ANLISIS DE LAS

PROTENAS
CONSIDERACIONES
GENERALES

PROTENAS

SON COMPONENTES ABUNDANTES EN

TODAS LAS CLULAS.

CASI TODAS (EXCEPTO LAS DE

ALMACENAMIENTO) SON IMPORTANTES
PARA LAS FUNCIONES BIOLGICAS Y/O LA
ESTRUCTURA CELULAR.

LAS PROTENAS DE LOS ALIMENTOS SON

MUY COMPLEJAS.

COMPOSICIN DE LAS
PROTENAS

ESTN CONSTITUDAS POR: HIDRGENO,

CARBONO, NITRGENO, OXGENO Y AZFRE.

LOS BLOQUES DE CONSTRUCCIN DE LAS

PROTENAS SON 20
-AMINOCIDOS.

LAS UNIONES ENTRE RESIDUOS DE

AMINOCIDOS EN UNA PROTENA SON
ENLACES PEPTDICOS.

COMPOSICIN DE LAS
PROTENAS

EL NITRGENO ES EL ELEMENTO MS DISTINTIVO

PRESENTE EN LAS PROTENAS.

GENERALMENTE LAS PROTENAS RICAS EN

AMINOCIDOS BSICOS CONTIENEN MS
NITRGENO.

SIN EMBARGO, EL CONTENIDO DE NITRGENO EN

VARIAS PROTENAS ALIMENTICIAS VARA DE 13.4
19.1% DEBIDO A LA VARIACIN EN LA COMPOSICIN
DE AMINOCIDOS ESPECFICA DE LAS PROTENAS.

CLASIFICACIN DE LAS
PROTENAS

COMPOSICIN

ESTRUCTURA

FUNCIN BIOLGICA

PROPIEDADES DE SOLUBILIDAD

COMPLICACIONES EN EL
ANLISIS DE PROTENAS
CARACTERSTICAS FSICO
QUMICAS DE LOS ALIMENTOS
SIMILARES A LOS DE LAS
PROTENAS

FUENTES DE NITRGENO NO
PROTICO

AMINOCIDOS LIBRES
PEQUEOS PPTIDOS
CIDOS NUCLICOS
FOSFOLPIDOS
AZCARES AMINAS
PORFIRINA
ALGUNAS VITAMINAS

FUENTES DE NITRGENO
NO PROTICO

ALCALOIDES
CIDO RICO
UREA
IONES DE AMONIO

OTROS MACROCOMPONENTES
DE LOS ALIMENTOS QUE
PUEDEN INTERFERIR CON EL
ANLISIS DE PROTENAS

LPIDOS

CARBOHIDRATOS

MTODOS DESARROLLADOS
PARA MEDIR EL CONTENIDO
PROTICO
FUNDAMENTOS:
DETERMINACIONES DE NITRGENO
ENLACES PEPTDICOS
CIDOS AROMTICOS
ABSORTIVIDAD UV DE LAS PROTENAS
GRUPOS AMINO LIBRES
PROPIEDADES DE DISPERSIN DE LA LUZ
CAPACIDAD DE ADHESIN DE COLORANTES

IMPORTANCIA DEL ANLISIS

DE PROTENAS

DETERMINACIN DE ACTIVIDAD
BIOLGICA. EJEMPLO: PECTINASAS
DURANTE LA MADURACIN DE
FRUTOS.
INVESTIGACIN SOBRE PROPIEDADES
FUNCIONALES. EJMPLO: GLIADINA Y
GLUTENINAS PARA LA ELABORACIN
DEL PAN.
ETIQUETAMIENTO NUTRICIONAL

NECDESIDAD DEL ANLISIS DE

PROTENAS

CONTENIDO PROTICO TOTAL

COMPOSICIN DE AMINOCIDOS
CONTENIDO DE ALGUNA PROTENA
PARTICULAR EN UNA MEZCLA
CONTENIDO PORTECO DURANTE EL
AISLAMIENTO Y PURIFICACIN DE UNA
PROTENA
NITRGENO NO PROTICO
VALOR NUTRITIVO DE UNA
(DIGESTIBILIDAD, BALANCE PROTICO)

CONTENIDO PROTICO
EN LOS ALIMENTOS
PRODUCTOS LCTEOS
LECHE ENTERA
3.5%
LECHE DESHIDRATADA DESGRASADA 35.9%
QUESO CHEDDAR
25%

HUEVOS

12.9%

CONTENIDO PROTICO EN LOS

ALIMENTOS
CARNES
RES, BISTEAK, MAGRO CON GRASA 28.6%
PUERCO, MAGRO CON GRASA, DESHUESADO
17.1%
PECHUGA DE POLLO
27.3%
PESCADO
BACALAO COCINADO
28.5%
ATN EN ACEITE ENLATADO
24.2%

CONTENIDO PROTICO EN
LOS ALIMENTOS
CEREALES
ARROZ, INTEGRAL, CRUDO
ARROZ REFINADO, CRUDO
HARINA DE TRIGO INTEGRAL
HARINA DE MAZ
SPAGHETTI, SECO
ALMIDN DE MAZ

7.5%
6.7%
13.3%
7.8%
12.5%
0.3%

CONTENIDO PROTICO EN
LOS ALIMENTOS
FRUTAS Y VEGETALES
PAPA ENTERA, CRUDA
1.6%
ESPRRAGOS VERDES
2.5%
TAPIOCA
0.6%
FRIJOLES, SECOS, TODAS LAS VARIEDADES
22.3%
SOYA SECA
34.1%

CONTENIDO PROTICO EN LOS

ALIMENTOS

FRUTAS Y SEMILLAS
MANZANA ENTERA, CRUDA
0.2%

ALMENDRAS ENTERAS
18.6%

MTODOS DE DETERMINACIN
DE PROTENAS

MTODO DE KJELDAHL
MTODO DE BIURET
MTODO DE LOWRY
MTODO DEL CIDO BICINCONNICO (BCA)
MTODO DE ABSORCIN UV A 280nm
MTODO DE ADHESIN DE COLORANTE
MTODO DE BRADFORD
MTODO DE LA NINHIDRINA
MTODO TURBIDIMTRICO

MTODO DE KJELDAHL
(JOHANN KJELDAHL, 1883)

DIGESTIN CON H2SO4 CON LA ADICIN DE

PERMANGANATO DE POTASIO PARA COMPLETAR
LA OXIDACIN Y CONVERSIN DEL NITRGENO A
SULFATO DE AMONIO.

NEUTRANLIZACIN DE LA DIGESTA DILUIDA,

SEGUIDA DE UNA DESTILACIN EN UN VOLUMEN
CONOCIDO DE CIDO ESTNDAR CON UN
CONTENIDO DE IODURO DE POTASIO E YODATO.

TITULACIN DEL YODO LIBERADO CON

TIOSULFATO DE SODIO ESTNDAR

MODIFICACIONES PARA EL
MEJORAMIENTO DEL MTODO
DE KJELDAHL

SE HAN AADIDO CATALIZADORES

COMO: Hg, Cu, Se, Ti AL H2SO4 PARA
LOGRAR UNA DIGESTIN COMPLETA.
EL DIXIDO DE SELENIO Y EL
SULFATO DE COBRE EN PROPORCIN
3:1 SON MUY EFECTIVOS EN LA
DIGESTIN.

MODIFICACIONES PARA EL
MEJORAMIENTO DEL MTODO
DE KJELDAHL

EL SULFATO DE POTASIO SE UTILIZA PARA

AUMENTAR EL PUNTO DE EBULLICIN DEL
CIDO SULFRICO PARA ACELERAR LA
DIGESTIN.

EL SULFURO O TIOSULFATO DE SODIO SE

AADEN A LA DIGESTA DILUIDA PARA
AYUDAR A LIBERAR EL NITRGENO DEL Hg
EL CUAL TIENDE A ADHERIR AMONIO.

MODIFICACIONES PARA EL
MEJORAMIENTO DEL MTODO
DE KJELDAHL

EL AMONIACO SE DESTILA DIRECTAMENTE

EN UNA SOLUCIN DE CIDO BRICO Y ES
SEGUIDO DE UNA TITULACIN CON UN
CIDO ESTNDAR.

SE UTILIZAN LA COLORIMETRA Y LA
CROMATOGRAFA INICA PARA
DETERMINAR EL CONTENIDO DE
NITRGENO POSTERIOR A LA DIGESTIN.

PROCEDIMIENTO GENERAL
Y REACCIONES

DIGESTIN
EL SULFATO DE AMONIO NO VOLTIL SE FORMA DE LA
REACCIN DEL NITRGENO Y EL CIDO SULFRICO.
DURANTE LA DIGESTIN SE LIBERA EL NITRGENO
PROTICO PARA FORMAR IONES DE AMONIO.
EL CIDO SULFRICO OXIDA LA MATERIA ORGNICA
Y SE COMBINA CON EL AMONIO FORMADO.

DIGESTIN

LOS ELEMENTOS CARBONO E

HIDRGENO SE CONVIERTEN EN
DIXIDO DE CARBONO Y AGUA
PROTENA

cido
(NH4)2 SO4
Sulfrico
Calor,
catalizador

NEUTRALIZACIN Y
DESTILACIN

LA MUESTRA DIGERIDA SE DILUYE CON

AGUA.

SE AADE EL LCALI QUE CONTIENE

TIOSULFATO DE SODIO PARA NEUTRALIZAR
AL CIDO SULFRICO.

EL AMONACO FORMADO SE DESTILA EN UNA

SOLUCIN DE CIDO BRICO QUE CONTIENE
LOS INDICADORES AZL DE METILENO Y
ROJO DE METILO.

REACCIONES DE LA
NEUTRALIZACIN Y LA
DESTILACIN
(NH)2SO4+ 2NaOH 2NH3+Na2SO4+2H2O

NH3+ H3BO3

(cido brico)

NH4 + H2BO3(in borato)

REACCIONES DE LA
TITULACIN

EL ANIN BORATO (PROPORCIONAL A

LA CANTIDAD DE NITRGENO) SE
TITULA CON HCl ESTANDARIZADO:
H2BO3- + H+ H3BO3

CLCULOS

MOLES DE HCl = MOLES DE NH3 =

MOLES DE NITRGENO EN LA
MUESTRA

FUNCIN DEL BLANCO EN LA

DETERMINACIN DE
PROTENAS

SE DEBE UTILIZAR UN BLANCO CON

REACTIVOS PARA SUSTRAER EL
NITRGENO REACTIVO DEL
NITRGENO DE LA MUESTRA.

N HCl = NORMALIDAD DEL HCl EN MOLES /1000 mL

VOL. CIDO CORREGIDO = mL DE CIDO ESTNDAR
PARA LA MUESTRA) (mL DE CIDO ESTNDAR PARA
EL BLANCO)
14

= PESO ATMICO DEL NITRGENO

%N = N HCl X VOLUMEN DE
CIDCORR.
g. DE MUESTRA
X 14g N2 X 100
MOL

FACTOR

SE UTILIZA UN FACTOR DE CONVERSIN DE % DE

N2 A % DE PROTENA CRUDA.
LA MAYORA DE LAS PROTENAS CONTIENEN 16%
DE N2
EL FACTOR DE CONVERSIN ES:
6.25 (100/16 = 6.25)
%N2 X 6.25 = %PROTENA
%N2 = %PROTENA
0.16

FACTORES DE CONVERSIN
PARA ALGUNOS ALIMENTOS
ALIMENTO
HUEVO O
CARNE, MAZ
LECHE
TRIGO
SOYA
AVENA

%N2PROTENA
16
15.7
18
17.51
17.15

FACTOR
6.25
6.38
5.7
5.71
5.83

PROCEDIMIENTOS
ALTERNATIVOS DE
DESTILACIN Y TITULACIN
NESSLERIZACIN
NH4OH + 2HGI2+ 2KI + 3KOH NH4Hg2I +

7KI + 4H2O ( rojo-naranja, 440nm)

RPIDO Y FCIL PERO EL IODURO
DIMERCRICO DE AMONIO ES COLOIDE Y
EL COLOR ES INESTABLE

PROCEDIMIENTOS
ALTERNATIVOS DE
DESTILACIN Y TITULACIN

MEDICIN DEL pH POSTERIOR A LA

DESTILACIN EN UN VOLUMEN
CONOCIDO DE CIDO BRICO

MEDICIN DIRECTA DEL AMONACO,

MEDIANTE EL MTODO DE
CROMATOGRAFA INICA

VENTAJAS DEL MTODO DE

KJELDAHL

APLICABLE A TODO TIPO DE

ALIMENTOS
RELATIVAMENTE SIMPLE
BARATO
PRECISO
ES EL MTODO OFICIAL PARA MEDIR
EL CONTENIDO DE PROTENA CRUDA

DESVENTAJAS DEL MTODO

DE KJELDAHL

MIDE EL NITRGENO ORGNICO TOTAL,

NO SLO EL NITRGENO PROTICO
CONSUME MUCHO TIEMPO (AL MENOS 2
HORAS PARA COMPLETARSE)
PRECISIN MS POBRE QUE EL MTODO
DE BIURET
USA REACTIVOS CORROSIVOS

DETERMINACIN DE
PROTENAS
POR EL MTODO DE BIURET

FUNDAMENTO
AL FORMAR COMPLEJOS LOS IONES CPRICOS CON LOS
ENLACES PEPTDICOS DE LAS PROTENAS SE PRODUCE UN
COLOR VIOLETA-MORADO BAJO CONDICIONES ALCALINAS.
LA ABSORBANCIA DEL COLOR PRODUCIDO ES LEDO A
540nm.

LA INTENSIDAD DEL COLOR (ABSORBANCIA) ES

PROPORCIONAL AL CONTENIDO PROTICO DE LA MUESTRA.

PROCEDIMIENTO PARA EL
MTODO DE BIURET

5 mL DE REACTIVO DE BIURET SE MEZCLA

CON 1mL DE SOLUCIN PROTICA (1-10
mg DE PROTENA/mL).
EL REACTIVO INCLUYE SULFATO DE
COBRE, NaOH, Y TARTRATO DE SODIO Y
POTASIO EL CUAL SE UTILIZA PARA
ESTABILIZAR EL IN COBRE EN LA
SOLUCIN ALCALINA

PROCEDIMIENTO PARA EL
MTODO DE BIURET

DESPUS DE REPOSO A TEMPERATURA

AMBIENTE DURANTE 15 A 30 MINUTOS, SE
LEE LA ABSORBANCIA A 540nm CONTRA
UN BLANCO CON SLO REACTIVO.

SI LA REACCIN NO ES CLARA DEBE

CENTRIFUGARSE LA MUESTRA PREVIO A LA
LECTURA DE LA ABSORBANCIA

PROCEDIMIENTO PARA EL
MTODO DE BIURET

SE DEBE ELABORAR UNA CURVA

ESTNDAR DE CONCENTRACIN VS
ABSORBANCIA UTILIZANDO
ALBMINA DE SUERO DE BOVINO
(BSA) PARA COMPARACIN CON LA
MUESTRA BAJO ESTUDIO

VENTAJAS DEL MTODO DE

BIURET

MENOS CARO QUE EL MTODO DE KJELDAHL

RPIDO (SE PUEDE COMPLETAR EN MENOS DE 30
MINUTOS)
ES EL MTODO MS SIMPLE DE ANLISIS DE
PROTENAS
NO ES FRECUENTE ENCONTRAR DERIVACIONES DE
COLOR
POCAS SUBSTANCIAS NO PROTICAS INTERFIEREN
CON LA REACCIN DE BIURET
NO DETECTA N2 DE FUENTES NO PROTICAS O NO
PEPTDICAS

DESVENTAJAS DEL MTODO DE

BIURET

NO ES MUY SENSIBLE COMPARADO CON EL

MTODO DE LOWRY
REQUIERE DE AL MENOS 2 A 4 mg DE PROTENA
POR PRUEBA
LAS CONCENTRACIONES ALTAS DE SALES DE
AMONIO INTERFIEREN CON LA REACCIN
PUEDE OCURRIR OPALESCENCIA EN LA SOLUCIN
FINAL SI ESTN PRESENTES ALTAS
CONCENTRACIONES DE LPIDOS O CARBOHIDRATOS
DEBE ESTANDARIZARSE EL COLOR MEDIANTE
CANTIDADES DE PROTENA CONOCIDAS

MTODO DE LOWRY

FUNDAMENTO
COMBINA LA REACCIN DE BIURET CON LA
REDUCCIN DEL REACTIVO DE FENOL FOLINCIOCALTEAU (CIDO FOSFOMOLBDICOFOSFOTNGSTICO) POR LOS RESIDUOS DE
TIROSINA Y TRIPTOFANO DE LAS PROTENAS.
EL COLOR AZULOSO DESARROLLADO ES
LEDO A 750nm (ALTA SENSIBILIDAD PARA
UNA CONCENTRACIN PROTICA BAJA) O A
500nm (ALTA SENSIBILIDAD PARA UNA
CONCENTRACIN PROTICA ALTA)

VENTAJAS DEL MTODO DE

LOWRY

MUY SENSIBLE
MENOS AFECTADO POR LA TURBIDEZ DE
LA MUESTRA
MS ESPECFICO QUE LA MAYORA DE
LOS OTROS MTODOS
RELATIVAMENTE SIMPLE
SE PUEDE COMPLETAR EN 1 A 1.5
HORAS

DESVENTAJAS DEL MTODO DE

LOWRY

EL COLOR VARA CON DIFERENTES PROTENAS (MS QUE EL

MTODO DE BIURET)

EL COLOR NO ES ESTRICTAMENTE PROPORCIONAL A LA

CONCENTRACIN DE PROTENAS

LA SACAROSA, LPIDOS, BUFFERS FOSFATO,

MONOSACRIDOS Y HEXOAMINAS INTERFIEREN CON LA
REACCIN

LAS ALTAS CONCENTRACIONES DE AZCARES

REDUCTORES, SULFATO DE AMONIO Y COMPUESTOS CON
SULFHIDRILO INTERFIEREN CON LA REACCIN

MTODO DEL CIDO

BICINCONNICO (BCA)

FUNDAMENTO
SE BASA EN EL PRINCIPIO DE QUE LAS
PROTENAS REDUCEN LOS IONES CPRICOS
A IONES CUPROSOS BAJO CONDICIONES
ALCALINAS. LOS IONES CUPROSOS
REACCIONAN CON EL BCA (VERDOSO) PARA
FORMAR UN COLOR MORADO. EL COLOR
FORMADO ES PROPORCIONAL AL
CONTENIDO PROTICO DE LA MUESTRA

VENTAJAS DEL MTODO DEL

CIDO BICINCONNICO (BCA)

SENSIBILIDAD COMPARABLE A LA DEL MTODO DE LOWRY

(0.5mg a 10mg)

LA MEZCLA EN UN PASO ES MS FCIL QUE EN EL MTODO

DE LOWRY

EL REACTIVO ES MS ESTABLE QUE EL REACTIVO DE LOWRY

LAS SALES DE BUFFER Y DETERGENTE NO INICO NO

INTERFIEREN CON LA REACCIN

LAS CONCENTRACIONES DEL MEDIO DE REACTIVOS

DESNATURALIZANTES NO INTERFIEREN (GUANIDINA 4M-HCl
O UREA 3M)

DESVENTAJAS DEL MTODO

DEL
CIDO BICINCONNICO (BCA)

EL COLOR NO ES ESTABLE CON EL TIEMPO. SE

NECESITA CONTROLAR CUIDADOSAMENTE EL
TIEMPO ENTRE EL ANLISIS Y LA LECTURA EN
ABSORBANCIA.

LOS AZCARES REDUCTORES INTERFIEREN CON

LA REACCIN.

ALTAS CONCENTRACIONES DE SULFATO DE

AMONIO INTERFIEREN CON LA REACCIN.

LA RESPUESTA EN LA ABSORBANCIA NO ES LINEAL

MTODO DE ABSORCIN EN
ULTRAVIOLETA A 280nm

FUNDAMENTO
LAS PROTENAS MUESTRAN UN FUERTE GRADO DE
ABSORCIN A 280nm EN UV, PRINCIPALMENTE
DEBIDO PRINCIPALMENTE A LOS RESIDUOS DE
TRIPTOFANO Y LA TIROSINA DE LAS PROTENAS. YA
QUE LAS CONCENTRACIONES DE ESTOS
AMINOCIDOS EN LAS PROTENAS ES
FRANCAMENTE CONSTANTE SE PUEDE UTILIZAR LA
ABSORBANCIA A 280nm PARA ESTIMAR LA
CONCENTRACIN DE PROTENAS USANDO LA LEY
DE BEER

MTODO DE ABSORCIN EN
ULTRAVIOLETA A 280nm

FUNDAMENTO

DADO QUE CADA PROTENA TIENE UNA

COMPOASICIN NICA DE AMINOCIDOS
AROMTICOS, EL COEFICIENTE DE
EXTINCIN (E280) O SU ABSORTIVIDAD
MOLAR (Em) DEBEN SER DETERMINADOS
PARA PROTENAS INDIVIDUALES PARA LA
ESTIMACIN DEL CONTENIDO PROTICO

VENTAJAS DEL MTODO DE

ABSORCIN EN UV (280nm)

MTODO RPIDO Y RELATIVAMENTE

SENSIBLE (VARIAS VECES MS SENSIBLE
QUE EL MTODO DE BIURET)
NO EXISTE INTERFERENCIA DEL SULFATO
DE AMONIO Y OTRAS SALES BUFFER
MTODO NO DESTRUCTIVO
UTILIZADO EN DETECCIN POST-COLUMNA
DE LAS PROTENAS

DESVENTAJAS DEL MTODO DE

ABSORCIN EN EL UV (280nm)

LOS CIDOS NUCLICOS TAMBIN

ABSORBEN EN LA REGIN DE 280nm
EL CONTENIDO DE AMINOCIDOS
AROMTICOS DIFIERE
CONSIDERABLEMENTE EN VARIAS
PROTENAS.
LA SOLUCIN DEBE SER CLARA E
INCOLORA. LA TURBIDEZ PUEDE PRODUCIR
RESULTADOS ERRTICOS
SE REQUIERE UN SISTEMA RELATIVAMENTE
PURO PARA UTILIZAR ESTE MTODO

MTODOS DE DETERMINACIN
DE PROTENAS POR ADHESIN
DE UN COLORANTE

ADHESIN DE COLORANTE ANINICO

MTODO DE BRADFORD

ADHESIN DE COLORANTE
ANINICO

FUNDAMENTO
LA MUESTRA PROTICA SE MEZCLA CON
UNA CANTIDAD EXCESIVA CONOCIDA DE
UN COLORANTE ANINICO EN UNA
SOLUCIN BUFFER.
LAS PROTENAS SE UNEN AL COLORANTE
PARA FORMAR UN COMPLEJO INSOLUBLE.

ADHESIN DE COLORANTE
ANINICO

FUNDAMENTO
SE MIDE EL COLORANTE NO ADHERIDO,
SOLUBLE POSTERIOR A LA EQUILIBRACIN
DE LA REACCIN Y LA REMOCIN DEL
COMPLEJO INSOLUBLE POR
CENTRIFUGACIN Y FILTRACIN.
EL COLORANTE NO ADHERIDO EST
INVERSAMENTE RELACIONADO AL
CONTENIDO PROTICO DE LA MUESTRA

ADHESIN DE COLORANTE
ANINICO

FUNDAMENTO

PROTENA + EXCESO DE COLORANTE

COMPLEJO PROTENA-COLORANTE
INSOLUBLE + COLORANTE NO
ADHERIDO SOLUBLE

COLORANTES UTILIZADOS EN
ESTE MTODO

CIDO SULFNICO ANINICO

NARANJA CIDO 12
NARANJA G
NEGRO AMIDO 10B
UNEN GRUPOS CATINICOS DE LOS
RESIDUOS BSICOS DE AMINOCIDOS
(IMIDASOL DE LA HISTIDINA, GUANIDINA DE
LA ARGININA Y EL GRUPO -AMINO DE LA
LISINA) Y EL GRUPO LIBRE TERMINAL AMINO
DE LAS PROTENAS.

VENTAJAS DEL MTODO DE

ADHESIN DE COLORANTE
ANINICO

MTODO RPIDO (15 MINUTOS O MENOS)

BARATO
RELATIVAMENTE EXACTO PARA EL
ANLISIS DE PROTENAS EN ALIMENTOS
PUEDE UTILIZARSE PARA ESTIMAR LOS
CAMBIOS EN EL CONTENIDO DE LISINA
DISPONIBLE DE LOS CEREALES DURANTE
SU PROCESAMIENTO.

VENTAJAS DEL MTODO DE

ADHESIN DE COLORANTE
ANINICO

NO UTILIZA REACTIVOS CORROSIVOS

NO MIDE NITRGENO NO PROTICO
MS PRECISO QUE EL MTODO
KJELDAHL

DESVENTAJAS DEL MTODO DE

LA ADHESIN DEL COLORANTE
ANINICO

LAS PROTENAS DIFIEREN EN SU CONTENIDO DE

AMINOCIDOS BSICOS DIFIEREN EN SU
CAPACIDAD DE ADHESIN DEL COLORANTE

SE NECESITA ELABORAR CURVA DE CALIBRACIN

MUCHOS COMPONENTES NO PROTICOS TAMBIN

SE PUEDEN ADHERIR AL COLORANTE (ALMIDN),
METALES (Ca O P) Y CAUSAR ERRORES EN LOS
RESULTADOS

MTODO DE BRADFORD

FUNDAMENTO
EL AZL BRILLANTE G-250 COOMASSIE SE
ADHIERE A LA PROTENA, EL COLORANTE
SE TORNA DE ROJIZO A AZULADO YE L
MXIMO DE ABSORCIN DEL COLORANTE
CAMBIA DE 465 A 595nm. EL CAMBIO EN
LA ABSORBANCIA A 595nm ES
PROPORCIONAL A LA CONCENTRACIN DE
PROTENA EN LA MUESTRA.

VENTAJAS DEL MTODO DE

BRADFORD

MTODO RPIDO (LA REACCIN SE PUEDE

COMPLETAR EN 2 MINUTOS)

REPRODUCIBLE

SENSIBLE (MUCHO MS QUE EL MTODO

DE LOWRY)

NO EXISTE INTERFERENCIA DE CATIONES

COMO K+, Na+, Y Mg+

VENTAJAS DEL MTODO DE

BRADFORD

NO EXISTE INTERFERENCIA DEL SULFATO

DE AMONIO

NO EXISTE INTERFERENCIA DE LOS

POLIFENOLES NI CARBOHIDRATOS COMO
LA SACAROSA

MIDE PROTENA O PPTIDOS CON UNA

MASA MOLECULAR APROXIMADAMENTE
IGUAL O MAYOR DE 4 000 DALTONS

DESVENTAJAS DEL MTODO DE

BRADFORD

EL COMPLEJO PROTENA-COLORANTE FORMADO

PUEDE UNIRSE A LAS CELDAS DE CUARZO

EL COLOR VARA CON DIFERENTES TIPOS DE

PROTENAS.

LA PROTENA ESTNDAR DEBE SELECCIONARSE

CON MUCHO CUIDADO

INTERFERENCIA CON DETERGENTES.

MTODO DE LA NINHIDRINA

FUNDAMENTO
AL SER HERVIDOS EN UN BUFFER A
UN pH DE 5.5 EN PRESENCIA DE
NINHIDRINA E HIDRINDANTINA, LOS
AMINOCIDOS, AMONACO, Y LOS
GRUPOS AMINO PRIMARIOS, ORIGINAN
UN COLOR MORADO RUHEMANN

VENTAJA DEL MTODO DE LA

NINHIDRINA

MTODO RELATIVAMENTE RPIDO SI

SE COMPARA CON EL MTODO DE
KJELDAHL

DESVENTAJAS DEL MTODO DE

LA NINHIDRINA

LA PRESENCIA DE PEQUEAS CANTIDADES DE

AMINOCIDOS, PPTIDOS, AMINAS PRIMARIAS, Y
AMONACO OCASIONA UNA SOBREESTIMACIN
DEL CONTENIDO PROTICO

BAJA PRECISIN

EL COLOR VARA CON LA DIFERENTE

COMPOSICIN DE AMINOCIDOS

SE NECESITA ELABORAR UNA CURVA ESTNDAR

EN CADA ANLISIS