BIO10-329 Biofsica de Protenas

Regente: Clia R. Carlini

Enzimas: como atuam ?

catalisadores
classificao
especificidade e mecanismos de ao
regulao enzimtica
inibidores e aplicaes

Ateno ! Use o modo apresentao de slides para ativar as animaes

Um pouco de Histria sobre enzimas:

1700:
Estudos da digesto de carnes por secrees do estmago .

1833:
Payen e Persoz: descobriram a converso do amido em acar pela saliva.

1850:
Louis Pasteur concluiu que leveduras catalisam a converso de
acares em lcool.

1878:
Friedrich Wilhelm Khne cunha o nome "enzima",
"en" = dentro e "zyme" = levedura.

1897:
Buchner descobriu que extratos de levadura podiam converter o acar em
lcool, e que fermentos eram molculas.

1926:
J.B.Sumner cristaliza a primeira protena, urease, e demonstra que a
atividade enzimtica uma caracterstica de molculas definidas.

Enzimas so protenas que agem como catalizadores biolgicos:

enzima

Composto B (produto)
Reao
catalisada
pela enzima

Composto A (substrato)
Centro ativo
ou
stio cataltico
de uma enzima a poro
da molcula onde ocorre a
atividade cataltica

Observe que no h consumo

ou modificao permanente da
enzima

Teoria da catlise
Considere as reaes:

A + B

v1

v-1

No equilbrio da reao, as velocidades das reaes se igualam:

v1 = v-1

- concentraes de todos os reagentes no se alteram mais

- pode se dizer que a reao terminou
Catalisador acelera as velocidades de ambos os lados da reao
- o ponto do equilbrio atingido mais rpido
- o ponto do equilbrio no se altera, ou seja [reagentes]
e de [produtos] no final da reao so as mesmas da
reao no catalisada
- termodinmica da reao no se altera
Catalisador no consumido na reao

pode atuar em [ ] baixas

Teoria da catlise

O grfico mostra a variao de energia ao

longo de uma reao.
Energia de ativao ou barreira
energtica:

Energia

Estado de transio

Energia
de
ativao

Substrato (S)

Reao no
catalisada

quantidade de energia
que preciso fornercer aos
reagentes para a reao ocorrer
Estado de transio ou
complexo ativado:

Reao
catalisada
Produto (P)

Progresso da reao

forma molecular intermediria entre o reagente e

o produto, existe somente
no alto da barreira
energtica.
altamente instvel.

Um Catalisador diminui a barreira energtica criando percursos alternativos

da reao para formao do estado de transio.

Enzimas so catalisadores biolgicos:

Equao geral
de uma reao
enzimtica

E + S

ES

P + E

representa o
estado de
transio

Que diferenas existem entre catalisadores inorgnicos, como ons

metlicos, e as enzimas ?
enzimas so mais eficientes: podem acelerar reaes at 1014 vezes contra
102 103 vezes dos catalisadores inorgnicos;
enzimas so especficas: catalisam reaes envolvendo s vezes apenas um
nico tipo de reagente;
enzimas so estereo-especficas e no produzem sub-produtos reacionais;
enzimas operam em condies amenas de temperatura, presso e pH;
enzimas podem ser altamente reguladas atravs de fatores extrnsecos reao,
tanto por ativadores como por inibidores.

Enzimas acelaram reaes vrias ordens de grandeza

Compare esses nmeros !

Enzima
Anidrase carbnica
H 2 O2

Velocidade na
ausncia de enzima

Velocidade da
reao catalisada

Reaes/segundo

Reaes/segundo

1.3 X 10 1

1.0 X 106

7.7 X 106

4.3 X 10 6
3.0 X 10 9
1.0 X 10 11
1.7 X 10 -13

4.300
578
60
95

1.0 X 109
1.9X 1011
6.0 X 1012
5.6 X 1014

Poder
cataltico

H 2O + O2

Triosefosfato isomerase
Carboxipeptidase A
AMP nucleosidase
Nuclease de estafilococos

Nmero de turnover ou de renovao: quantas vezes a enzima completa

o ciclo da reao em um segundo
Nmero moles de S catalisado por segundo
=
de
moles de enzima
turnover

Por que a catlise por enzimas mais eficiente ?

1)

Aumento da concentrao dos reagentes na superfcie da enzima: atrao dos reagentes

para interao com a enzima).

2)

Orientao correta dos reagentes (substratos): parte da energia de ativao representa o

posicionamento adequado dos reagentes para que haja contacto entre os tomos corretos. O sitio
ativo da enzima favorece o posicionamento correto dos reagentes.

3)

Aumento da reatividade dos reagentes: as cadeias laterais (R) dos aminocidos da enzima ou
co-fatores e coenzimas podem interagir diretamente com os substratos, dando-lhes carga eltrica
ou polarizando-os, tornando-os quimicamente mais reativos, ou ainda cedendo ou transferindo
certas funes qumicas.

4)

Induo de deformao fsica no substrato, por contacto com as cadeias laterais (R) dos
aminocidos das enzimas, que desestabilizam a molcula do substrato e facilitam o rompimento de
laos covalentes

lento
A hidrlise
no enzimtica
de uma ligaolento
rpido
peptdica lenta
e requer
condies
drsticas de pH e
gua,
temperatura um dos substratos
Sem catlise

Catlise cida

rpido

Catlise bsica

Muito
rpido

Catlise
cido-bsica

Cadeias
laterais de
aminocidos
no stio ativo
de uma
enzima
hidroltica

Algumas protenas, enzimas em especial, contm em sua molcula uma poro

no proteica, que essencial para atividade biolgica.
metal
Grupo
prosttico

cofator
coenzima

Enzima
holozima

Distino entre cofator e coenzima

depende da fora de ligao com a
apoprotena. Ex: o NAD+ pode ser
cofator de uma enzima (ligao
fraca) e ser coenzima de outra
(ligao forte). O mesmo ocorre
com as metais.

Apoenzima
parte proteica

ativa
Grupo
Prosttico

inativa

Coenzimas participam do ciclo

cataltico das enzimas
recebendo ou fornecendo
grupos qumicos para a reao

Coenzima

Reao com

Vitamina

Biocitina

CO2

Biotina

Coenzima A

Grupos acil

c. Pantotnico

Coenzima B12

H e grupos alquil

Vitamina B12

FAD, FMN

xido-reduo

Riboflavina

NAD, NADP

xido-reduo

Niacina

Fosfato de piridoxal

Grupos aminos

Piridoxina

Pirofosfato Tiamina

Grupos aldedos

Tiamina

Tetrahidrofolato

unidades C

cido flico

Algumas enzimas formam intermedirios covalentes com seus substratos

Enzimas

Grupo reativo
no stio ativo

Intermedirio
covalente

Quimotripsina
Elastase
Esterases
Trombina
Tripsina
Papana
Gliceraldedo-3-PO4
desidrogenase
Fosfatase alcalina
Fosfoglicomutase
Fosfoglicerato mutase
Succinil-CoA sintase
Aldolase
Descarboxilases
Enzimas dependentes
de piridoxal fosfato

Enzimas com o mesmo

tipo de mecanismo
cataltico, ou seja,
possuem o mesmo grupo
de aminocidos no stio
ativo, formam
intermedirios covalentes
similares

Classificao das Enzimas:

considera tipo de
reao e substratos
Nomenclatura oficial das enzimas
dada pela Enzyme Comission da
International Union for Biochemistry
and Molecular Biology (IUBMB) :
ATPase (Adenosinatrifosfatase): EC
3.6.1.3
- uma hidrolase.........................3
- atua num anidrido......................3.6
- o anidrido contm fosfato..........3.6.1
- esse anidrido ATP..................3.6.1.3

Nmeros identificam o tipo

de reao e o tipo de
substrato alvo

1. xido-redutases
( Reaes de xidoreduo).

Transferncia de eltrons
Se uma molcula se
reduz, h outra que se
oxida.

2. Transferases
(Transferncia de grupos
funcionais)

grupos aldedo
gupos acila
grupos glucosil
grupos fosfatos (quinases)

3. Hidrolases
(Reaes de hidrlise)

Transformam polmeros em monmeros.

Atuam sobre:
Ligaes ster
Ligaes glicosdicas
Ligaes peptdicas
Ligaes C-N

4. Liases
(Adio a ligaes duplas)

Entre C e C
Entre C e O

Entre C e N

5. Isomerases
(Reaes de isomerizao)

6. Ligases
(Formao de laos
covalentes com gasto de
ATP)

Entre C e O
Entre C e S
Entre C e N
Entre C e C

Enzimas so especficas para o reconhecimento de seus substratos.

Modelo Chave-Fechadura

Formas rgidas

Modelo Chave-Fechadura
E e S se deformam, para
otimizar o encaixe

Emil Fisher, na dcada de 1950, props

o modelo chave-fechadura para explicar o reconhecimento (especificidade) do
substrato pela enzima. Nesse modelo, o
stio ativo da enzima pre-formado e
tem a forma complementar molcula
do Substrato, de modo que outras
molculas no teriam acesso a ela.
No entanto, o modelo chave-fechadura
no explica a interao das enzimas com
inibidores e anlogos dos substratos.
Na dcada de 1970, Daniel Kosland
props o modelo de encaixe induzido,
no qual o contacto com a molcula do
substrato induz mudanas conformacionais na enzima, que otimizam as interaes com os resduos do stio ativo.
Esse o modelo aceito hoje em dia.

Carboxipeptidase A uma enzima digestiva da classe das metaloproteinases.

Em A: o stio cataltico dessa enzima formado pelos resduos (em vermelho) de Tyr248
(acima, direita) e de Glu270 (centro), e um tomo de Zn2+, que est acima do Glu270.

Em B: A ligao do substrato dipeptdico glicil-L-tirosina (em verde) causa uma profunda

mudana conformacional nas vizinhanas do stio ativo da carboxipeptidase A. Clique com
o mouse para observar a re-orientao da posio da Tyr248 em relao outra figura.

Mecanismo de ao da quimotripsina,
quimotripsina
um exemplo tpico de uma serino proteinase
Enzima interage
com substratos
aromtcos

Ligao a ser hidrolisada

Trade cataltica
Ser His - Asp

A Ser-195 transfere H+
para His-57 formando um
estado de transio
tetradrico com o
substrato. O Asp-102
estabiliza o prton na His57 fazendo uma ligao
inica

O H+ transferido da His57 para o substrato. A

ligao susceptvel
clivada, e parte do
substrato fica ligado
covalentemente enzima

A H2O entra no stio

ativo e forma uma
ponte de H+ com a
His-57

A H2O transfere H+
para a His-57 e OH
para o substrato,
formando um segundo
estado de transio
tetradrico

O H+ transferido da His-57
de volta para a Ser-195. A
outra poro do substrato
liberada da enzima, que
retorna ao estado inicial

Fatores que afetam a atividade enzimtica:

1.

Condies do meio que afetam estabilidade protica

pH

temperatura

2. Tempo da reao
3. Concentrao dos reagentes

a enzima

o substrato

co-fatore(s)

Vrios so os fatores que afetam o funcionamento das enzimas como catalisadores.

Alguns desses fatores so decorrentes da natureza proteica das enzimas, como o
efeito do pH e da temperatura. Para se estudar o efeito isolado de um dos fatores
acima, necessrio que todos os outros fatores sejam mantidos fixos.

Fatores que controlam a atividade enzimtica:

1. Fatores que afetam a estabilidade proteica das enzimas
Variaes de pH: pH timo

% atividade enzimtica mxima

O pH timo de uma enzima

reflete variaes no estado de
ionizao de resduos de
aminocidos do stio ativo. A
enzima est pelo menos
parcialmente desnaturada em
pHs afastados do pH timo.
Quando o substrato uma
molcula ionizvel, o pH timo
da enzima tambm reflete o seu
estado de ionizao .
pH timo=1,5

pH timo=6,8

pH timo=9,9

Fatores que controlam a atividade enzimtica:

% atividade enzimtica mxima

1. Fatores que afetam a estabilidade proteica das enzimas

Variaes de pH: pH timo
Variaes de temperatura: temperatura tima
100Temperatura
tima

50-

0-

Pouca energia
para a reao
acontecer

Desnaturao
trmica da
protena

Ao contrrio da curva em
forma de sino no caso da
atividade enzimtica versus
pH, a enzima s est
desnaturada em
temperaturas acima da
temperatura tima.

Fatores que controlam a atividade enzimtica:

3. Concentrao:
da enzima
do substrato
de co-fatore(s)
A [substrato] cai na mesma razo em que a
[produto] aumenta em funo do tempo.
A enzima existe sob duas formas: enzima
livre E e complexo enzima-substrato ES. No
incio da reao, a [E] livre cai e a do
complexo [ES] aumenta e atinge um mximo,
em que no h mais [E] livre no meio. Nessa
situao (indicada no retngulo cinza), diz-se
que a enzima est saturada (s existe no
complexo ES). A velocidade da reao a
mxima.

O grfico abaixo ilustra como as

concentraes de E, S e P variam ao
longo do tempo da reao.

concentrao

2. Tempo da reao

tempo

Na dcada de 1950:
Michaelis e Menten formularam as bases da cintica enzimtica, para explicar como a
concentrao do substrato [S] afeta a velocidade da reao v, conforme se observa
no grfico abaixo.
A velocidade da reao apresenta trs regies de comportamento diferente, a medida
que se aumenta a concentrao do substrato:
-parte a: v aumenta proporcionalmente
com aumentos de S.
-parte b: v aumenta no proporcionalmente com aumentos de S.
-parte c: v no aumenta mais, tendendo
a um valor mximo (Vmax),
sendo independente da [S]
O grfico mostra um conjunto de reaes
que esto acontecendo simultneamente,
conforme as equaes abaixo:

Para se chegar equao da hiprbole quadrada do grfico V x S, o grfico de

Michaelis Menten, considera-se que o conjunto
de reaes est em equilbrio, ou seja, a [ES]
constante e o sistema tem a sua velocidade
mxima, Vmax.

Quando [ES] constante, as velocidades de

formao (Vf) e de desdobramento (Vd) do
complexo ES so iguais:
Vf formao ES = Vd desdobramento ES
Aplicando a Lei de Ao das Massas para definir Vf e Vd, temos:

Vf = k1 [ES]
[E]+[S]
Vd= k-1 [E]+[S] + k2 [E]+[P]
[ES]
[ES]

Igualando-se Vf = Vd e resolvendo para V, chega-se

Equao de Michaelis-Menten:

sendo KM = k-1+ k2
k1
Constante de Michaelis-Menten

A constante de Michaelis-Menten (KM) um parmetro cintico que traz

informaes sobre a afinidade que a enzima tem pelo substrato.
O KM numricamente igual [substrato] que
produz metade da Vmax .
Substituindo na equao v por Vmax/2, vemos:

Vo=Vmax
Vmax = Vmax.[S]
2
2
Km + [S]
Vmax.Km + Vmax.[S] = 2Vmax.[S]
KM = k-1+ k2

Vmax.Km = Vmax.[S]

k1

Km = [S]

Considerando a afinidade da E pelo seu S, temos 2 casos:

1.

E tem baixa afinidade por S

Quando Vd mais alta do que Vf
k-1+ k2 = grande
k1 = pequeno

Km alto

2.

E tem alta afinidade por S

Quando Vf mais alta do que Vd
k-1+ k2 = pequeno
k1 = grande

Km baixo

Uma outra forma de se obter os valores de KM e de Vmax atravs do grfico dos

duplos recprocos (1/V x 1/S), e da equao de Lineweaver-Burk.
Aplicando-se o
inverso a ambos
os lados da
equao de
Michaelis-Mentem,
obtem-se a
equao de
Lineweaver-Burk,
que uma funo
linear (uma reta):

Tang

=KM/Vmax

O intercepto da reta no eixo x igual a -1/KM

substituindo y = 0 na equao, temos:
0 = Km . 1 + 1
Vmax [S] Vmax
-1 = Km
[S]

-1 =
Km

-1 = Km . 1
Vmax Vmax [S]
1
[S]

y = a . x + b

equao
de reta

Onde:
a = coef. angular = Km/Vmax
(tangente ngulo alfa)
b = coef. linear = 1/Vmax
(intercepto no eixo y)

A velocidade da reao
somente proporcional
[E]
quando a enzima est
saturada, ou seja, reao
de ordem zero (independe)
em relao a [S]

Eficincia cataltica
Kcat/Km
- k2 ou kcat (constante cataltica) mede o poder
cataltico da enzima

v = k2 Etotal + [P]
[ES]

k2 = Vmax (s-1)
[Etotal]

Parmetro mais adequado

para comparaes
cinticas

Para calcular kcat considera-se que toda a E existe como ES, e que v=Vmax

Interaes secundrias de proteinases com seus substratos

Enzima

Tripsina (pH 7.5)

Substratos

Z-Lys-OMe
Z-(Ala)2-Tyr-Lys-OMe

kcat

KM

(seg-1)

(mM)

Razo
kcat/ KM

101
106

0.23
0.08

1
3

Quimotripsina (pH 7.9)

Z-Tyr-Gly-OMe
Z-(Ala)2-Ala-OMe

0.6
10

23
2

1
190

Elastase (pH 8.0)

Z-Ala-OMe
Z-(Ala)2-Ala-OMe

6.7
73

153
0.43

1
3900

A tabela ilustra como interpretar Kcat, KM e eficincia cataltica (kcat/KM), comparando a ao

de enzimas proteolticas sobre diferentes substratos sintticos. O ponto de clivagem dos
substratos est indicado pela flecha. Conforme o nmero de resduos de aminocidos
aumenta esquerda do ponto de clivagem, a eficincia cataltica (kcat/KM) das enzimas
melhora (considerando-se como 1 o valor obtido com o substrato mais curto).
No caso da tripsina, o Km diminue 3X, sem alterar o kcat, ou seja a formao do complexo
ES com o substrato maior facilitado, mas no foi afetada a sua transformao em produto.
No caso da elastase, o Km diminue ~300 X e o kcat aumenta ~10x, ou seja todas as etapas
da reao so facilitadas com o substrato mais longo.Como resultado, a eficincia cataltica
aumentou 3.900 vezes.

35
QUIMOTRIPSINA

18

STIO ATIVO

SUBSTRATO

S4

S3

S2

S1

S1

P4

P3

P2

P1

P1

STIO
CATALTICO

LIGAO
SUSCEPTVEL

Representao esquemtica do stio de reconhecimento do substrato da QUIMOTRIPSINA.

O stio ativo de uma enzima proteoltica em geral uma fenda onde se localizam os
resduos de aminocidos (S) dotados de capacidade cataltica. O resduo de aminocido da
enzima que efetua a clivagem do substrato designado S1, e sucessivamente esquerda na
seqncia primria da enzima, ficam os resduos S2, S3, S4, etc. De maneira anloga, os
resduos de aminocidos da enzima direita de S1 so designados com S1, S2, S3, etc.
O resduo cataltico S1 da enzima cliva o substrato proteico no resduo P1, determinando sua especificidade primria. esquerda e direita de P1 na seqncia do substrato
proteico, esto os resduos P2, P3, etc, e P1, P2, etc, respectivamente.
A figura acima explica os dados da tabela no slide anterior. O encaixe da enzima com
a molcula do substrato melhora quando outros resduos, alm de S1 e P1, interagem. Na
tabela, os substratos com resduos P2 a P4 proporcionaram melhores parmetros, mostrando
que as interaes que esses realizam com a enzima influenciam sua atividade enzimtica.

Como so controladas as enzimas in vivo, alm de alteraes na disponibilidade

de S e da prpria E ?
Lembrar que em geral no ocorrem variaes bruscas de pH e de temperatura.
A atividade enzimtica pode ser regulada por diferentes mecanismos, que muitas
vezes atuam em conjunto na mesma enzima.
Entre estes mecanismos, destacam-se:
1.

Inibidores:

irreversveis: no proticos e proticos

reversveis: competitivo, no competitivo ou misto, incompetitivo

2.

Alosteria:

ativadores e inibidores

cooperatividade

3.

Modulao covalente

Ativao de zimognios

Fosforilao e defosforilao

Agora vamos falar de:

Inibidores irreversveis:
Compostos orgnicos clorados ou fosforados so bons exemplos de inibidores enzimticos irreversveis,
pois reagem com o resduo S1 de serino-enzimas, formando um complexo irreversvel. Uma das enzimas
altamente sensvel a esses compostos a acetilcolinesterase, responsvel pela metabolizao do
neurotransmissor acetilcolina em neurnios centrais e perifricos.
Este o mecanismos de ao dos inseticidas organofosforados, como o malathion e o parathion. Tanto a
acetilcolinesterase de insetos como de mamferos so igualmente inibidas por essas drogas. Contribue
para a toxicidade desses inseticidas a longa meia vida que esses apresentam no ambiente.

Inseticidas
organofosforados
dose letal: 3-13 mg/Kg, oral

meia vida 23 anos

Acetilcolinesterase complexada com sarin ou gs dos nervos (dose letal 0,01 mg/kg, oral), um
organofosforado altamente txico e voltil, que reage com o resduo de Ser ativo da enzima.

E
E

Enzima +

H3C

SO2F

F-

diisopropilfluorofosfato

enzima inibida

PMSF
phenylmethane
sulphonyl fluoride

No laboratrio, serino-enzimas podem ser identificadas por serem eficientemente inibidas por
compostos organofosforados menos txicos como o diisopropilfluorofosfato (DFP) ou o fluoreto
de fenilmetilenosulfonila (PMSF).
Diferentes compostos so utilizados em laboratrio para identificar o mecanismo cataltico de
enzimas, baseado em reaes especficas para as cadeias laterais de aminocidos que podem
fazer parte do stio ativo dessas.

Inibidores proteicos de enzimas proteolticas desempenham importantes papis

fisiolgicos. Entre esses esto as serpinas, inibidores de serino-proteinases, e as
cistatinas, inibidores de cisteno-proteinases. Em ambos os casos, os inibidores
funcionam como falsos substratos, sendo reconhecidos e clivados pelas enzimas,
que ficam aprisionadas num complexo com o inibidor.
Modo de ao de serpinas:

Serpinas: serine proteinase inhibitors

A serpina e a enzima inicialmente

formam um complexo no
covalente (EI), complexo de
Michaelis. Em seguida, a
clivagem da ligao peptdica na
ala reativa forma em um
intermedirio acil-enzima (EI*),
que pode resultar em
transposio e insero da ala
da serpina na enzima,
bloqueando-a permanentemente,
ou em certas circunstncias, na
liberao da serpina clivada e da
enzima livre.

Neurotropic factors
PEDF F1
neuroserpin I-1
PN1 E2
Alzheimer disease

alfa1-ACT A3

Tumor cell invasion

Hormone transport

CBG A6
TBG A7

PCI A5

A Superfamlia das
Serpinas

Inflammation &
Complement activation

maspin B5
PI14 I2
Prohormone conversion

alfa1-ACT A3

so conhecidas cerca de 500

serpinas (at set.2001)

alpha1-PI A5
alpha1-ACT A3
KAL A4
ov-serpins B*
Blood pressure regulation

Renal development

AGT A8
AGT A8
megsin B7

Sperm development

PCI A5

angiogenesis

PEDF - F1
maspin- B5
ATIII - C1
PAI1 C5
fibrinolysis

Coagulation

PCI A5
ATIII C1
HCFII D1
PAII E1

ECM maintainance and

remodelling

alphaPI A1
alpha1- ACT A3
PAI E1
PN1 E2
HSP47 H1

PAI1 C5
PAI2 B2
alpha2-AP F2
apoptosis

alpha1-PI A5
alpha1-ACT A3
ov-serpins B*

apresentam 1 cadeia com 350500 aminocidos

filogenticamente formam 16 cls
a maioria tem atividade como
inibidor de serino proteinases
existem serpinas no inibitrias
a figura ao lado mostra vrios
processos fisiolgicos e/ou
patolgicos nos quais existe
participao de serpinas

Microbial infection

B-cell development

serpinas inibitrias
centerin B9

C1 Inh G1
ov-serpins B*

serpinas no inibitrias

Como so controladas as enzimas in vivo, alm de alteraes na

disponibilidade de S e da prpria E ?
A atividade enzimtica pode ser regulada por diferentes mecanismos, que muitas
vezes atuam em conjunto na mesma enzima.
Entre estes mecanismos, destacam-se:
1.

Inibidores:

irreversveis: no proticos e proticos

reversveis: competitivo, no competitivo ou misto, incompetitivo

2.

Alosteria:

ativadores e inibidores

cooperatividade

3.

Modulao covalente

Ativao de zimognios

Fosforilao e defosforilao

Agora vamos falar de:

Inibio competitiva
I

E
S

IS

S
SS

P
I

S
S

o inibidor anlogo estrutural do substrato e

compete com ele pela ligao ao stio ativo
com aumento da [substrato], ocorre diminue da
inibio caracterizando uma competio entre S e I
no h alterao da Vmax
h um aumento de Km por um fator , que
permite o clculo da constante de inibio, Ki

Inibio no competitiva ou mista

inibidor no anlogo estutural do

E
E
I

substrato - no se liga ao stio ativo

inibidor se liga E e ao ES
aumento da [substrato] no diminue a
inibio - no h competio
Km aumenta e Vmax diminu

Inibio incompetitiva

inibidor anlodo do estado de transio

e se liga somente ao complexo ES
Km aumenta e Vmax diminu

Como so controladas as enzimas in vivo, alm de alteraes na

disponibilidade de S e da prpria E ?
A atividade enzimtica pode ser regulada por diferentes mecanismos, que muitas
vezes atuam em conjunto na mesma enzima.
Entre estes mecanismos, destacam-se:
1.

Inibidores:

irreversveis: no proticos e proticos

reversveis: competitivo, no competitivo ou misto, incompetitivo

2.

Alosteria:

ativadores e inibidores

cooperatividade

3.

Modulao covalente

Ativao de zimognios

Fosforilao e defosforilao

Agora vamos falar de:

Enzimas alostricas possuem uma regio diferente do stio ativo ao se liga

um efetor ou modulador alostrico. A mudana conformacional decorrente da
ligao do efetor alostrico se propaga pela molcula e afeta o stio ativo,
ativando-o ou inibindo-o. Observe nas figuras.

Ativador alostrico

Inibidor alostrico

Enzimas tipo K: efetores alostricos alteram o Km

Enzimas tipo V: efetores alostricos alteram a Vmax

Grfico V x S
(Michaelis-Menten)
uma curva sigmide

A aspartato transcarbamoilase fornece N-carbamoil-aspartato para a rota de

sntese de pirimidinas. uma enzima alostrica tipo K, inibida por CTP e ativada
por ATP, sendo composta por 6 unidades regulatrias e 6 catalticas.

Carbamoil

aspartato

N- Carbamoil

+H

PO-4

aspartato

PO42-

pirimidinas

Sem efetores
alostricos
A ligao de CTP s
subunidades regulatrias fecha
o acesso aos stios ativos nas
subunidades catalticas.

ativa

CTP

inativa

CTP

Como so controladas as enzimas in vivo, alm de alteraes na

disponibilidade de S e da prpria E ?
A atividade enzimtica pode ser regulada por diferentes mecanismos, que muitas
vezes atuam em conjunto na mesma enzima.
Entre estes mecanismos, destacam-se:
1.

Inibidores:

irreversveis: no proticos e proticos

reversveis: competitivo, no competitivo ou misto, incompetitivo

2.

Alosteria:

ativadores e inibidores

cooperatividade

3.

Modulao covalente

Fosforilao e defosforilao

Ativao de zimognios

Agora vamos falar de:

Ao contrrio da alosteria, em que os efetores ligam-se enzima apenas por ligaes

fracas, na modulao covalente a enzima modificada covalentemente por duas
outras enzimas: uma quinase fosforila a enzima s custas de ATP, e uma
fosfatase remove o grupo fosfato da enzima fosforilada.
A modulao covalente energticamente cara, pois
necessita duas outras protenas e ATP para regular
enzima
a atividade de uma enzima. Ao contrrio, na alosteria
a enzima controlada pelas concentraes relativas
de seus efetores e a afinidade da enzima por estes.

fosfato

Fosforilao - Defosforilao

substrato

fosfatase

inativa

quinase

ativa

A regulao do metabolismo intermedirio, por

exemplo, sntese e degradao de lipdeos e
carboidratos envolve etapas de alosteria e
modulao covalente
Em resposta ao hormnio adrenalina ou epenifrina, h um
aumento da concentrao de glicose circulante, preparando
o organismo para luta ou fuga.
Na primeira etapa dessa resposta metablica, a adrenalina
ativa por alosteria a enzima de membrana adenilato
ciclase, formando AMP cclico.
Numa segunda etapa de alosteria, o AMP cclico ativa a
protena quinase A (PKA), ligando-se sua unidade regulatria e liberando a unidade cataltica ativa.
Na terceira etapa, ocorre modulao covalente em que a
PKA fosforila a fosforilase quinase, tornando-a ativa.
Na quarta etapa, tambm por modulao covalente, a
fosforilase quinase fosforila a glicognio fosforilase,
ativando-a. Por fim, esta hidrolisa diretamente o glicognio
liberando glicose-1-fosfato para a via glicoltica.

Mecanismos de regulao do metabolismo de carboidratos e lipdeos

Enzima 4
alosteria

modulao PO
4
covalente
transporte

Enzima 1

cAMP

Enzima 4

Enzima 2

membrana

alosteria

alosteria

Sntese RNAm

indutor

Enzima 3

Sntese
ribossomal

repressor

Em vias metablicas reguladas por alosteria, uma enzima inicial da rota

controlada por um dos produtos finais da mesma.

Como so controladas as enzimas in vivo, alm de alteraes na

disponibilidade de S e da prpria E ?
A atividade enzimtica pode ser regulada por diferentes mecanismos, que muitas
vezes atuam em conjunto na mesma enzima.
Entre estes mecanismos, destacam-se:
1.

Inibidores:

irreversveis: no proticos e proticos

reversveis: competitivo, no competitivo ou misto, incompetitivo

2.

Alosteria:

ativadores e inibidores

cooperatividade

3.

Modulao covalente

Fosforilao e defosforilao

Ativao de zimognios

Agora vamos falar de:

Ativao de zimognios um caso especfico de modulao

covalente exclusivo de alguns tipos de enzimas proteolticas.
zimognios: as proteases so sintetizadas numa forma inativa por estar em
uma conformao desfavorvel, com bloqueio ou desalinhamento dos
resduos do stio cataltico.
conformao desfavorvel resulta de pores adicionais da cadeia polipeptdica, que devem ser retirados para que a protena assuma a forma ativa.
podem acontecer duas situaes, combinadas ou no:
- zimognio tem uma extenso N-terminal (pro-segmento) que precisa
ser retirada. Pro-segmentos podem ter de 2 a 150 resduos a.a.
- zimognio tem cadeia polipeptdica nica, que precisa ser clivada
(protelise limitada) para formar duas ou mais subunidades.
converso do zimognio protease ativa pode resultar da ao proteoltica
de outra protease, ou de alterao do pH ou temperatura do meio, ou ainda, da
adsoro do zimognio uma superfcie negativa. Esses eventos determinam
mudana conformacional e/ou auto-hidrlise pela prpria protease.
ativao irreversvel, e porisso, energeticamente cara para o organismo.

A enzima digestiva quimotripsina sintetizada como quimotripsinognio, com um

cadeia nica, impossibilitando a montagem do stio ativo, formado pela His57, Asp102 e
Ser195 (em rosa). No intestino, o quimotripsinognio clivado pela tripsina em dois pontos,
retirando dois dipeptdeos. A quimotripsina ativa possue trs subunidades, cadeias A, B e
C, unidas por 5 pontes S-S.

A Quimotripsina formada por dois domnios, com 6

folhas antiparalelas (vermelho) cada.
O stio ativo contendo a trade cataltica (Ser195,
Asp102, His57, as cadeias laterais esto destacadas)
localiza-se entre os dois domnios. As pontes S-S
aparecem em violeta.
quimotripsinognio

quimotripsina

Linhas pontilhadas indicam os resduos 14-15 e 147148 presentes no precursor inativo,

As asprtico-proteases gstricas, como a

pepsina, so sintetizadas como zimognios

Em verde est representado o prosegmento

com 43 aminocidos, que bloqueia o acesso
ao stio ativo.

Inicialmente, o pepsinognio ativado pela

exposio ao HCl, com uma mudana
conformacional que permite que algumas
molculas hidrolisem o pro-segmento,
tornando-as ativas.

Em seguida, a pepsina formada faz a

protelise limitada de mais molculas de
pepsinognio.

Em rosa est representado as regies da

molcula que se reorganizam com a retirada
do pro-segmento.
pro-segmento

VIA INTRNSECA
PK

XII

A Coagulao Sanguinea
resultado da ativao de
uma cascata de zimognios
de serino-proteinases.

HMWK

Superfcie-

XI

VIA EXTRNSECA

XIIa

IX
XIa

Superfcie
-

IX

Leso
vascular

IXa

IXa

VIIa

VII
Fator tissular

VIIIa
X

X
Xa
Va

V
Va
Trombina (IIa)

Protrombina (II)

VIA COMUM

Fibrinognio (I)

Fibrina (Ia)
XIIIa

Cogulo de
fibrina

FIBRINLISE

Uroquinase
tPA
Plasminognio

Plasmina

A cascata pode ser iniciada

independentemente atravs do
fator XII (via intrnseca) ou do
fator VII (via extrnseca).
Ambas as rotas convergem
para uma via comum, com a
ativao do fator Xa. Este, em
presena de fator Va, converte
protrombina em trombina.
O fibrinognio clivado
formando fibrina por ao da
Trombina.
Zimognios
Serino-proteinases
Fatores no enzimticos

Para mais informaes, visite as pginas abaixo:

http://www.brenda.uni-koeln.de/
http://www.ebi.ac.uk/thornton-srv/databases/CSA/
http://merops.sanger.ac.uk/cgi-bin/merops.cgi?id=index;action=clanid