suficientemente

bien Cmax y al menos el 80% del AUC

Las recomendaciones de la FDA americana o de la Agencia Europea del Medicamento

sealan algunos aspectos del diseo del estudio relevantes para su correcta realizacin.
Dudas en la aplicacin de las recomendaciones internacionales

LIMITACIONES PRACTICAS POR LA DEFINICIN DE LAS

RECOMENDACIONES INTERNACIONALES SOBRE DISEO Y
DESARROLLO DE LOS ESTUDIOS, ANLISIS FARMACOCINTICO
Y ESTADSTICO
Muchos medicamentos estn autorizados
para ser utilizados a diferentes dosis.

Se elige la dosis ms utilizada para

probar bioequivalencia en la
presentacin que ms pacientes
usan.

Se elige la dosis ms alta, a fin

de facilitar la medicin en
plasma del frmaco.

De esta eleccin depende el diseo de los puntos de muestreo que junto a la sensibilidad condiciona a una
buena interpretacin de los resultados.

Tampoco se establece con claridad como

elegir el medicamento de referencia

Lo lgico es elegir el original, pero puede haber copias que se vendan ms y

que en buena lgica seran las especialidades a sustituir, por tanto con la que
sera til demostrar intercambiabilidad.

LIMITACIONES PRACTICAS POR LA DEFINICIN DE LAS

RECOMENDACIONES INTERNACIONALES SOBRE DISEO Y
DESARROLLO DE LOS ESTUDIOS, ANLISIS
FARMACOCINTICO Y ESTADSTICO
La variabilidad en los parmetros
farmacocinticos influye en el
tamao muestral necesario para
mostrar bioequivalencia

La utilizacin de dosis
mltiples o de diseos
repetidos puede disminuir la
variabilidad

Permitir tamaos muestrales ms limitados

En cuanto a las caractersticas de los participantes en los estudios de
bioequivalencia
Incluira gran variedad de sujetos y consecuentemente
aumentara la variabilidad de los parmetros cinticos y
el tamao muestral.
Ni
Ni el
el nmero
nmero de
de muestras
muestras ni
ni la
la duracin
duracin del
del periodo
periodo de
de lavado
lavado estn
estn definidos,
definidos, y
y de
de ambos
ambos
puede
puede depender
depender la
la validez
validez de
de los
los resultados
resultados

LIMITACIONES PRACTICAS POR LA DEFINICIN DE LAS

RECOMENDACIONES INTERNACIONALES SOBRE DISEO Y
DESARROLLO DE LOS ESTUDIOS, ANLISIS
FARMACOCINTICO Y ESTADSTICO
Aunque las normas nos sealan en qu
situaciones pueden hacerse estudios de
bioequivalencia usando los parmetros
farmacocinticos de los metabolitos

cuando se trata de profrmacos, las

concentraciones plasmticas muy
bajas o la vida media muy corta y el
metabolito refleje la biodisponibilidad
de la sustancia activa

No est claro qu hacer cuando existe actividad

tambin en el frmaco administrado ni qu hacer
cuando se miden ambos.

Tampoco hay referencias explcitas a la

bioequivalencia de frmacos con
estereoismeros.

B)
ENEN
LA INTERPRETACIN
DE LOS
2- DUDAS
DUDAS
LA INTERPRETACIN
RESULTADOS

DE LOS RESULTADOS

Los parmetros farmacocinticos principales

(Se sustenta el anlisis estadstico). Grado de
absorcin.

El rea bajo la curva (Como exponente de la

cantidad del frmaco biodisponible)
Concentracin mxima que se alcanza (Como
exponente de la velocidad de disposicin)
*Tiempo para alcanzar la Cmax

El rea bajo la curva

rea bajo la
curva hasta el
ultimo tiempo
medido

rea bajo la
curva total (la
medida mas la
extrapolada)

El rea bajo la
curva extrapolada
debe ser menor
del 20% del total.

Concentracin mxima que se

alcanza

No es buen indicador de la velocidad de

adsorcin

reas
parciale
s

Cmax
pondera
da con
el rea
bajo la
curva

El
parmet
ro p

Mxima concentracin (Cmax)

Se analiza estadsticamente
Intervalos de confianza
Depende de la velocidad y del grado de
absorcin, y el tiempo requerido para alcanzar
Cmax ,que depende de la rapidez de la
absorcin .Se acepta en general que los
parmetros de biodisponibilidad del genrico
no deben diferir del producto de marca en
ms de un 20%.

Variaciones en
diseo y
Lasellimitaciones
anlisis de los
estudios
Anlisis
farmacocintico y
estadstico
Informe final

Autorizacin

LIMITACIONES CONCEPTUALES
EN
CUANTO
A
LA
INTERCAMBIABILIDAD DE LOS
PREPARADOS Y EN CUANTO A
LA EXTRAPOLACIN DE LOS
DATOS A LA POBLACIN
GENERAL