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Universidad Nacional de Trujillo

Facultad de Farmacia y Bioqumica- Dpto. Bioqumica Ctedra


de Bioqumica-Asignatura Anlisis Clnicos

Metodologa para los cultivos comunes: Tipos de cultivo en


microbiologa clnica: urocultivo, coprocultivo, hemocultivo,
tracto respiratorio, genital, SNC, piel y heridas. Antibiograma.
Definicin. Procesamiento.

Docente:
MSc. Anabel Gonzlez Siccha
Trujillo, 10 de Abril de 2014

Cultivos
Son medios esenciales para determinar la

identidad, cantidad y patogenicidad de un


microorganismo.
Secrecin: es el proceso por el que una
clula o un ser vivo vierte al exterior
sustancias de cualquier clase. Tambin se
llama secrecin a la sustancia liberada. El
acto de verter una secrecin se llama
secretar.
Ejemplo :
Secrecin de heridas

UROCULTIVO
Es la determinacin de elementos anormales,
observacin del sedimento urinario y cultivos en
medios selectivos y diferenciales
RECOMENDACIONES
El paciente no debe haber recibido antibiticos
por lo menos cinco das antes del examen.
El recolector puede estar como mximo 30
instalado, mas tiempo, la muestra se considera
contaminada.
MATERIALES
Muestra de orina ( torunda de algodn, Sol salina,
frasco recolector), Microscopio, Placas de Agar,

UROCULTIVO
Determinacin
BACTERIAS
HONGOS
MICOBACTERIAS
ANAEROBIOS
PARSITOS

Volumen
Comentarios
(ml)
PRIMERA ORINA DE LA
0.5-1
MAANA
PRIMERA ORINA DE LA
> 20
MAANA
PRIMERA ORINA DE DIAS
> 20
CONSECUTIVOS
ASPIRADO SUPRAPBICO,
ENVIAR EN UN SISTEMA DE
1
TRANSPORTE PARA
ANAEROBIOS

ORINA DE 24 HORAS

UROCULTIVO
METODO
Tomar la orina sin centrifugar, con el asa de

siembra calibrada, es decir q cada asada


suministre 0,01 o 0,001 ml de orina.
Sembrar la orina por dispersin-agotamiento con
una asa de siembra, sobre una placa de agar
sangre y otra sobre una placa de agar Mac
Conkey.
Rotular e incubar a 37C.

UROCULTIVO
Lectura e Interpretacin
Detallar las caractersticas de las colonias en

el medio
Seleccionar colonias y resembrar en los
medios de diferenciacin bioqumica (citrato,
urea)
Se interpreta de acuerdo a las Rx bioqumicas
Para conocer el nmero de microorganismos
en 1 ml de orina, se cuentan las colonias y el
resultado se multiplica x 100, si se uso asa de
0,01 ml. (0,001ml x 1000).
Si el # de colonias sobrepasa el # de 100 000

Lectura e Interpretacin
Negativo
De 0 10 000 bacterias
por ml de orina
(contaminacin)
Dudoso, discutible
De 10 000 100 000
( debido al tiempo de
bacterias / ml de orina
envo de la muestra al
laboratorio)
Positivo: Indica infeccin
Recuento superior a 100
urinaria
000 bacterias/ ml de orina
En la orina infectada puede encontrarse:
E. coli, P. aeruginosa, Enterococo, Citrobacter, Klebsiella
Se acepta un recuento superior de 100,000 bacterias/
ml de orina, indica infeccin de las vas urinarias.

COPROCULTIVO
Se toma muestra para identificar parsitos y
otros microorganismos que causan diarrea, para
valorar la funcin intestinal y para investigar la
posibilidad de sangre oculta.
Recomendaciones
Se el anlisis cuando presenta prurito anal, dolor
abdominal y diarreas.
Cada muestra debe contener por lo menos 4 ml
( necesaria para facilitar la deteccin de parsitos
cuando se encuentran pocos concentrados). Los
nios que controlan su evacuacin deben orinar y
luego defecar en el recipiente.
No se debe dejar las muestras expuestas al aire
en recipientes sin tapa. No dejar muestras para

COPROCULTIVO
MATERIALES :
Recipientes

indicados, hisopo
rectal estril,
cinta adhesiva
transparente 12 x
1 cm (huevos
oxiuros)
METODO
1) Examen
parasitolgico:
Test de Graham

COPROCULTIVO
2) Examen bacteriolgico
Usar un recipiente estril para la muestra.
Se debe recolectar antes de la
administracin de cualquier antibitico
En nios y en paciente con problemas, se
usa un hisopo embebido en el medio de
transporte y se introduce en el recto en unos
3 cm, se toma la muestra rotando y por
movimiento circular para arrastrar la
deposicin.
Se coloca la muestra en un tubo estril con
medio de transporte y se corta la porcin

COPROCULTIVO
Lectura e Interpretacin
Se puede identificar: helmintos, huevos
o larvas de helmintos, protozoarios ,
quistes de flagelados y ciliados ( Giardia
lamblia, Balantidium coli)
En estado primario de la enfermedad
(salmonella y shiguella) se encuentran el
cc en perodo agudo.
En heces con moco: Giardia lamblia.
Los coprocultivos se piden en toda
diarrea desinteriforme, mxime si cursa

HUEVO DE ASCARIS EN
HECES

HUEVO DE TRICHURIS
TRICHURA

HUEVO DE TENIA EN
HECES

ADULTO DE ECHINOCOCCUS

HEMOCULTIVO

Es la prueba ms til y ms frecuentemente usada


para demostrar la presencia de microorganismos en
la sangre.
Consiste en obtener sangre en asepsia y aadirla a
un frasco q contiene un medio de cultivo elegido
para aislar un determinado microorganismo.
Recomendaciones
Deben obtenerse, antes que el paciente reciba
terapia antimicrobiana.
Tomar la muestra cuando el paciente esta con T
elevada.
Se requiere un mnimo de tres hemocultivos
seriados por pacientes antes de considerar el caso

METODO

HEMOCULTIVO

Se extrae sangre del pliegue del codo en

forma asptica
Sembrar 5-10 ml de sangre ( mayor cantidad
posible)
El medio de eleccin se calienta a 37C en
una estufa de cultivo, y se flamea el tapn
para destruir los microorganismos
contaminantes en la superficie.
Para llevar el frasco a la cabecera del
paciente se cubre el tapn con un algodn
con alcohol.

HEMOCULTIVO
Lectura e Interpretacin
Examinar el frasco diariamente durante la

primera semana para detectar la aparicin de


turbidez en el medio, hemlisis, signos de
produccin de gas o crecimiento de colonias
directamente encima de la sangre.
Si los cultivos son negativos deben seguir en
observacin hasta por 21 das antes de
informarse como negativos.
Los hemocultivos visualmente positivos
(turbidez) deben teirse por el mtodo de Gram
y subcultivarse (resiembra)
Retirar un gota del hemocultivo utilizando

Secreciones
Las secreciones que pueden determinarse
son entre otras:
Tracto Respiratorio:
ticas: conducto auditivo externo
Vaginal : conducto cervical
Uretral
Exudados etc.
Materiales:
Hisopos de algodn estril
Tubos de ensayos con medio de cultivo
Asa bacteriolgica estril de alambre delgado
Tubo como medio de transporte
Solucin fisiolgica

Tracto Respiratorio:
Muestras
Tracto
Respiratorio
Superior
Faringoamigdalino
Nasofaringe
Nasal:
Staphylococcus aureus.

Senos
paranasales

Tracto Respiratorio MUESTRAS


Inferior
EXTRAPULMONA
RES
Esputo, Esputo
Lquido pleural
inducido
Aspirado
Biopsia pleural
traqueobronquial
Puncin
Hemocultivo
transtraqueal
Muestras obtenidas a
travs de
fibrobroncoscopia

Tracto Respiratorio
Mtodo
Se obtiene la
secrecin farngea.
Paciente sentado,
abre la boca, baja la
lengua y dice Ahhh.
Introduce el hisopo
evitando tocar la
lengua, vula
Introduce el hisopo
con la secrecin en
el medio de cultivo
Ejemplo:

Tracto Respiratorio
El frotis farngeo es un importante test para
diagnosticar y tratar con una gran precisin las
infecciones que causan los dolores de garganta,
adems puede prevenir la transmisin de estas
enfermedades de una persona a otra.
Por ejemplo:
Coco gram(+) Streptococcus beta-hemoltico (S.
pyogenes). (Agar sangre-azida)
Neisseria gonorrhoeae, A. haemolyticum, C.
diphteriae y H. influenzae (Epiglotitis (Agar
Chapman)
Enterobacterias: Agar Mc Conkey

Secrecin tica
Mtodo:
Si la pus sale al
exterior, es preferible
eliminarlo con
algodn estril.
Introduce el hisopo en
el CAE, en direccin
oblicua de atrs hacia
delante y de abajo
hacia arriba.
Introduce el hisopo
con la muestra en el

Secrecin Vaginal
Mtodo:
La muestra es tomada del
C. cervical.
En gonorrea: antes o
inmediat despus de la
menstruacin.
Coloca al paciente en
posicin ginecolgica,
entreabrir la vulva
Introducir el espculo
humedecido en agua tibia
la vagina,
usarestril dentro del canal
en
Introducir
el no
hisopo
lubricante.
cervical rotndolo suavemente y en un tiempo
Visualizar
el seg,
cuello
uterino
de 10 a 30
retirar
y colocar en el tubo

Secrecin Uretral
Mtodo:
Se toma la muestra a primera
hora de la maana, antes q el
paciente haya orinado
Limpiar el meato con algodn
humedecido en sol. salina estril.
Aplicar al pene una ligera presin
desde atrs, de manera que salga
una
(pus) por el
el hiposo estril en
Si
la gota
gota de
no secrecin
aparece, introducir
meato.
el C. uretral anterior hasta una profundidad de 2,5
cm aprox. para obtener la muestra. Tomar la pus
con el hisopo o asa e introducir en el tubo con
medio de transporte. Ejem:Neiseria (Agar Thayer-

Exudados y/o heridas

Mtodo:
1)Muestra de Fluidos
Lavar la lesin ulcerada con agua y jabn
Ppula/alcohol/agua oxigenada/sol fisiolgica
Inyectar, aspirar el contenido, y retirar la
jeringa
Se inocula II a III gotas del material aspirado
en tubos de medio de cultivo.
2)Muestra de Frotis
Lavar la lesin ulcerada con agua y jabn,
desinfectar alcohol
Presionar con firmeza los bordes de la lesin
hasta q palidezca: en el borde interno, hacer

Lquido Cefalorraqudeo
El

LCR es un lquido producido en los


ventrculos, que son los espacios que hay
dentro del SNC.
En
los ventrculos hay una estructura
especializada que son los Plexos Coroideos
donde se produce el LCR.
Circula en el espacio que rodea a la mdula
espinal y el encfalo
Se produce y se reabsorbe continuamente a
una velocidad de 500 mL / da. Su volumen
permanece
constante
en
situaciones
fisiolgicas.

Estudio qumico del lquido


cefalorraqudeo
El

estudio de qumica del LCR identifica


qumicos, tales como las protenas y los niveles
de glucosa, que pueden ayudar a diagnosticar
ciertos trastornos y enfermedades.
Llamado tambin Qumica del LCR.

Forma en que se realiza el examen


Una puncin lumbar (espinal) es el medio

ms comn para recolectar una muestra de


LCR y generalmente se realiza de la siguiente
manera: se le solicita al paciente que se
acueste de lado con las rodillas encogidas
hacia el abdomen y la barbilla pegada al trax.
Se inyecta anestesia local en la parte inferior
de la columna. Se inserta la aguja espinal
generalmente entre la tercera y cuarta
vertebra lumbar y se extrae el lquido para
evaluarlo.
El paciente debe permanecer en posicin
horizontal o casi horizontal durante por lo

Forma en que se realiza el examen


Si el paciente presenta un problema como deformidad

lumbar o infeccin, imposibilita la puncin lumbar o


hacerla no confiable.
La puncin cisternal implica la insercin de una
aguja debajo del hueso occipital (parte posterior del
crneo). Esto puede ser peligroso porque la aguja se
inserta cerca del tronco enceflico.
La puncin ventricular es an menos comn, pero
se puede recomendar cuando es necesario obtener la
muestra de LCR en personas con posible hernia
cerebral inminente. Se realiza generalmente en el
quirfano. Se perfora un orificio en el crneo y se
inserta una aguja directamente en el ventrculo lateral
del cerebro.

Conteo de clulas de LCR


Valores normales
El valor normal de glbulos blancos est entre 0 y 5.
El valor normal de glbulos rojos es 0.
Significado de los resultados anormales
Un aumento en el conteo de leucocitos indica infeccin,

inflamacin
o
sangrado
dentro
del
lquido
cefalorraqudeo. Algunas de las causas son:
Absceso
,Infeccin
aguda,
Encefalitis
,
Hemorragia,,Esclerosis
Mltiple,
Meningitis,
ACV
hemorrgico, Tumor,
Afecciones adicionales que este examen puede ayudar
a Dx abarcan:
Malformaciones arteriovenosa (cerebral), Delirio,
Aneurisma cerebral, Demencia,

Cultivo de LCR
Para detectar la presencia de bacterias, virus y hongos

en el LCR causantes de infeccin.


El LCR es un lquido claro que transporta productos de
neurosecreciones (qumicos liberados por el tejido
neural), nutrientes, qumicos en las clulas y cambios
qumicos en las mismas.
El LCR generalmente se obtiene a travs de una
puncin lumbar (espinal).
El cultivo se realiza en el laboratorio.
El microbilogo lo examina todos los das y en caso de
presentarse crecimiento (un "cultivo positivo"), se
identifican los microorganismos y se verifica la
susceptibilidad a los antibiticos, permitiendo la mejor
seleccin de stos.

LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO

Meningitis bacteriana

LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO

ANTIBIOGRAMA
Definicin:
Es el procedimiento por el cual se determina el
grado de resistencia de una bacteria al antibitico.
Consiste en poner en contacto al germen que
hemos cultivado con distintos antibiticos para ver
cual de ellos es el que mejor va con el tratamiento
(seleccin del mejor antibitico).
Se cultivan en discos los cuales son unos
receptculos circulares con sustancias que
favorecen el crecimiento de los microorganismos,
pero al mismo tiempo contienen cada uno de ellos,
un antibitico conocido.
En resumen:
Se hace un antibiograma para ver que

ANTIBIOGRAMA
Mtodo:
Se distribuye sobre una placa el
microorganismo previamente cultivado,
en forma uniforme y abundante con
una asa de siembra.
Colocar los discos sobre este medio
slido con pinzas estriles, dejando 2
cm entre cada uno de ellos.
Llevar a la estufa e incubar a 37C
durante 12 18 horas.

Antibiograma. Tcnica del disco en medio slido

ANTIBIOGRAMA
Lectura:
Se observan las zonas de inhibicin ( donde
no crecen los microorganismos) alrededor de
los discos ( halo claro) que deben ser
medidas con una regla en mm, en la parte
exterior y reversa de la placa
Una zona de inhibicin indicar sensibilidad o
resistencia del antibitico, segn las medidas
obtenidas en mm.
Se utilizan discos para determinados
microorganismos, segn sean muestras de:
hemocultivo, urocultivo , coprocultivo y/ o

Modo de accin
Antibiticos
Inhibicin de sntesis de la Penicilina,Bacitracina,
pared
Novobiocina
Cicloserina,,Vancomicina,
Ristocetna,Grriseofulvina
Accin sobre la membrana Polipptidicos bsicos:
Polimixinas, Bacitracina
Tirotricina
Replicacin del DNA
Mitomicina,
Acido
nalidixico
Transcripcin del DNA
Actinomicina, Novobiocina
Traduccin del RNAm
Macrolidas, Sinergistina,
(sntesis de protenas)
Lincomicina
Inhibicin de la sntesis
Tetraciclina,Cloranfenicol
anomalas en la lectura del etc.
cdigo

Referencias Bibliogrficas
GAW A, COWAN RA, OREILLY D, STEWART MJ Y

SHEPHERD J. (2006): Bioqumica Clnica. 2 Ed.


Editorial Harcourt - Elsevier, Espaa.
http://perso.wanadoo.es/sergioram1/Microbiolo

gia.htm

Muchas Gracias