METODO DE CUENTA

TOTAL DE MOHOS Y
LEVADURAS
Montes Daz Elizabeth
Morales Salgado Isaac
Andres
Duran Alvarado Mara
Eugenia
Villada Garca Liliana

10 g. de muestra + 90 ml. de Solucin

salina isotnica al 0.09 %
10 -1

Los tubos contienen 9 ml. de solucin

salina isotnica al 0.09 %

10 -2

10 -3

10 -4

Para la realizacin de disoluciones se

trasladara 1 ml. de dilucin a
dilucin.
10 -5

* A partir de este punto sembrar

0.1 ml. Dilucion en placas
que contienen Agar papa
dextrosa.

Preparacin de soluciones
0.1 ml
10 ml o 10 g de muestra

1ml
10

-1

90 ml SSI

0.1 ml
10-2

1 ml
0.1 ml

Incubar 25 C 2-5 das

10

-3

Contar el numero de
colonias y multiplicarlo por el
inverso de la dilucin
(ufc/gr muestra)

1 ml
10-4

0.1 ml

1 ml
0.1 ml
10

-5

 Solucin salina isotnica.

Efecto conservante

Agar papa dextrosa

Los hidratos de carbono y la infusin de papa favorecen
el crecimiento de levaduras y hongos en tanto que por el
bajo rango de pH , la flora acompaante se reduce
significativamente.
Las caractersticas morfolgicas tpicas de los hongos
se desarrollan muy bien en este medio de cultivo.

Composicin por Litro:

Agar -15g
Dextrosa - 20g
Infusin papa - 4g

MOHOS
El termino moho se suele aplicar para designar a ciertos hongos
filamentosos multicelulares.
Crecen en la superficie de los alimentos.
Tienen un tpico aspecto aterciopelado algodonoso, a veces
pigmentado.

Intervienen en la alteracin de muchos tipos de alimentos.

Son tiles en la elaboracin de ciertos alimentos

La parte principal de su crecimiento suele tener un aspecto blanco,
aunque puede tener colores distintos, color oscuro o color humo.

Caracteres de los cultivos

Algunos mohos tienen una textura laxa y un
aspecto lanoso , mientas que otros son
compactos.
Algunos tienen aspecto aterciopelado en su
superficie libre, el aspecto de otros es seco y
pulverulento, y el de otros es hmedo o
gelatinoso.

 El aspecto del reverso de un moho que crece en

una placa de agar puede ser muy llamativo, por
ejemplo:
El color negro azulado opalescente o el color
negro verdoso de la cara inferior de
Cladosporium.

Moho

LEVADURAS
Aquellos hongos que generalmente no son filamentosos,
sino unicelulares y de forma ovoide o esferoide, y que se
reproducen por gemacin o por fisin.
Se encuentran en los alimentos y estas pueden ser
beneficiosas o perjudiciales.
Beneficiosas: elaboracin de alimentos
Perjudiciales: producen alteraciones

Se caracterizan principalmente en base a sus caracteres

morfolgicos, aunque para el microbilogo de alimentos,
sus propiedades fisiolgicas tienen mayor importancia

Caracteres de los cultivos

Crecimiento en forma de velo en la superficie de
los medios lquidos indica que se trata de una
levadura oxidativa o formadora de velo.
La produccin de un pigmento carotenoide
confirma que la levadura que ha crecido
pertenece al genero Rhodoturola.
El aspecto de crecimiento de los
microorganismos tiene importancia cuando
estos producen un moteado pigmentado en la
superficie de los alimentos

La mayora de las colonias jvenes de

levaduras son hmedas y algo mucosas,
aunque es posible que tengan aspecto
harinoso.
Algunas colonias tienen un color crema o
rosado.
Las levaduras son oxidativas,
fermentativas o bien su actividad
metablica es a la vez de ambos tipos.

 En la superficie de un liquido, las levaduras

oxidativas pueden ser en forma de pelcula, de
velo, o espuma y por ello se denominan
levadura formadoras de pelculas.
El aspecto de crecimiento de los
microorganismos tiene importancia cuando
estos producen un moteado pigmentado en la
superficie de los alimentos
Las levaduras fermentativas suelen crecer en
toda la masa del liquido y producen dixido de
carbono.

Observacin de caractersticas de
mohos
Cortar con un bistur
alrededor de cada colonia

Colocar los fragmentos de

agar separados en el porta
objetos

Observar
el micelio
areo en
microscopio
de diseccin

Transferir parte del micelio a otro porta objetos y observar las estructuras en
un microscopio ptico. Comparar con bibliografa.

IMGENES DE ALGUNOS TIPOS DE MOHOS

Observacin de caractersticas de
levaduras
.

Extensin de la muestra
sobre el portaobjetos

FROTIS

Secado de la preparacin

Extensin de la muestra
con el fin de separa los m.o.

SIMPLE

Fijado o adhesin de las clulas

al portaobjetos
Un solo
colorante

TINCION
DIFERENCIAL

Frotis se cubre con el colorante

Deja actuar (1 5 min.)
Se lava con agua y se seca

Mas de
un colorante

Forma y tipo de
agrupacin de m.o.
Observan estructuras
celulares como endosporas

Por qu azul de metileno para la

tincin?
Tie todas las clulas bacterianas
rpidamente.
No produce un color intenso que
oscurezca los detalles celulares.
til para detectar la presencia de
bacterias en muestras naturales puesto
que la mayor parte del material celular no
se tie.

Seleccionar colonias grandes,

ovaladas aisladas o apiculares.

Adicionado con

Dextrosa

Sembrar
en medio
Wickerham
con campana
de Durham

Adicionado con

Rafinosa

Seleccionar colonias pequeas,

ovaladas agrupadas en micelio ramificado de levaduras apiculares.

Sembrar en
Caldo de extracto
de malta

Medio YM agar
(MALT WICKERHAM)
Composicin :
Agar agar bacteriolgico 15 g
Extracto de levadura 3 g
Extracto de malta 3 g
Peptona 5 g
Glucosa 10 g
Agua c.s p 1000 ml

 Extracto de levadura.
Medio nutritivo empleado para el recuento de
microorganismos en aguas.

Extracto de malta
Medio para la deteccin, aislamiento y
enumeracin de levaduras y mohos

Peptona
Nutre a los M.O para que se multipliquen a gran
velocidad. Se utiliza para estudios de
fermentacin.

OBSERVACIONES
Tubos con:

Dextrosa y Rafinosa
turbidez y produccin de CO2

Fermentacin alcohlica
Extracto de malta
Posible formacin de pelcula superficial de micelio

Desarrollo de levaduras aerobias formadoras

de micelio

Realizan diluciones,
se siembra e incuba
Se cuentan colonias y
se seleccionan en:

Frotis y
Tincin

Hongos

Levaduras

Separan del agar y se observan

al microscopio:
De biseccin y ptico

Siembra

Caldo de extracto de malta

Medio Weckerham
dextrosa

rafinosa

Formacin de pelcula superficial

en el medio
Desarrollo de
levaduras aerobias,
formadoras de micelio

Turbidez
Produccin de CO2
Fermentacin alcohlica