Enzimas

Cintica Enzimtica

La cintica enzimtica es el anlisis cuantitativo del efecto de cada uno

de los factores que intervienen en la actividad enzimtica, que se
evala a travs de la velocidad de la reaccin catalizada.

Las variables ms importantes son:

Concentracin de enzima, sustratos y productos
(incluyendo inhibidores y/o activadores)
pH
Temperatura

Ella est basada en la medicin de la velocidad de reaccin. As en la

reaccin:
S

dp
ds
v

dt
dt

Se tendr:

Como se observa en la figura, la velocidad de reaccin (pendiente)

disminuye continuamente a partir de un valor mximo inicial. Esto se
puede deber a:

Desaturacin de la enzima con sustrato, por disminucin de la

concentracin del sustrato

Inactivacin de la enzima por su inherente inestabilidad

Inhibicin por el producto

Desplazamiento del equilibrio, si la reaccin es reversible

Baja
concentraci
n de
sustrato

ALTA
concentraci
n de
sustrato
SATURACION

.
.
.
.
.

Efecto de la concentracin de sustrato

.
[s]

Concepto de velocidad inicial

[ ]

d[P]
v=

dt

,t

s
t

Velocidad de la reaccin (v)

Vmax

Relacin entre Km y Vmax

Michaelis y Menten

Vmax/2

Km Concentracin de Sustrato [S]

La Km es la concentracin de
sustrato donde se obtiene la mitad
de la Vmax

Velocidad de la reaccin (v)

Vmax

Vmax/2

Km Concentracin de Sustrato [S]

A mayor Km, menor es la afinidad de la enzima por el sustrato

A menor Km mayor es la afinidad de la enzima por el sustrato

Representacin directa

Vmax

100

80

60

40

V
K

m x
m

20

s
0
0

20

Km

40

60

80

100

Representacin Lineweaver-Burke
Representacin recproca doble
(Lineweaver - Burk)
0.04

1/v

1/Vmax

0.03

1
K m 1
1

v V mx s V mx

0.02

-1/Km

0.01

0.00
-0.4

-0.2

0.0

0.2

0.4

0.6

1/s

Efecto del pH en la ENZIMA

Cada enzima tiene un pH ptimo para su actividad

El pH afecta las interacciones inicas

Efecto del pH
1. Sobre la fijacin del substrato al centro activo:
- Grupos disociables de la enzima
- Grupos disociables del substrato
2. Sobre la transformacin cataltica del substrato
3. Sobre la estructura de la protena enzimtica

En el efecto de la temperatura hay dos componentes:

1. Aceleracin de la reaccin segn la ecuacin

de Arrhenius
k = A exp (-Ea/RT)
2. Desnaturalizacin trmica de la protena

Efecto de la temperatura en la
ENZIMA
Aumento de laDesnaturacin
velocidad
por calor

154075
Temperatura

Cada enzima tiene una temperatura ptima

ORGANISMOS TERMFILOS
Son organismos que viven a altas t y realizan
sus reacciones enzimticas a estas altas t
Ejemplos son los que viven en las aguas
termales
Es tema de investigacin el aislamiento de las
enzimas de estos organismos para desarrollar
procesos industriales en condiciones ms
extremas

 Mecanismos de Regulacin Enzimtica

Inhibidores Enzimticos
Inhibicin
Competitiv
por
a
Substrato
Reversible

No
Competitiv
a
Acompetiti
va

Tipos de
Inhibicin
Irreversibl
e

Modificaci
n
Covalente

Mecanismos de Regulacin de las

Enzimas
Cambio en la tasa de expresin del gen de la enzima.
Las enzimas pueden ser activadas o desactivadas
por enzimas proteolticas.
Las enzimas pueden ser activadas o inactivadas por
modificaciones covalentes (fosforilacin).
La regulacin alostrica de las enzimas.
Inhibicin Enzimtica.

Regulacin en la expresin de
genes
Variaciones las demandas
metablicas de una clula
pueden llevar a incrementar o
disminuir la expresin de una
enzima.

Regulacin por enzimas

proteolticas
Las enzimas pueden ser activadas o desactivadas
por enzimas proteolticas.
Algunas enzimas se sintetizan como precursores inactivos
conocidos como proenzimas o zimgenos.
Un ejemplo son las enzimas digestivas las cuales se
secretan como derivados inactivos.

Regulacin por modificaciones covalentes

La actividad o la estabilidad de las enzimas puede

ser regulada por modificaciones covalentes, como la
fosforilacin en residuos de serina, treonina y
tirosina.

Regulacin Alostrica
Una molcula o regulador alostrico se fija a la
enzima en un lugar distinto y fsicamente alejado
del sitio activo de la enzima, lo cual puede
incrementar o disminuir la unin del sustrato.

Inhibidores Enzimticos
Son sustancias que alteran la actividad
cataltica de las enzimas disminuyendo total o
parcialmente la actividad de estas.

Bothropoides
jararaca

Mecanismos de Inhibicin
Enzimtica

Inhibicin
Competitiv
por
a
Substrato

Reversible

No
Competitiv
a
Acompetiti
va

Tipos de
Inhibicin
Irreversibl
e

Modificaci
n
Covalente

Inhibidores Reversibles

La inhibicin reversible se caracteriza por:

La unin entre la enzima y el substrato es reversible.
Existe un equilibrio entre la enzima y el sustrato libre
junto con el complejo enzima-sustrato.

Mecanismos de Inhibicin
Enzimtica
Inhibicin
Competitiv
por
a
Substrato

Reversible

No
Competitiv
a
Acompetiti
va

Inhibidores Competitivos
El inhibidor competitivo, es aquel que compite con
el sustrato por el sitio activo de la enzima, de esta
forma impide la formacin de producto.

Inhibicin competitiva
Al aumentar la cantidad
de
SUSTRATO
el
inhibidor competitivo es
desplazado y se forma
producto

Compiten con el sustrato por el sitio activo de la enzima

Se une solo a la enzima libre
V mx no se altera y K M cambia

Inhibidores Competitivos:
Caractersticas

La inhibicin competitiva es reversible al

incrementar la concentracin se sustrato, el cual
desplaza al inhibidor del sitio activo de la enzima.

Representacin de los
Inhibidores Competitivos
v

1/v

Km

Km

ap

[S]

-1/Km-1/Km ap

1/[S]

La inhibicin competitiva incrementa el valor de

Km
No modifica la Vmax de reaccin solo se necesita
una concentracin ms alta de sustrato para
alcanzarla.

Inhibidores Competitivos
Son compuestos que tienen una
estructura qumica y/o geomtrica
similar al sustrato.

Ejemplo: El Metotrexato es un
inhibidor reversible de la enzima
dihidrofolato-reductasa

Inhibidor competitivo
su estructura es similar a la del sustrato

Noseformaproducto

nhibidores No Competitivos
Los inhibidores no competitivos se unen a un lugar
distinto al sitio activo, por lo cual no compiten con
el sustrato.
El inhibidor no
competitivo modifica la
forma del sitio activo lo
que impide la interaccin
de la enzima con el
sustrato.

Inhibicin NO competitiva

Inhibidor NO competitivo
El inhibidor NO competitivo se une a la enzima en un sitio
diferente del sitio activo

S
E

ES

Inhibicin
No Competitiva

S
EI

E+P

ESI

El inhibidor se fija indistintamente a la enzima libre E

y al complejo enzima-substrato ES; ni el complejo EI
ni el complejo ESI son productivos

Representacin grfica de los

Inhibidores No Competitivos
1/
v

K
m

[
S
]

1/K

1/
[S]

La inhibicin no competitiva no modifica el valor

de Km, pero reduce la Vmax.

Inhibidores Acompetitivos
El inhibidor acompetitivo se fija al complejo enzimasustrato, pero no a la enzima libre.

Inhibicin Anticompetitiva
o Incompetitiva

Inhibidor Incompetitivo
En este tipo de inhibicin el inhibidor se enlaza al centro
activo pero solo despus de que el sustrato lo haya hecho
y, por tanto, inhibidor y sustrato no compiten. De esta
manera, aunque todo el sustrato est saturando la enzima
y toda la enzima est como complejo ES, el inhibidor puede
enlazarse produciendo un complejo inactivo ESI.
Como I solo se une a ES estimula la formacin de ES y, por
tanto, incrementa la unin del sustrato a la enzima,
disminuyendo Km . Sin embargo, el complejo ESI no
conduce a productos y Vm disminuye.

Inhibidor Incompetitivo
Se une a un lugar diferente del sitio
activo de la enzima
Se une slo al complejo enzimasustrato
Los efectos que tiene: disminuye el
valor de Km y tambin el de Vmx

S
E

ES

E+P
Inhibicin
Anticompetitiva

ESI
El inhibidor slo puede fijarse al complejo ES;
el complejo ESI no es productivo

Representacin grfica de los

Inhibidores Acompetitivos

La inhibicin acompetitiva disminuye el valor de

Km, y la Vmax.

Mecanismos de Inhibicin
Enzimtica

Irreversibl
e

Modificaci
n
Covalente

nhibidores Irreversibles
Reaccionan con la enzima formando un enlace
covalente, lo cual:
Bloquea la unin del sustrato.
Inhibe la actividad de la enzima.

Inhiben de forma permanente a la enzima.

Se requiere la sntesis de novo de enzima para superar la
inhibicin.

Ejemplos de Inhibidores
Irreversibles

Frmacos como la Penicilina, la Aspirina y el

Disulfiram son inhibidores irreversibles de la
actividad de enzimas.
La Penicilina es un inhibidor de la transpeptidasa,
encargada de la sntesis de la pared bacteriana.
La Aspirina es un inhibidor de la COX, enzima que produce
mediadores proiinflamatorios.
Disulfiram es un inhibidor de la aldehdo deshidrogenasa,
una enzima que participa en el metabolismo del alcohol.

Compuestos txicos como, los gases nerviosos (DFP)

o los metales pesados actan como inhibidores
irreversibles

Inhibicin Irreversible
- Los inhibidores irreversibles reaccionan con un grupo
qumico de la enzima, modificndola covalentemente
- Su accin no se describe por una constante de equilibrio K i,
sino por una constante de velocidad

E+I

ki:

- A diferencia de la inhibicin reversible, el efecto de los

inhibidores irreversibles depende del tiempo de actuacin
del inhibidor.
- Los inhibidores irreversibles son, por lo general, altamente
txicos.

Inhibidores Irreversibles
Producen inactivacin permanente de
la actividad enzimtica
Se interfiere con el normal desarrollo
de una reaccin o va metablica
Ejemplos:
p-cloromercuribenzoato,
yodoacetato, diisopropilfluorfosfato

Algunos tipos de inhibidores irreversibles

1. Reactivos de grupos -SH

2. Organofosfricos
3. Ligandos de metales
4. Metales pesados

Inhibicin enzimtica
alosterica

Enzimas Alostricas
Son enzimas cuya estructura proteica est
formada de varias subunidades
No se rigen por la cintica de M - M
Adems del sitio o centro activo tienen sitios
alostricos o de regulacin
Sitio activo/sustratos;
Sitio alostrico/moduladores o reguladores
La relacin entre la velocidad de reaccin y la
concentracin de sustrato sigue cintica
sigmodea

Enzimas alostricas
Las enzimas alostricas
presentan
estructura
cuaternaria.
Tienen diferentes sitios
activos, unen mas de
una
molcula
de
sustrato
La unin del sustrato es
cooperativa
la curva de velocidad
presenta
una
forma
sigmoidal

Concepto de
Cooperatividad
La unin de los sustratos al sitio activo
de una subunidad produce un cambio
conformacional que por contacto fsico
se transmite a las subunidades vecinas,
facilitando las interacciones
Modelos de unin: secuencial y
concertado
unin
Hb-O2,
enzimas
Ejemplos:
alostricas y sus sustratos

Moduladores Alostricos
Tambin
reciben
el
nombre
de
efectores y pueden ser positivos o
negativos
Se unen al sitio alostrico que puede
estar en la misma subunidad que tiene
al sitio activo o en las subunidades
regulatorias
Su
unin
produce
un
cambio
conformacional que afecta al sitio
activo

Aspartato
Transcarbamilasa

c L-asp + Carbamil-P === Carbamilasp + Pi . Primera reaccin en la

sntesis de pirimidinas
Efector positivo: CTP
Efector negativo: ATP
Tiene dos subunidades catalticas para
los sustratos y tres subunidades
regulatorias para los efectores

RESUMEN
Las enzimas son protenas que
catalizan las reacciones biolgicas
Presentan especificidad por su sustrato
Cada enzima presenta dos parmetros
importantes Vmax (saturacin de la
enzima) y la Km (medida de la afinidad
por el sustrato)

RESUMEN
La actividad enzimtica puede ser
inhibida, por inhibidores competitivos
(similares al sustrato) o por inhibidores
no competitivos.
La temperatura y el pH afectan a la
enzima en su actividad cataltica.
Algunas
enzimas
requieren
de
coenzimas y/o cofactores para su
actividad.

Puntos Clave
Las enzimas tienen mltiples mecanismos de
regulacin.
La actividad de las enzimas puede ser inhibida por
compuestos naturales o sintticos.
Existen mecanismos reversibles e irreversibles de
inhibicin enzimtica.
Los mecanismos de inhibicin pueden ser
dilucidados mediante el anlisis de los cambios de
los parmetros cinticos de las enzimas.