ENZIMAS

Enzimas
Protenas con capacidad cataltica debido a su poder de
activacin especfica y conversin de sustratos a
productos
enzima

sustrato(s) producto (s)

peptidos PM 12 000 - 106

Algunas enzimas contienen ademas carbohidratos,
fosfatos y cofactores
Las enzimas existen en todo sistema viviente y puede
existir desde los 0 -100C
Pueden acelerar reacciones por 103-1011 veces (Tabla 2)

 Isoenzimas
enzimas que tiene cualitativamente la misma
actividad enzimtica pero difieren en la velocidad
enzimtica y estructura debido a diferencias en la
secuencia de los aminocidos

Accin catalizadora
La enzima se fija (no covalentemente) a un
componente estereoespecficamente en el sitio
activo
Luego hay una conversin quimica del primer
compuesto a un nuevo compuesto
k1

k2

E S ES E P
k 1

 La enzima se regenera y se repite la reaccin

Concepto de llave-candado (1890-1940) vs.
fijacin inducida (1959)
Las enzimas se estudian desde el punto de
vista de la cintica ms que equilibrio
La relacin hiperblica entre la velocidad
(dS/dt o dP/dt) y concentracin de sustrato,es
el resultado de la formacin del complejo
enzima-sustrato antes de la conversin del
sustrato al producto (Fig)

Tipos de enzimas
Oxidoreductasas
oxida o reduce los sustratos, transfiriendo
hidrgenos o electrones o por la accin del
oxgeno

Transferasas
Remueve grupos (sin incluir H) de los
sustratos y los transfiere a las molculas
aceptoras (no incluyendo al agua)

Hidrolasas
Rompe enlaces covalentes en presencia de
agua

 Liasas
Remueve grupos del sustrato (no por
hidrlisis) dejando un doble enlace o fija
grupos a los dobles enlaces

Isomerasas
Isomerizan el sustrato.

Ligasas
Catalizan la union covalente de dos
molculas, acoplada con un enlace fosfato
con en el ATP

Determinacin de la constante de
Michaelis (Km) y Vmax
El mtodo ms popular para la medida de
Km es usando el ploteo de LineweaverBurk.
La ecuacin de Michaelis-Menten se
expresa: 1
Km
1

o V max[S] V max

Fig. 1

 Ecuacion de Michaelis y Menten

V max[S]t
dS dP

Km [S]t
dt
dt
medida de la velocidad
Vmax mxima velocidad cuando la enzima esta
saturada con el sustrato
Km = k 1 k 2
es la concentracin del

k1
sustrato a la cual =0.5 Vmax
[S]t es la concentracin del sustrato a un
tiempo t de la reaccin

Mtodo
Lineweaver-Burk

errores a bajas [S]

Factores que efectan la

velocidad de reaccin

enzima
concentracin de sustrato
temperatura
pH
fuerza inica
presencia de activadores y inhibidores

Efecto de la concentracin de la
enzima
La velocidad de la reaccin catalizada
por una enzima va a depender de su
concentracin (Fig)
Se requiere que [S] >> Km y que el
perodo de desaparicin del sustrato o
aparicin del producto sea lineal
La velocidad de la enzima se obtiene
de la pendiente de esta curva

Concentracin de la
enzima

 Cuando se ensaya y se toma una alicuota a

la vez, debe cuidarse de que la velocidad de
reaccin se calcule en la porcin lineal (Fig)
Se pierde la linealidad de la reaccin
Si [S] no esta saturado
Si aumenta la [P] y produce una reaccin
reversible
Si la enzima pierde su actividad durante el ensayo

Cuando no se puede tener [S]>>>Km, debe

entonces plotearse log([So]/[S] vs tiempo, la
pendiente de la recta es directamente
proporcional a la [E]

Determinacin de las velocidades de

reaccin

Efectos ambientales
Temperatura
Efecto de la temperatura en la estabilidad
de la enzima
Efecto de la temperatura en la solubilidad
de los gases que pueden ser productos o
sustratos
Efecto de la temperatura en el pH
Tris (tris[hdroximetilaminometano), pKa
cambia en 0.031 por cada grado Celcius

 En cuanto a estabilidad
a bajas temperaturas la enzima es estable
a mayores temperaturas la enzima se
desnaturaliza (linea 3) (Fig)

Dentro de un rango, un incremento de la

temperatura, aumenta la velocidad de
reaccin (linea 1)
La reaccin enzimatica tiene una temperatura
ptima, y depende de la enzima asi como de
del tipo de sustrato, pH, concentracin de sal,
concentracin del sustrato y tiempo de
reaccin

 La figura anterior puede plotearse de acuerdo a

la ecuacion de Arrhenius:

k AeEa / RT
Ea
log k log A
2.3RT

donde
k= es la constante de velocidad especifica a alguna
temperatura T(K)
Ea= energia de activacion
R= constante de los gases
A = un factor de frecuencia

La pendiente positiva da una medida de la

energa de activacin para la desnaturalizacin
de la enzima

 La pendiente del lado derecho del grfico da

una medida de la Ea para la transformacin
del sustrato a un producto catalizado por la
enzima

pH
Las enzimas tienen un pH ptimo y
comunmente el ploteo de actividad vs pH
tienen forma de campana
esta forma de la curva es el resultado de el
efecto de pH en la estabilidad de la enzima
y puede deberse a cambios en la ionizacin
del sustrato

 Los cambios de pH puede afectar los sitios

activos de la enzima (ionizacin) y la fijacin
del sustrato a la enzima
La actividad de la enzima depende de su
estabilidad y puede ocurrir que el pH de
mxima estabilidad no coincida con el pH de
mxima actividad
Tripsina y quimotripsina son estables a pH 3, pero
tienen su mxima actividad a pH 7-8

Para determinar el ptimo pH de una

reaccin enzimtica se preparan buffers a
diferentes pHs y se determina la actividad de
la enzima