UNIVERSIDADE FEDERAL DE SERGIPE

CENTRO DE CINCIAS EXATAS E TECNOLOGIA

DEPARTAMENTO DE ENGENHARIA QUMICA E
QUMICA INDUSTRIAL

Produo de Enzimas por Processos

Fermentativos
Isaac de Araujo Matos

07 de Abril de 2015
So Cristvo-SE

Bibliografia recomendada

Biotecnologia Industrial
Processos
Fermentativos e
Enzimticos
,Vol 3, Editora Edgard
Blcher LTDA

Enzimas em Biotecnologia
Produo, Aplicao e Mercado,
Editora Intercincia

ENZIMAS

Definio - so protenas com atividade cataltica

Geraldo Lippel SantAnna Jr

Ribozima RNA com

atividade cataltica

Nobel de Qumica-1968
Sidney Altman
Thomas Cech

Enzimas (natureza proteica)

Funo - Catalisar reaes

Energia de Ativao
COMO?

Estrutura

Gly-Ala-Leu-Ile-Pro-Phe-Gly-Ala

Ligao
Peptdica

Estrutura

APLICAES
Produo de Alimentos

Para que produzir

Enzimas?

Anlises Clnicas
Frmacos
Cosmticas
Industria de papel e
celulose
Biodiesel

Produo Industrial de enzimas

Fermentao
Semi-slida

Submersa

Superfcie do
substrato

Em meio ao
substrato

> risco contaminao

> espao
< rendimentos

Beneficiou-se
Instrumentao
Controle

Fermentao Submersa
Os processos que empregam fermentao submersa
podem sem divididos em duas classes:

UPSTREAM
(a montante)

DOWNSTREAM
(a jusante)

Fermentao

Cultura estoque

Crescimento em
frascos agitados

Pr-inculo
em
fermentador
UPSTREAM

Preparo do meio

Esterilizao

Fermentador
principal

Separao

DOWNSTREAM

Concentrao
Purificao
Acabamento

Fluxograma simplificado do processo fermentativo submerso

Processos upstream

Cultura estoque
Qual enzima ser
produzida?

Quais microrganismo
disponveis?

FUNGO

BACTRIA

LEVEDURA

Aspergillus niger

Micrococcus luteus

Catalase
Aminoptidase
Glicoamilase

Catalase

Saccharomyces
cerevisiae
Invertase

Origem do Microrganismo
Linhagem
Selvagem
Solo
gua
Ar
Vegetais
Fezes

Modificada
Gentica
Clssica

Biologia
Molecular

Cultura estoque
Caratersticas dos microrganismo
produo de enzimas:

necessrias

Seguro do ponto de vista biolgico.

Elevada capacidade biossinttica e excretora de
enzimas.
Ser adaptado presso osmtica, temperatura e fora
inica do meio.
Ser tolervel a substncias do meio.

Cultura estoque

Crescimento em
frascos agitados

Pr-inculo
em
fermentador
UPSTREAM

Preparo do meio

Esterilizao

Fermentador
principal

Separao

DOWNSTREAM

Concentrao
Purificao
Acabamento

Fluxograma simplificado do processo fermentativo submerso

Cultura
estoque

Crescimento em
frascos agitados

Pr-inculo em
fermentador

B1
B1

Inoculao com a
cultura estoque

B2

Preparo do Meio
Fornecer os nutrientes e condies necessrias
fermentao.

Fonte de carbono

Fonte de nitrognio

Acares

(NH4)2SO4

Glicose

NaNO3

Sacarose

Uria

Amilceos

Extrato de levedura

Lignocelulsicas

Preparo do Meio
pH
Crescimento celular
Elevado rendimento
No Deteriorar a enzima
As concentraes de nutrientes e o pH devem ser
otimizadas por mtodos estatstico

Cultura estoque

Crescimento em
frascos agitados

Pr-inculo
em
fermentador
UPSTREAM

Preparo do meio

Esterilizao

Fermentador
principal

Separao

DOWNSTREAM

Concentrao
Purificao
Acabamento

Fluxograma simplificado do processo fermentativo submerso

Esterilizao
Maioria dos processos empregam cultura pura.
Condies estreis.
Substratos para a
confeco do meio

Cmeras
Temperatura

Meios Lquidos

Biorreator
Tempo

Vasos separados

Esterilizao
Esterilizao no prprio fermentador.
Vapor
Saturado
Serpentinas ou
camisas
Indireto

Difusor com
agitao
Direto
Diluio

Esterilizao
A temperatura de esterilizao 121C.

Nutrientes termossensveis
Cuidados
Reao de Maillard

Esterilizao
Descontnua
(batelada)

Tempo grande

Contnua

Aquecimento e esfriamento
praticamente instantneo

Para processos aerbios o ar deve ser esterilizado antes

de adentrar no biorreator

Cultura estoque

Crescimento em
frascos agitados

Pr-inculo
em
fermentador
UPSTREAM

Preparo do meio

Esterilizao

Fermentador
principal

Separao

DOWNSTREAM

Concentrao
Purificao
Acabamento

Fluxograma simplificado do processo fermentativo submerso

Fermentador principal

100 a 500L

50000 L

Fermentador principal
Durante etapas de transferncia observar:
Contaminao (bactrias, fungos)
Infeco por bacterifagos
Mutantes de menor eficincia
O menor nmero possvel de transferncias
Quantidade de inculo de 1 a 5%

Fermentador principal
Sistema de Agitao

Tubulao para
meio de cultura
Compressor

Tanque Reator

Sistema de
Monitorao
Sondas Sensoras

Camisa Trmica

20 a 300 m2
Aerador Submerso

Ao Inoxidvel

Vantagens da Fermentao submersa

Facilidade no controle de variveis fsico-qumicas
Eficincia na absoro de nutrientes e metablitos
Tempo do processo
Produtividade

Desvantagem
Custo devido a agitao e aerao
Principalmente em meios viscosos e de
reologia complexa

Operao da Fermentao Submersa

Batelada simples

Problemas de inibio pelo

substrato ou produto ou metablitos

Batelada alimentada
Cultura contnua

Vantagens
Longos Perodos de operao
Inexistncia de tempos improdutivos

Tempo de
durao 30 a 150
horas

Desvantagens
Baixa concentrao da enzima
Alto risco de contaminao
Degenerao da linhagem microbina

Parmetros de Controle

pH

Temperatura

[O2]

Garantir condies
timas
Microrganismo

Enzima

Processos Aerados

Aerao Natural

O2 provem do ar ambiente
(fermentao semi-slida)

Aerao Natural

O2 introduzido
borbulhando-se ar, O2, ou
uma mistura de ambos
Aumento
rendimento (TM)

Cultura estoque

Crescimento em
frascos agitados

Pr-inculo
em
fermentador
UPSTREAM

Preparo do meio

Esterilizao

Fermentador
principal

Separao

DOWNSTREAM

Concentrao
Purificao
Acabamento

Fluxograma simplificado do processo fermentativo submerso

Processos upstream

Separao
Aps a fermentao temos uma
mistura de clulas e o meio de cultura
As enzimas podem ser
intra ou extracelulares
A maioria so extracelulares
Porm existem enzimas extracelulares de
grande importncia industrial

Segredo Industrial em Bioprocessos