TECNOLOGA ENZIMTICA

Generalidades
Involucra
Produccin
Purificacin
Inmovilizaci
n
Utilizacin
Biocatalizadores:
protenas
con actividad cataltica (enzimas)
o pueden ser cidos nucleicos
(ribosimas).

Biorreactor
es

Sustentos:
Diseo de productos
Procesos innovadores

Clasificacin de las protenas

Composicin de las enzimas

Substrato
Coenzima

Apoenzima
( Porcin
proteica)

Cofactor
( Porcin no
proteica)

Inactiva

Activador

Holoenzima
(Enzima
completa)
Activa

Actividad enzimtica (U)

Medida de la velocidad en la cual un enzima cataliza una reaccin,
midiendo cuantitativamente el consumo de sustrato o el incremento en la
concentracin de producto, en unas condiciones de temperatura, pH y
concentracin de sustrato optimas

V: velocidad.
[S]: concentracin de
sustrato.
[P]: concentracin de
producto.
dt: periodo de
tiempo.

Extraccin, purificacin y caracterizacin de protenas

Animal
Fuentes de
obtencin

Vegetal
Microbia
no

Limitadas:
Inclemencias externas: Clima
Fuente de alimentacin
Variedad de los suelos
otras
Obtencin rpida y controlada en
reactores enzimticos

Clasificacin de las Enzimas segn su extraccin

Fsicos
Intracelulares

Rompimiento
celular

Mtodos

Qumicos
Enzimtico
s

Extracelulares

Separacin de la biomasa con el sobrenadante de la

fermentacin

*Ruptura celular: las esporas >cocos Gram- >levaduras >clulas vegetales

>bacilos Gram+ >micelios > clulas animales

Ruptura celular:

Homogenizacin mecnica

Fsicos

Homogenizacin snica
Homogenizacin trmica

Mtodos

Qumicos

Enzimticos

Homogenizacin por
deshidratacin

Enzimas hidrolizantes

Eleccin del mtodo de ruptura:

Naturaleza y fuente de la enzima (origen animal, vegetal o microbiano:
fngica o bacteriana)
Escala de la operacin (laboratorio, planta piloto o industrial)
Velocidad del mtodo de extraccin
Estabilidad de la enzima
Pureza requerida
Costos del proceso

Purificacin:
Aspectos:
Naturaleza bioqumica (estabilidad y actividad enzimtica)
Utilizacin de la enzima (analtica o industrial)
Complejidad del proceso de purificacin (costos tecnolgicos)
Diseo de una metodologa de purificacin:
Seleccionar factores fsicos-qumicos que se permitan mxima productividad y
menores costos
Avanzar de mtodo de menor a mayor rendimiento y resolucin
Avanzar de mayor a menor capacidad de procesamiento
Aprovechar las condiciones y caractersticas de la muestra al final de cada
paso, para que estas sirvan para la seleccin del prximo
Tcnica de purificacin de protenas:
Separacin por precipitacin (solubilidad diferencial)
Cromatografa por filtracin por gel
Cromatografa por intercambio inico
Cromatografa por afinidad
Ultrafiltracin

Caracterizacin:
Conocimiento de parmetros especficos de una enzima como su peso molecular,
su punto isoelctrico, Vmx., Km entre otros

Parmetros para el anlisis e identificacin de enzimas

Parmetro de una enzima

Anlisis para su identificacin

Punto isoelctrico

Isoelectroenfoque

Peso molecular

Electroforesis SDS-PAGE

Subunidades proteicas

Combinacin
entre
electroforesis
desnaturalizantes y reductoras

Km y Vmx

Ensayos cinticos

Secuencia

Espectrometra de masas

pH, Temperatura, [S] ptimos

Ensayos cinticos

Estabilidad a la temperatura,
Ensayos cinticos
pH, etc.

SDS-PAGE

Cintica enzimtica
Parmetros cinticos:
Constante de Michaelis (Km)
Velocidad maxima (Vmx. )
Linealizacin de la grfica de la relacin: concentracin de sustrato [S] Actividad enzimtica (U):
Linealizacin con Lineweaver Burk: 1/V= (1/V mx. )+ (Km/Vmx. )*(1/S)
Linealizacin Eadie Hofstee: V= Vmx. - Km (V/S)
Linealizacin Langmuir: S/V = (1/Vmx. )*S + (Km/Vmx. )

Clasificacin de las enzimas y ejemplos de enzimas utilizadas en procesos industriales

Tipo de reaccin catalizada

Tipos de
enzimas
representativ
as

Transferencia de electrones, iones

hidruro o tomos de hidrogeno
A + BH2
AH2 + B

Deshidrogenasa
s
Oxidasas
Reductasas
Peroxidasas

Catalasas
Peroxidasas
Glucosa oxidasas

2. Transferasas

Transferencia de grupos orgnicos

funcionales
AX + C
A + CX

Metiltransferasa
s
Aciltransferasas
Aminotransfera
sas
Fosfotransferas
as

Fructosiltransferasa
s
Glucosiltransferasa
s

3. Hidrolasas

Hidrlisis (reacciones de rotura de

enlaces con incorporacin de agua)
AX + H2O
AH + XOH

Esterasas
Peptidasas
Fosfatasas
Glucosidasas

Amilasas
Celulasas
Lipasas
Pectinasas
Proteasas

4. Liasas

Adicin de grupos a dobles enlaces

o formacin de dobles enlaces por
eliminacin de grupos. Rotura de
enlaces sin incorporacin de agua.
XY + C=C
CXCY
XY
X+Y

Descarboxilasas
Aldolasas
Desaminasas
Sintasas

Pectato liasas
-acetolactato
Descarboxilasa

5. Isomerasas

Transferencia de grupos dentro de

molculas para formar ismeros
(reorganizaciones moleculares)
A
B

Isomerasas
Racemasas
Epimerasas
Mutasas

Glucosa isomerasa

Clase de
enzima

1.
Oxidorreductasa
s

Formacin de enlaces en reacciones

Enzimas
industriales
representativas

Inmovilizacin
Proceso por el cual el movimiento de las enzimas, en el espacio, se ve
restringido total o Parcialmente, dando lugar a una forma de enzima insoluble
en agua

Clasificacin:

Caractersticas:

Permiten neutralizacin
Se obtienen productos mas puros
Posibilitan de implementar procesos continuos
Requieren control de Temperatura y pH
Posibilidad de contaminacin
Requieren planta especial

Aplicacin de enzimas inmovilizadas en la fabricacin de jarabes glucosados a partir

del almidn de maz. 1: Tanque de mezcla. 2: Reactor de tanque agitado y
recuperacin por filtracin. 3: Intercambiador de calor. 4: Reactor de tanque agitado y
recuperacin por filtracin. 5: Ultrafiltracin. 6: Evaporador.

Enzimas industriales, usos frecuentes y mercado

Aplicaciones bsicas:
Uso clnico

(i) Procesos industriales, (ii) Procesos analticos y (iii)

Procesos industriales:
Utilizacin:
Industria de Alimentos
Industria Farmacutica
Industria Textil
Industria de Detergentes
Industria del Cuero
Biorremediacin
y
Tratamiento
efluentes

Procesos analticos:

de

Caractersticas:
Uso masivo
Estructura simple
Preferiblemente extracelulares
Estables
Sin
requerimiento
de
cofactores
disociables

Utilizacin:
Incorporacin en lnea del reactor
enzimtico con un aparato analtico
convencional
Inclusin del sistema enzimtico como
parte del sistema analtico
Caractersticas:
Alta especificad
Alta sensibilidad
Alta pureza
Baja estabilidad en condiciones
operacionales
Alto costo

Procesos analticos:
Utilizacin:
Ayuda digestivos
Antiinflamatorios
Antimicrobianos
Tratamiento de enfermedades
Remocin de metabolitos potencialmente txicos
Tratamiento de ciertos tipos de cncer
Otros.