INSTITUTO POLITCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLGICAS

LABORATORIO DE MICROBIOLOGA GENERAL

AISLAMIENTO DE BACTERIAS A PARTIR DE PRODUCTOS BIOLGICOS

EQUIPO 2:
DE JESS QUIROZ CARLOS
GARCA LVAREZ VICTOR FERNANDO

OBJETIVOS
Conocer algunas tcnicas y medios de cultivo
para el aislamiento y cultivo de microorganismos
a partir de productos biolgicos.
Reconocer que tipo de medios son los que se
utilizaron en esta prctica y que componentes de
su formulacin les confieren las caractersticas
presentadas.

INTRODUCCIN
La microbiota normal, flora microbiana normal, o
microbioma humano es el conjunto de microorganismos
que se localizan de manera normal en distintos sitios del
cuerpo humano.
Puede ser definida como los microorganismos que son
frecuentemente encontrados en varias partes del
cuerpo, en individuos sanos.
Esta microbiota normal est en relacin simbitica
comensal con el hospedador, ya que tambin se
obtienen ventajas de ellos tanto como ellos la obtienen
del individuo; estos ayudan en la digestin del alimento,
producen vitaminas y protegen contra la colonizacin de
otros microorganismos que pueden ser patgenos, lo
cual es llamado antagonismo microbiano
ENTRE EL 60 Y 80% DE LOS MICROORGANISMOS DE
NUESTRA MICROBIOTA NO ES CULTIVABLE

FRECUENCIA RELATIVA DE ESPECIES

BACTERIANAS EN LA FLORA FECAL
Rango

Porcentaje

Microorganismo(s)

12.0

7.0

6.5

Bacteroides vulgatus
Fusobacterium
prausnitzi
Bacteroides
adolescentia

6.0

4.5

3.6

Bacteroides
thetaiotaomicron
Eubacterium eligens

3.2

Eubacteriumbioforme

11

2.3

Bacteroides distasonis

28
29
59 - 75

0.7
0.6
0.13

76 - 113

0.06

Bacteroides ovatus
Bacteroides fragilis
Enterococus faecalis
Escherichia coli,
Klebsiella pneumoniaey
otras 37 especies
bacterianas

Ebacterium aerofaciens

CONCEPTOS
IMPORTANTES

AISLAMIENTO
MEDIO DE CULTIVO
MEDIO DE CULTIVO
MEDIO DE CULTIVO
MEDIO DE CULTIVO
MEDIO DE CULTIVO
MEDIO DE CULTIVO
MEDIO DE CULTIVO
MEDIO DE CULTIVO

SIMPLE
RICO
MINIMO
SELECTIVO
DIFERENCIAL
DE TRANSPORTE
DE ENRIQUECIMIENTO

PROCESO
EXPERIMENTAL

AISLAMIENTO DE
BACTERIAS DE MATERIA
FECAL

EMB
MaC
SS

MATERIA
FECAL

INCUBAR A 37C 24-48

H

AISLAMIENTO DE
BACTERIAS DE ORINA

2 ASADAS

MUESTRA DE
ORINA

INCUBAR A 37C 24-48

H

EMB
MaC
BHI
ASM

AISLAMIENTO DE
BACTERIAS DE EXUDADO
FARINGEO Y
NASOFARINGEO

EXUDADO FARINGEO

AGAR
SANGRE
BHI
ASM
INCUBAR A 37C 24-48
H

EXUDADO NASOFARINGEO

AGAR
SANGRE
BHI
ASM
INCUBAR A 37C 24-48
H

MICROORGANISMOS DEL TRACTO RESPIRATORIO

Microorganismo
Ubicacin
Enfermedad
Enterobacteriaceae

Boca, faringe

Moraxella spp.

Nasofringe

Peptostreptococcus
spp.

Boca, amgdalas

Streptococcus
pneumoniae

Boca, amgdalas,
nariz

Torulopsis glabrata

Boca

Neumona, absceso
pulmonar
Conjuntivitis
Gangrena pulmonar,
faringe absceso
pulmonar
Neumona,
conjuntivitis,
meningitis, otitis
Infecciones tracto
urinario

RESULTADO
S

E.M.B (EOSINA-AZUL DE METILENO)

TIPO DE MEDIO DE CULTIVO

FUNDAMENTO

SELECTIVO
Este medio es utilizado para el
aislamiento selectivo de bacilos
Gram negativos de rpido
desarrollo y escasas exigencias
nutricionales. Permite el desarrollo
de todas las especies de la familia
Enterobacteriaceae.

COMPONENTE
DETERMINANTE DEL TIPO
DE MEDIO:

Indicadores de Eosina y Azul de

metileno.

FUENTE DE CARBONO

Sacarosa

CARBOHIDRATO
FERMENTABLE

Lactosa

FACTOR DE CRECIMIENTO

PEPTONA

Eosina Y
de Metileno

Azul

Microorganismos

Tipo de Colonia

Escherichia coli

Verdosas con brillo

metlico y centro
negro azulado

Klebsiella pneumoniae

Mucosas, rosa
prpura, confluentes

Proteus mirabilis

Incoloras

Enterococcus faecalis

Incoloras, pequeas,
puntiformes

Shigella flexneri

Incoloras

Salmonella
typhimurium

Incoloras

Rpida
fermentaci
n de la
lactosa

CARACTERIS
TICA

COLONIA 1

COLONIA 2

COLONIA 3

COLONIA 4

TAMAO

CIRCULAR

CIRCULAR

CIRCULAR

CIRCULAR

FORMA

2 mm

2 mm

10 mm

1mm

COLOR

ROJAS CO
HALO
VERDE
METALICO

TRANSPAREN
TE HALO
METALICO

VIOLETA
INTENSO

VIOLETA

BORDE

ENTERO

ENTERO

ENTERO

ENTERO

SUPERFICIE

LISA

LISA

LISA

GRANULOSA

LUZ
TRANSMITIDA

OPACA

OPACA

OPACA

OPACA

LUZ
REFLEJADA

BRILLANTE

BRILLANTE

BRILLANTE

BRILLANTE

ELEVACION

PLANA

PLANA

PLANA

PLANA

ASPECTO

HMEDA

SECA

SECA

SECA

CONSISTENCI
A

MUCOIDE

MUCOIDE

SUAVE

DURA

EFECTO
SOBRE EL
MEDIO

COLOR
VERDE
ALREDEDOR
DE LA
COLONIA

COLOR
VERDE
ALREDEDOR
DE LA
COLONIA

NO

FERMENTACI
N DE
LACTOSA

TIPO DE
PRUEBA

FECAL

FECAL

FECAL

FECAL

MORFOLOG
IA
MICROSCO
PICA

COLONIA
1

COLONIA 2

COLONIA 3

COLONIA 4

Gram

Negativ
a

Forma

Bacilos

Agrupaci Aisladas n

Esporas

No

MaC (Agar Mac Conkey)

TIPO DE MEDIO DE CULTIVO

FUNDAMENTO

SELECTIVO Y DIFERENCIAL
Este medio se utiliza para el
aislamiento de bacilos Gram
negativos de fcil desarrollo,
aerobios y anaerobios facultativos.
Permite diferenciar bacterias que
utilizan o no, lactosa en muestras
clnicas, de agua y alimentos.

COMPONENTE
DETERMINANTE DEL TIPO
DE MEDIO:

Diferencial: Lactosa
Selectivo: mezcla de sales biliares
y el cristal violeta

COMPONENTE QUE
PROMUEVE EL
DESARROLLO BACTERIANO

PEPTONA

INDICADOR DE pH

ROJO NEUTRO
6.8 ROJO
Si la lactosa es fermentada8.0
las AMARILLO
colonias
se observarn de color rosado

Microorganismos

Colonias

Escherichia coli

Rojas con
halo turbio

Klebsiella
pneumoniae

Rosadas
mucosas

Salmonella
typhimurium

Incoloras,
transparente
s

Shigella flexneri

Incoloras,
transparente
s

Proteus mirabilis

Incoloras,
transparente
s

Enterococcus
faecalis

Diminutas,
incoloras,
opacas

CARACTERIST
ICA

COLONIA 1

COLONIA 2

COLONIA 3

TAMAO

3 mm

5 mm

FORMA

CIRCULAR

CIRCULAR

AMIBOIDE

IRREGULAR

COLOR

ROSA

ROSA

MORADO

NARANJA

BORDE

ENTERO

ENTERO

ENTERO

ONDULADO

SUPERFICIE

FILAMENTOS
A

LISA

GRANULAR

GRANULAR

LUZ
TRANSMITIDA

TRASLUCIDA

TRASLUCIDA

TRASLUCIDA

OPACA

LUZ REFLEJADA

BRILLANTE

BRILLANTE

BRILLANTE

MATE

ELEVACION

PLANA

PLANA

C. PALPILADA

PLANA

ASPECTO

HMEDO

HMEDO

HMEDO

SECA

CONSISTENCIA

SUAVE

MUCOIDE

MUCOIDE

DURA

EFECTO SOBRE
EL MEDIO

COLOR ROSA
ALREDEDOR
DE LA
COLONIA

COLOR ROSA
ALREDEDOR
DE LA
COLONIA

ACIDIFICACI
N

SIN

TIPO DE
PRUEBA

ORINA

ORINA

FECAL

ORINA

EQUIPO

4
LAB 4

2
LAB 4

3
LAB 3

5
LAB 4

8mm

COLONIA 4
8 mm

MORFOLOGI
A
MICROSCOP
ICA

COLONIA
1

Gram

COLONIA 2

COLONIA 3

COLONIA 4

Negativa Negativa

Forma

Cocos

Bacilos

Agrupaci
n

Racimos

Aisladas

Esporas

no

No

Agar Salmonella-Shigella(SS)
TIPO DE MEDIO DE CULTIVO

FUNDAMENTO

SELECTIVO Y DIFERENCIAL
Medio de cultivo utilizado para el
aislamiento de Salmonella spp. y
de algunas especies de Shigella
spp. a partir de heces, alimentos y
otros materiales en los cuales se
sospeche su presencia. Aparte de
la fermentacin se puede ver
formacin de cido sulfhdrico a
partir del tiosulfato de sodio.

COMPONENTE
DETERMINANTE DEL TIPO
DE MEDIO:

Diferencial: Lactosa
Selectivo:sales biliares y el verde
brillante

INDICADOR DE pH

ROJO NEUTRO
6.8 ROJO
8.0 AMARILLO

Microorganismos

Colonias

Salmonella
typhimurium

Transparentes,
centro negro

Shigella flexneri

Incoloras

Shigella sonnei

Incoloras

Proteus mirabilis

Transparentes,
centro negro

Escherichia coli

Rosadas a rojas

Klebsiella pneumoniae

Rosadas cremosas
y mucosas

Enterococcus faecalis

Incoloras, de muy
escaso crecimiento

CARACTERIS
TICA

COLONIA 1

COLONIA
2

COLONIA 3

TAMAO

5 mm

1 mm

3mm

FORMA

FILAMENTOSA

IRREGULA
R

CIRCULAR

COLOR

NEGRO

ROSA

ROSA

BORDE

FIMBRIADO

LOBULAD
O

ENTERO

SUPERFICIE

ARBORESCENT
E

LISA

LISA

LUZ
TRANSMITIDA

OPACA

TRASLUCI
DA

OPACA

LUZ
REFLEJADA

BRILLANTE

BRILLANT
E

MATE

ELEVACION

UMBONADA

CONVEXA

PLANA

ASPECTO

HMEDO

HMEDO

HMEDO

CONSISTENCI
A

DURA

MUCOIDE

SUAVE

EFECTO
SOBRE EL
MEDIO

VIRE ROJO
ALREDEDOR

NO

NO

EQUIPO

5
LAB 3

4
LAB 4

3
LAB 4

BHI (BRAIN HEART INFUSION)

TIPO DE MEDIO DE CULTIVO

RICO

USO

Es un medio slido muy apropiado

para el cultivo de bacterias y
hongos, incluyendo los de difcil
desarrollo , ya que es un medio
muy rico en nutrientes, que
proporciona un adecuado
desarrollo microbiano.

COMPONENTE
DETERMINANTE DEL TIPO
DE MEDIO:

Composicin en si

FUENTE DE CARBONO

PEPTONA

AZUCAR FERMENTABLE

GLUCOSA

 Streptococcus pneumoniae ( Crecimiento de

bueno a excelente)
Trichophyton mentagrophytes (Crecimiento de
bueno a excelente)
Candida albicans (Crecimiento de bueno a
excelente)
Listeria monocytogenes (Crecimiento de bueno a
excelente)
Shigella flexneri (Crecimiento de bueno a
excelente)

CARACTERISTI
CA

COLONIA 1

COLONIA 2

COLONIA 3

COLONIA 4

TAMAO

3mm

4mm

2mm

8mm

FORMA

FUSIFORME

CIRCULAR

CIRCULAR

IRREGULAR

COLOR

BLANCO

BLANCO

AMARILLO

BLACO
AMARILLENTO

BORDE

ENTERO

ENTERO

ENTERO

ENTERO

SUPERFICIE

LISA

LISA

LISA

LIGERAMENTE
GRANULAR

LUZ
TRANSMITIDA

TRASLUCIDA

TRASLUCIDA

OPACA

OPACA

LUZ REFLEJADA

BRILLANTE

MATE

MATE

MATE

ELEVACION

CRATERIFORME

CONVEXA
PLANA

PLANA

PLANA

ASPECTO

HMEDO

HMEDO

HMEDO

HMEDO

CONSISTENCIA

MUCOIDE

MUCOIDE

SUAVE

BUTIROSA

EFECTO SOBRE
EL MEDIO

NO

NO

NO

NO

TIPO DE PRUEBA

ORINA

EXUDADO
NASOFARINGE
O

ORINA

EXUDADO
FARINGEO

EQUIPO

2
LAB 4

3
LAB 4

1
LAB 4

5
LAB 4

MORFOLOGI
A
MICROSCOP
ICA

COLONIA
1

Gram

COLONIA 2

COLONIA 3

COLONIA 4

Negativa Negativa

Forma

Cocos

Bacilos

Agrupaci
n

Racimos

Aisladas

Esporas

no

No

AGAR MANITOL SALADO

TIPO DE MEDIO DE CULTIVO

USO

COMPONENTE
DETERMINANTE DEL TIPO
DE MEDIO:

INDICADOR DE pH

SELECTIVO Y DIFERENCIAL
Utilizado para el aislamiento y
diferenciacin de Staphylococcus.
Es recomendado para el
aislamiento de Staphylococcus
patognicos.
Diferencial: NaCl (altas
concentraciones)
Selectivo:alta concentracin
salina
Rojo Fenol
pH 6.8(amarillo) Fermentacin de
Manitol
pH 7.4 (anaranjado)
pH 8.4(rojo)

Microorganismos

Crecimien
to

Caractersticas de
las colonias

Staphylococcus
aureus

Excelente

Amarilla

Staphylococcus
epidermidis

Bueno

Roja

Escherichia coli

Inhibido

Inhibido

Klebsiella
pneumoniae

Inhibido

Inhibido

TIPO DE MICROORGANISMO

OBSERVACIN

FERMENTADORES DE MANITOL

HALO AMARILLO ALREDEDOR

DE LA COLONIA

NO FERMENTADORES DE
MANITOL

HALO ROJIZO ALREDEDOR DE

LA COLONIA

CARACTERISTI
CA

COLONIA 1

COLONIA 2

COLONIA 3

COLONIA 4

TAMAO

2 mm

3mm

1mm

2mm

FORMA

CIRCULAR

CIRCULAR

CIRCULAR

CIRCULAR

COLOR

BLANCO

ROSA

AMARRILLO

AMARILLO

BORDE

CILIADA

ENTERO

FILAMENTOSO

ENTERO

SUPERFICIE

LISA

LISA

LISA

LISA

LUZ
TRANSMITIDA

TRANSLUCIDA

OPACO

OPACO

TRASLUCIDA

LUZ REFLEJADA

BRILLANTE

MATE

BRILLANTE

BRILLANTE

ELEVACION

PLANA

PLANA

CONVEXA

ASPECTO

CONVEXA
PLANA
HMEDO

HMEDO

HMEDO

HMEDO

CONSISTENCIA

SUAVE

SUAVE

MUCOIDE

MUCOIDE

EFECTO SOBRE
EL MEDIO

CAMBIO A
AMARILLO

NINGUNO

NINGUNO

ACIDIFICACIN

TIPO DE PRUEBA

EXUDADO
NASOFARINGE
O

FECAL

EQUIPO

2
LAB 4

3
LAB 4

1
LAB 3

3
LAB 3

MORFOLOGI
A
MICROSCOP
ICA

COLONIA
1

COLONIA 2

COLONIA 3

COLONIA 4

Gram

Positiva

Forma

Cocos

Agrupaci
n

Cadenas

Esporas

no

AGAR SANGRE
TIPO DE MEDIO DE CULTIVO

USO

COMPONENTE
DETERMINANTE DEL TIPO
DE MEDIO:

ENRIQUECIDO Y DIFERENCIAL
Medio de cultivo utilizado para el
aislamiento de numerosos
microorganismos. Al ser
suplementado con sangre ovina,
permite el crecimiento de
microorganismos nutricionalmente
exigentes y la clara visualizacin
de reacciones de hemlisis.
sangre ovina desfibrinada

TIPO DE HEMLISIS

OBSEVACIONES

ALFA O HEMLISIS PARCIAL

Se observa un halo de color

verdoso alrededor de la colonia
en estudio.

BETA O HEMLISIS TOTAL

Se observa un halo claro,

brillante alrededor de la
colonia en estudio

GAMA O SIN HEMLISIS

El medio de cultivo no presenta

modificaciones de color y
aspecto alrededor de la colonia
en estudio.

ALFA

BETA

GAMA

CARACTERISTI
CA

COLONIA 1

COLONIA 2

COLONIA 3

COLONIA 4

TAMAO

2,5 mm

2 mm

1mm

6mm

FORMA

CIRCULAR

CIRCULAR

CIRCULAR

CIRCULAR

COLOR

BLANCO

GRIS

BLANCO

GRIS

BORDE

ENTERO

ENTERA

ENTERO

ENTERO

SUPERFICIE

LISA

LISA

LISO

LISO

LUZ
TRANSMITIDA

OPACA

TRASLUCIDA

OPACA

TRASLUCIDA

LUZ REFLEJADA

BRILLANTE

MATE

MATE

BRILLANTE

ELEVACION

PLANA

CONVEXA
PLANA

CONVEXA

CONVEXA
PLANA

ASPECTO

HMEDO

HMEDO

HMEDO

HMEDO

CONSISTENCIA

MUCOIDE

MUCOIDE

SUAVE

SUAVE

EFECTO SOBRE
EL MEDIO

NO

NO

HALO
AMARILLO

NO

TIPO DE
HEMLISIS

GAMA

GAMMA

BETA

GAMMA

EQUIPO

1
LAB 3

3
LAB 4

5
LAB 3

4
LAB 4

MORFOLOGI
A
MICROSCOP
ICA

COLONIA
1

Gram

COLONIA 2

COLONIA 3

COLONIA 4

Negativo -

Negativo

Positivo

Forma

Cocos

Cocos

Cocos

Agrupaci
n

Racimos

Racimos

Racimos

Esporas

no

no

no

Cuestionario
Tienen alguna importancia para su carrera o desarrollo profesional estas
tcnicas?
Las enterobacterias son un buen indicador de contaminacin en
alimentos procesados que han sufrido un tratamiento que elimine la flora
microbiana vegetativa.
Escherichia coli
Esta enterobacteria es un buen indicador de contaminacin fecal y de
presencia de microorganismos patgenos.
Salmonela
Esta enterobacteria es un buen indicador de contaminacin fecal del
canal bovino, porcino y aves de corral, y del control de la bioseguridad en
las granjas.
Qu carctersticas en comn tienen los medios de cultivo usados para
cada muestra?Porque cree que se seleccionaron en particular cada
muestra?
Identificacin de microorganismos de la microbiota normal, componente
en comn peptona y entre algunos se puede notar la fermentacin de la
Lactosa.
Por la cantidad de microorganismos que contienen y la facilidad en su
obtencin.

Conclusiones
Mediante los medios EMB y MacConkey se
lograron obtener microorganismos capaces de
fermentar Lactosa, as entre estos identificar la
bacteria E. coli.
En el medio de Gelosa Sangre se diferenci los
tipos de hemlisis beta y gamma.
Se comprendi el fundamento de cada medio,
saber para que microorganismos se pueden
ocupar y obtener un diagnstico sobre las
bacterias que se generan en el cuerpo humano.

BIBLIOGRAFIA
http://
www.juntadeandalucia.es/averroes/iesvicen/depart/bi
olog/pdf/p21.pdf
Fundamentos de fisiologa gastrointestinal
Escrito por Thomas J. Sernka, Eugene D. Jacobson
http://
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http://
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BritaniaLab
Murray PR, EJ, MA, Tenover FC. Yonken RH (editores).
Manual of Clinical Microbiology, 6a edicin. American
Society for Microbiology, Washington, DC 1995.
Shaechter M, Medoff G, Eisenstein BI (editores).
Mechanisms of MicrobiaDisease. 2a edicin. Williams

SUERTE EN SU
EXAMEN