CRECIMIENTO

MICROBIANO
CAPITULO 9

CRECIMIENTO CELULAR
Es el aumento en la cantidad de constituyentes y estructuras
celulares. En ausencia de divisin celular, el crecimiento
implica aumento en el tamao y peso de la clula, y cuando el
crecimiento es seguido de divisin celular hay un aumento en
el nmero de clulas.
Se toma como base el crecimiento de bacterias (se puede
extender a levaduras y hongos).
El crecimiento de una poblacin resulta de la suma de los
ciclos celulares de todos los individuos de dicha poblacin.
Ciclo celular : proceso de desarrollo de una bacteria aislada.

CRECIMIENTO CELULAR
Los microorganismos en un medio de cultivo apropiado, se
dividen empleando los nutrientes que le aporta el medio de
cultivo para producir nuevos microorganismos.
Este proceso contina hasta que algn nutriente del medio de
cultivo se agota (sustrato limitante) y el crecimiento se detiene.
Tambin puede detenerse el crecimiento por acumulacin de
alguna substancia inhibidora formada por los mismos
microorganismos
Hay tres aspectos determinantes del crecimiento microbiano:
Los factores del crecimiento.
El estequiomtrico, por el cual la concentracin final de
microorganismos obtenidos depender de la concentracin
y composicin del medio de cultivo
El cintico, que indica la velocidad del proceso.

1.- FACTORES DEL

CRECIMIENTO
MICROBIANO
1.1.- REQUERIMIENTOS
FISICOS

Temperatura
pH
Actividad de Agua
Presin Osmtica

1.a.- Temperatura
Cada microorganismo prefiere una T de desarrollo.
Temperatura mnima, por debajo ella que no hay
crecimiento
Temperatura ptima a la que la velocidad es mxima.
El incremento de la velocidad de crecimiento con la
temperatura se debe al incremento generalizado de la
velocidad de las reacciones enzimticas con la
temperatura.
La falta de crecimiento a temperaturas muy bajas se
debe a:
Reduccin en la velocidad de reaccin (segn leyes
cinticas)
Cambio de estado de los lpidos. (aumento de viscosidad)
. Temperatura mxima por encima de ella no hay
crecimiento

Tipos microbianos
Sicrfilos: -5 20C, ptimo < 15oC
organismos marinos, algas: Chlamydomonas nivalis (nieve
rosada), bacterias: Pseudomonas, Flavobacterium
membrana con alto % de c. grasos insaturados
Sicrtrofos 0-35C, ptimo 20-30oC
Pseudomonas - crecen en el refrigerador
( psicrtrofos son mesfilos que pueden crecer a temperaturas
bajas,es importante desde el punto de vista aplicado porque
cuando se encuentran contaminando alimentos, son capaces de
crecer en condiciones de refrigeracin (4 - 8C) y de producir
infecciones en los consumidores del alimento (30 - 35 C).
Mesfilos 15-45 C, ptimo: 30-40C
Mayora de los m.o (del suelo, aguas, patgenos)
Termfilos 40-70C, ptimo de 55-65oC Tienen membrana con
alto % de cidos grasos saturados, y enzimas estables al calor
Bacillus stearothermophilus, (compostaje)
Hipertermfilos 80-113C, ptimo > 90o Pyrococcus,
Pyrodictium (aguas termales)

1.b.- pH
El pH interno en la mayora de m.o. est en 6.0 a 7.0.
Los rangos de pH tolerables son distintos.
Hay microorganismos acidfilos que pueden vivir a
pH=1.0 y alcalfilos que toleran pH=10.0
Como consecuencia del metabolismo, el pH del medio
de crecimiento suele bajar.
La bajada del pH del
medio que producen
ciertos microorganismos
les confiere una
ventaja selectiva
frente a otros
microorganismos
competidores.
Ejplo. Bacterias
lcticas. Reducen el pH
del medio a 4.5.
Los cidos orgnicos de
cadena corta son

pH extremos.
Arthrospira platensis es una cianobacteria filamentosa,
habitante de lagos alcalinos.
Se usa en la produccin de aminocidos esenciales,
vitaminas, pigmentos naturales y cidos grasos esenciales.
til como recurso alimenticio, esta cianobacteria se ha
propuesto como alternativa en tratamientos frente a la
malnutricin.
Muchos acidfilos han desarrollado mecanismos para
consumir protones en el espacio intracelular, para mantener
el citoplasma cerca de pH neutro. Por lo tanto, las protenas
intracelulares no necesitan desarrollar la estabilidad cida.
Otros acidfilos, como Acetobacter aceti, tienen un
citoplasma acidificado y protenas con estabilidad cida.
En la mayora de protenas cido estables (como la pepsina
y la soxF de Sulfolobus acidocaldarius), hay sobreabundancia
de residuos cidos que minimiza la desestabilizacin
inducida por una acumulacin de carga positiva.

1.c.- Disponibilidad del

agua
El agua es el componente
principal de las
clulas, por lo tanto un suministro de agua
adecuado es indispensable para lograr el
mantenimiento y crecimiento microbiano.
Tambin el agua es el medio de transporte de los
sustratos (o contaminantes) hacia el interior de las
clulas, y de los compuestos que se producen dentro
de la clula.
Los microorganismos necesitan presencia de agua,
en forma disponible, para crecer y llevar a cabo sus
funciones metablicas.
La disponibilidad de agua se mide con actividad de
agua (aw).

Actividad del agua. (aw)

Relacin entre la presin de vapor de agua del
medio (P) y la presin de vapor del agua pura (Po).

Algunas molculas del agua se orientan en torno a

las molculas del soluto y otras quedan
absorbidas por componentes insolubles de las
soluciones. En ambos casos, el agua queda en una
forma menos reactiva.
Estas contribuyen menos a la presin de vapor del
medio

Actividad del agua y Presin

Laosmtica
presin osmtica est
relacionada con la aw a travs de la
expresin

V . = R . T . Ln.aw

donde
R es la constante de los gases,
T la temperatura absoluta,
la presin osmtica,
V el volumen molar parcial del agua
Puede definirse como la presin que
se debe aplicar a una solucin para
detener el flujo neto de disolvente a
travs de una membrana
semipermeable.
La Presin osmtica alta, causa
prdida de agua y plasmlisis
celular.

Efectos de la presin osmtica

Los valores mnimos: bacterias aw > 0.90, levaduras aw
> 0.85, hongos filamentosos aw > 0.80.
La utilizacin de almbares, salmueras y salazones reduce
la actividad de agua de los alimentos, y permite su
conservacin. (ejemplo mermeladas, leche condensada, etc)
Halfitos.
El agua de mar tiene una concentracin del 3%. Los m.o.
halfilos: requieren condiciones salinas:
Discretamente halfilo (1-6%),
Moderadamente halfilo (6-15%),
Halfilos extremos (15-30%)
La principal estrategia de los m.o. halfilos para adaptarse
al estrs osmtico se basa en la acumulacin de
compuestos en el citoplasma para compensar la presin
osmtica externa. Estos compuestos pueden ser inicos o
no inicos.

Ejemplo del Mar muerto

La salinidad promedio del agua de los ocanos est
entre 3,13,8%, en Mar muerto es 28%.
Son aguas ricas en calcio, magnesio, potasio y
bromo, y relativamente pobres en sodio, sulfatos y
carbonatos.
All solo viven microorganismos halfilos: un
protozoo ciliado, algunas algas y bacterias de los
gneros Flavobacterium, Halococcus y
Halobacterium, y las artemias.
Debido a la elevada densidad de sus aguas (1240
kg/m) una persona puede flotar, debido al empuje
superior a la del mar (1027 kg/m)

Principales mecanismos de
resistencia al estrs osmtico
El primero, denominado salt-in es tpico de Arqueas
y Haloanaerobiales, que acumulan en su citoplasma
iones K+ y Cl-. El aumento en la concentracin de KCl en el
citoplasma conlleva a una adaptacin a las altas
concentraciones salinas de todas las protenas y otros
componentes celulares como los ribosomas.
El segundo mecanismo llamado salt out, es el que
utilizan las bacterias tanto halfilas y no halfilas, y
las arqueas metangenas halfilas moderadas, que
en respuesta al estrs osmtico, acumulan en su
citoplasma compuestos orgnicos de bajo peso
molecular (solutos compatibles: aminocidos, azcares,
glicina betana, ectona e hidroxiectona) para lograr
equilibrio osmtico sin interferir con el metabolismo celular.

Principales halotolerantes
Bacterias: gneros: Halomonas, Delega, Volcaniella,
Flavobacterium, Paracoccus, Pseudomonas, Halovibrio y
Chromobacterium.
Arqueas: son de seis gneros principales, cuatro incluyen
los que crecen a pH neutro: Halobacterium, Haloferax,
Haloarcula y Halococcus. Dos requieren condiciones
alcalinas, Natronobacterium y Natronococcus.
La especies mas estudiadas:
Halobacterium halobium, se adapta a la salinidad y
escasez de oxgeno, desarrollando una protena en la
membrana (bacteriorodopsina; color prpura), su capacidad
de reaccionar ante la luz crea un gradiente protnico en la
membrana, y permite la sntesis del ATP, al importar iones
potasio o exportar los de sodio;
Halobacterium salinarum, concentra cloruro de potasio
en su interior para evitar la deshidratacin, su crecimiento
ptimo se da a 50C, un pH 7.2 y concentraciones de NaCl
de 3.5 a 4.3 M.

2.- FORMAS DE CULTIVO

Las fermentaciones, pueden clasificarse en: continua,
semicontinua o intermitente.
a.- PROCESO INTERMITENTE. Fermentacin Batch.
Se refiere al crecimiento de clulas en sistema cerrado.
Una vez cargada la masa inicial del medio, no hay adiciones
o retiros posteriores de nutrientes hasta el fin de la
fermentacin.
Consecuencia: Varan el pH, temperatura y la
concentracin de nutrientes con el tiempo.

CICLO DE CRECIMIENTO MICROBIANO.

El crecimiento no es lineal y sigue un patrn

Crecimiento microbiano en medio

lquido

Fase lag. Adaptacin al nuevo ambiente.

Fase exponencial (log) - velocidad mxima de
crecimiento bajo condiciones particulares.
Fase estacionaria - sin crecimiento neto, vc=0.
vc=vm
(vel. crecimiento = vel de muerte), por
nutrientes limitantes, acumulacin de desechos,
inhibicin del crecimiento
Fase de muerte. velocidad de muerte celular >
velocidad de divisin celular

Fase de latencia
Cuando se introduce un inoculo en medio fresco, el
crecimiento usualmente no comienza de inmediato sino
despus de un tiempo llamado de latencia.
En este periodo de transicin los microorganismos,
producen las enzimas necesarias para aprovechar
un nuevo medio ambiente.
En esta fase no hay incremento en el nmero de clulas,
pero hay actividad metablica, aumento en el tamao
individual de las clulas, en el contenido proteico, ADN y
peso seco de las clulas.
Si un cultivo que est creciendo en fase exponencial es
inoculado al mismo medio de cultivo bajo las mismas
condiciones de crecimiento, no se observa fase de latencia
y el crecimiento exponencial sigue a la misma velocidad.
Si una poblacin se transfiere de un medio de cultivo rico
a un medio pobre, se observa latencia porque las clulas
para poder seguir creciendo deben tener las enzimas
necesarias para sintetizar algunos metabolitos esenciales
que no estn presentes en el medio.

Fase exponencial o fase

logartmica
Es el perodo en el cual, cada vez que pasa un
tiempo de generacin la poblacin microbiana se
duplica. La velocidad de crecimiento es mxima.

Fase estacionaria
En esta fase ocurre simultneamente, reproduccin
y muerte celular.
Las limitaciones del crecimiento ocurren por:
agotamiento de algn nutriente esencial, por
acumulacin de productos txicos, o por una
combinacin de las causas anteriores.

Fase de muerte
Ocurre una disminucin progresiva en el nmero de
clulas viables.
velocidad de muerte celular > velocidad de divisin
celular

Manejo industrial.
Normalmente, la fase de retardo no es deseable, por
que se pierde tiempo y acarrea prdidas econmicas
Para minimizar la fase, se hace crecer el inculo
aparte, en un medio de cultivo igual al que se va a
emplear en el bioproceso (cultivo o fermentacin) y
luego se procede a transferirlo cuando las clulas ya
se encuentran en la fase exponencial (inoculacin).

Ventajas y Desventajas del proceso

batch.
Su mayor ventaja es la sencillez.
Desventajas: alto requerimiento de mano de
obra, y demasiados tiempos muertos.
Tiempos muertos: Fase de adaptacin, fase de
decaimiento, periodo de descarga, y renovacin de la
carga del reactor para un nuevo batch.

Proceso semicontinuo
Se evitan las fases de adaptacin y decaimiento.
Peridicamente se extrae medio agotado y se repone
medio fresco.

Criterios:
mantener la concentracin de sustrato
suficientemente alta para evitar escases.
la concentracin del producto suficientemente baja
para no sobrepasar los lmites tolerables.

Proceso semicontinuo
Los parmetros a controlar: volumen y tiempo de adicin,
se calculan de modo que el cultivo se mantenga en fase
logartmica.
Si el volumen extrado es muy grande puede diluirse el
medio, tanto que la masa microbiana puede volver a la fase
de acostumbramiento.
Si el volumen extrado es muy pequeo para igual tiempo el
cultivo puede agotarse y pasar a la fase estacionaria.
Si el tiempo de renovacin es muy grande el cultivo puede
alcanzar a la fase estacionaria y si es muy pequeo el cultivo
puede regresar a la fase de acostumbramiento.
Una vez alcanzada la concentracin X de clulas en la fase
exponencial, se extrae un volumen igual a: V= ( X - Xo) d.
Luego se agrega igual cantidad de medio nuevo, diluyendo el
producto y las clulas hasta un valor Xo.

PROCESO EN CULTIVO CONTINUO

Se usan dos elementos de control:

la velocidad de dilucin
(turbidostato) y la concentracin
del nutriente limitante (C o N),
(quimiostato)
La densidad de la poblacin est
controlada por la concentracin
del nutriente limitante.
Los dems nutrientes en el
medio se encuentran en exceso.
Los parmetros a tener en cuenta
son:
f (ml/h);
volumen del reactor (ml);
densidad celular (x);
factor de dilucin D=f/v (h -1)
Si el coeficiente de crecimiento
(m) se hace igual al factor de
dilucin (D), entonces dx/dt=0,
por tanto la cc de las clulas se hace
constante (x=x) y el cultivo se
encuentra en estado dinmico de
equilibrio.

Control por
quimiostato

3.- DETERMINACION DE LA
CONCENTRACION CELULAR
Existen diversos mtodos, con diferentes propuestas
de clasificacin.
Se pueden agrupar en dos:
mtodos directos y
mtodos indirectos.
Directos obtienen una medida de la masa celular
por:
Tcnicas de conteo,
Medida de concentracin de masa celular: peso
celular, absorbancia.
Indirectos miden la concentracin de algn
componente celular (ADN, protenas, etc).

a. Conteo celular
Se cuentan directamente las clulas, determinando la
masa celular por unidad de volumen.
En el mtodo la suspensin de la muestra se coloca en una
cavidad cuadriculada de dimensiones conocidas, y se tapa con
el cubre objetos. Como se conoce el rea de las cuadrculas y
la altura de la cmara de recuento, el volumen ocupado por la
suspensin en cada cuadrculas queda determinado.
Para obtener el nmero de bacterias por mililitro de
suspensin, se requiere contar el nmero de microorganismos
en varias cuadriculas, calcular el promedio de recuento por
cuadrcula y multiplicar este promedio por el factor
correspondiente.
Estos mtodos presentan algunas limitaciones:
- No se pueden distinguir clulas vivas de clulas
muertas.
-Las clulas muy pequeas son difciles de contar.
-La precisin es difcil de lograr
-El mtodo no es adecuado para suspensiones
celulares de baja densidad, es decir las soluciones
deben contener aproximadamente 10 7 clulas/mL o
ms.

Cmaras de recuento
Existen cmaras especificas como: Cmaras de Neubauer,
Cmara de Petroff-Hausser, el hemocitmetro, Microscopio
graduado de Helber, etc.
Cmara de Neubauer.
Esta cmara est adaptada al microscopio de campo claro
o al de contraste de fases
. Se trata de un portaobjetos que tiene dos zonas
ligeramente deprimidas en cuyo fondo se ha marcado con
la ayuda de un diamante una cuadrcula de dimensiones
conocidas.
Se cubre la cmara con un cubreobjetos que se adhiere
por simple tensin superficial (en especial una vez que se
haya aadido la muestra lquida).

Cuadrado de 3 x 3 mm.
El rea sombreada y marcada L
es 1 mm2.
La depresin tiene 0.1 mm de
profundidad.
El volumen de la superficie L,
bajo el cubreobjetos es de 0.1
mm3 (0.1 microlitro)
Los cuadrados L estn
subdivididos en 16 cuadraditos
de 0,0025 mm2 cada uno.
El cuadrado del centro est
dividido en 5 cuadrados por lado
con una longitud lateral de 0,2
mm, y superficie de 0,04 mm2.
Al contar las cuatro reas
sombreadas (L), si hay un total
de x clulas entre las cuatro
reas, la concentracin en la
suspensin celular ser :
clulas / mL = 10000 (x/4)

Cmara de
Neubauer

Tcnica de conteo
Para que las clulas, no
se cuenten dos veces,
reglas:
-Se cuentan las clulas
dentro de la zona
definida.
- Tambin se cuentan las
clulas, que se apoyan o
tocan en dos caras , p.ej.
en la lnea de medida
izquierda y superior.

Observaciones sobre el recuento

a) En los conteos de cmaras, el diafragma del condensador
en el microscopio deber estar cerrado en gran parte.
b) El valor medio de los conteos se aplica luego en una
frmula de clculo o se multiplica por el factor
correspondiente.

Cmara PetroffHausser

El retculo del fondo est

dividido en 25 cuadrados
grandes
Cada cuadrado grande
tiene 16 cuadraditos
Volumen de la cmara=
0,02 mm3
rea de la cmara 1 mm2

Determinacin de la concentracin
celular

Calculo del numero de clulas/ ml

Clculo del nmero de

clulas por mL de muestra:
Se observan 12 clulas.
12 x 25 = 300 (nmero de
clulas en 0,02 mm3).
300 x 50= 15000 (nmero
de clulas en 1 mm3)
150000 x 1000 = 1,5 x 107
(nmero de clulas en 1 mL)

Cmara de conteo SEDGEWICK

RAFTER

Es una cmara graduada de 50 x 20 x 1 mm (= 1 cm).

La cmara de conteo tiene 1 mm de profundidad. El rea total es
de 1000 mm2 y el volumen de 1000 mm3 o 1 ml.
Consiste en un marco de cermica rectangular. Posee un grabado
de 1000 cuadrados y est cubierto por un cubreobjetos espeso.
Esta diseada para contar plancton en un microscopio compuesto
o en un microscopio invertido,
medicin cuantitativa del nmero exacto de partculas en un
volumen preciso de un fluido.

b) Equipos automticos
"Cell Coulter" de Beckman-Coulter
Se basa en medir los cambios en la
resistencia elctrica que se producen
cuando una partcula no conductora en
suspensin en un electrolito atraviesa un
pequeo orificio.
El contador consta de dos cmaras
separadas por un material no conductor,
en el que hay un orificio de tamao similar
al de las clulas.
Cada cmara contiene un electrodo, la
suspensin de clulas a ser contadas se
coloca en una de las cmaras y se aplica
presin para que las clulas pasen a la
otra cmara a travs del orificio, cada vez
que una clula pasa a travs del orificio
ocasiona un cambio en la conductividad
elctrica que es registrado por un
dispositivo electrnico y de esta manera el
contador indica el nmero de clulas en
esa suspensin.

Cell Coulter :Ventajas y

desventajas
Es posible contar y medir varios miles de
partculas por segundo, independientemente
de su forma, color y densidad.
Las limitaciones de este mtodo son:
- Se cuentan clulas vivas y muertas.
- Las suspensiones deben estar libres de
partculas diferentes a los microorganismos
que se cuentan, por que el aparato no puede
distinguir entre una u otra.

c.- Conteo de clulas viables

En los mtodos anteriores se determina el
nmero de clulas totales, pero en muchos
casos nicamente interesa contar clulas
viables. (clula que es capaz de dividirse y
forma una progenie)
La manera usual de hacer este conteo es
determinando el nmero de clulas en la
muestra, capaces de formar colonias sobre
un medio de cultivo slido (agar) y esto se
conoce como recuento en placa.

c.1.- Conteo en
placas.
En este procedimiento
se realizan diluciones
seriadas de la muestra
Se inoculan pequeos
volmenes conocidos,
de cada dilucin, en
placas de Petri con un
medio slido adecuado
y se extiende con una
varilla de vidrio
Luego las placas se
incuban en las
condiciones optimas
hasta que aparezcan
las colonias que son
fcilmente contables.

c.1.- Conteo en placas.

Se asume que cada colonia ha sido formada por una
nica clula del medio de cultivo original. Esta
suposicin puede subestimar la densidad de poblacin.
Las clulas son entonces medidas como unidades
formadoras de colonia UFC.
Para realizar el recuento se seleccionan las placas de
la que contengan entre 25 y 250 colonias.

c.1.- Conteo en placas.: Ejemplo.

En un recuento en placa, se hacen diluciones seriadas con
un factor de dilucin de 100, para ello se toma 1 mL del
cultivo de bacterias en suspensin, y se aade a un frasco
de dilucin que contiene 99 mL del diluente adecuado, se
agita y se toma de esta primera dilucin (1:100 10 -2) 1 mL
y se transfiere a un segundo frasco con 99 mL del diluente
adecuado, se agita y se toma de esta segunda dilucin
(1:10.000 10-4) 1 mL y se transfiere a un tercer frasco de
dilucin que contiene 99 mL del diluente adecuado (esa
corresponde a la dilucin 1:1.000.000 10-6).
De cada dilucin se siembran por triplicado muestras de 1
mL y se incuban por 24 horas y se cuentan las colonias.
Si el promedio de las 3 placas de la dilucin 1/1000, es de
32 colonias entonces el recuento es de 32.000 UFC/mL de
muestra.

Conteo en placas Ventajas y

desventajas

Ventajas.
Se usa frecuentemente, para estimar poblaciones
bacterianas en leche, agua, y otros productos.
Es fcil de realizar y se adapta a la medicin de
poblaciones de cualquier densidad.
Desventajas:
Tiempo largo, (requieren 24 horas)
Exigen muy buenas tcnicas de esterilizacin
Puede dar errores cuando se trata de clulas agregadas

Placas petrifilm (3M)

Son placas prefabricadas
con el medio de cultivo
adecuado para el
microorganismo que se
desea contar.
Las placas Petrifilm de 3M
para Coliformes dan
resultados en 24 h.
Tres etapas:
1) Sembrar. Levantar la
pelcula y aadir la muestra
2) Incubar. El diseo de
las placas ahorra espacio
en la estufa
3) Contar. Las colonias
rojas asociadas a burbujas
de gas.

c.2.- Nmero mas probable (NMP)

Es una tcnica de estimacin estadstica basada en el
hecho que a mayor nmero de bacterias en una
muestra, mayor ser la dilucin necesitada para
reducir la densidad hasta el punto en que ninguna
bacteria se le permita crecer en una serie de
tubos de dilucin.
Se basa en determinar la presencia o ausencia (positivo
o negativo) de clulas en copias obtenidas por diluciones
consecutivas a partir de muestras.
Muestras microbianas son aadidas a tubos con caldos
adecuados en unas cinco replicas e incubados, la
presencia o ausencia de gas y turbiedad formados en la
fermentacin da un estimado del nmero de clulas.
Aquellos tubos que recibieron una o ms clulas
microbianas procedentes de la muestra, se pondrn
turbios, mientras que los tubos que no recibieron
ninguna clula permanecern transparentes.

c.2.- Nmero mas probable (NMP)

Se toma la muestra original y se subdivide unas 10
veces, o mas para evaluar la presencia/ausencia en
mltiples replicas.
El grado de dilucin para el cual comienza a aparecer la
ausencia indica que los elementos se han diluido tanto
que hay muchas submuestras en las que no aparece.
Al aumentar el factor de dilucin, se alcanza un punto en
el que algunos tubos contendrn tan slo un
microorganismo y otros tubos no contendrn ninguno.
Se usan las tablas de Cochran.
Al calcular la probabilidad de que los tubos no hayan
recibido ninguna clula, se puede estimar el nmero
ms probable (NMP) de microorganismos presentes
en la muestra original, a partir de una tabla
estadstica.
El NMP es una afirmacin que existe 95% de probabilidad
que la poblacin bacteriana sea de rango correcto.
Este mtodo es ms til cuando las bacterias a contar no
crecen en medios slidos, o cuando la bacteria puede
crecer en un medio lquido diferencial, como sucede con
las bacterias coliformes, que usan selectivamente lactosa.

Nmero mas probable (NMP) para 6 tubos,

lectura 6,3,1
10 mL de inculo

6 tubos positivos
(com crescimento
bacteriano)

1 mL de inculo

0,1 mL de inculo

3 tubos positivos

1 tubos positivos

bacterias por
100 g (ml) de
material
analizado
empleando
cinco tubos
inoculados
con 10, 1 y 0.1
ml o g de
material
Tsoumada de:
Enumeration of
coliforms, faecal
coliforms and of e.
Coli in foods using
the MPN methoD
MFHPB-19 April
2002 por Donna
Christensen
Crawford y Rick
Szabo

Uso de la tabla
Consideremos positivos los siguientes cultivos:
(1) 5 tubos inoculados con 10 mlde la dilucin (1/10) del
material : los cinco (5) son postivos
(2) 5 tubos inoculados con 1 ml de la dilucin (1/10) del
material: solo uno (1)es positivo
(3) 5 tubos inoculados con 0,1 ml de la dilucin (1/100) del
material: ninguno (0) es positivo
Cada uno de los cinco tubos de las tres diluciones
representan respectivamente a 1, 0.1 y 0.01 g (ml), del
material analizado.
La lectura se toma en la ubicacin de la Tabla
correspondiente a la lectura 5-1-0 (NMP de 33) si se
hubiesen utilizado 10, 1 y 0.1 g (ml) de material.
Como se usaron cantidades 10 veces menores (1/10) de
aquellas con las que se construy la tabla, el valor de 33
debe multiplicarse por 10, lo que proporciona un
valor de 330 organismos por 100 g (ml) de material.
Como usualmente se expresa por g (ml) de material, este
valor (330) debe dividirse por 100.
El recuento obtenido por el NMP es en este caso de 3,3
organismos por g (ml) de material analizado.

c.3.- Membranas Filtrantes

Los mtodos de recuento en placa o del nmero ms
probable pueden detectar una clula microbiana
viable, en un mililitro de la muestra.
En poblaciones con menos de una clula por mililitro,
no son aplicables.
En muestras diluidas como agua de una piscina. La
muestra debe concentrarse antes de hacer el recuento.
La concentracin de los microorganismos de las
muestras se hace, generalmente, por filtracin
Consiste en hacer pasar la muestra que contiene los
microorganismos a travs de una membrana de
acetato de celulosa (0.45m) colocada en un
dispositivo de filtracin.
Los microorganismos quedan retenidos en la
membrana filtrante, la cual se retira despus de
terminado el proceso de filtracin y se coloca en una
placa de Petri con un medio de cultivo adecuado.

c.3.- Membranas Filtrantes

Despus de incubar, aparecen sobre la membrana las
colonias de los microorganismos.
Esta tcnica permite el anlisis de grandes cantidades
de la muestra, tratndose por ejemplo de agua o de
aire, pueden filtrarse a travs de la membrana grandes
volmenes, concentrando as la poblacin microbiana.

d. Peso seco.
Se basa en secar volmenes conocidos de medio con las
clulas en crecimiento, hasta obtener un peso constante.
Es til para grandes volmenes.
Para levadura se puede usar una centrfuga con
velocidades de 4-6x103rpm. Se obtiene una masa
hmeda de clulas, luego esta masa se lava y seca a
80C por 24 horas, y se pesa.
En clulas bacterianas, se usan filtros de membranas
para obtener la masa celular hmeda, y luego se seca.
(1 mg de peso seco equivale a una masa bacteriana de
5 x 10 9 bacterias)
Puede ser usada cuando el medio no contiene slidos en
suspensin.
Desventajas:
Los componentes voltiles de la clula pueden perderse.
La muestra seca puede recobrar humedad durante el
pesado, principalmente si el ambiente tiene una
humedad relativa alta.
Requiere muestras muy grandes y el proceso es lentos.

e. Absorcin de luz.
Consiste en hacer incidir una luz monocromtica a la
suspensin de microorganismos, y se mide la luz
transmitida a travs de la suspensin, la que es
inversamente proporcional a la concentracin de biomasa,
segn la ley de Beer.
Usar, turbidmetro o espectrofotmetro 600- 700 nm.
Se necesitan de 10 millones a 100 millones de clulas por
mililitro para hacer una suspensin suficientemente turbia
para ser leda.

e. Absorcin de
luz.
Hay que hacer una
curva de calibracin
que relacione
medidas directas
(recuento en placa
o microscopa) con
las indirectas de
turbidez
Con esta
informacin y las
absorbancias de las
diluciones, se hace
una curva de
calibracin.
Teniendo esta
curva, se podr
determinar las
ufc/ml de otras
muestras luego de
leer la absorbancia
de las mismas.

e. Absorcin de luz.
Valores altos de OD (mayores a 0.3)
afectarn la linealidad en la respuesta.
El principal inconveniente es que no
distingue clulas vivas de muertas, o entre
clulas y otras partculas.
Sin embargo, es una tcnica que puede ser
utilizada on-line para mediciones continuas.

f. Masa de un componente
celular.
Medida de algn componente celular que
sea parte constante del peso seco total de
las clulas.
Pueden ser: protenas, nitrgeno, ADN,
RNA, y ATP celulares, los cuales estn
presentes en cantidades mas o menos
constantes por especie.

e. Efectos
fsicos.
Se puede medir la
variacin de
algn factor
externo por
efecto del
crecimiento
celular, tales
como;
el calor generado
por el
crecimiento,
el oxgeno
captado por el
medio, y que deja
un vaco medible.

Para CO2.
CO2 + 2NaOH Na2CO3 + H2O
Na2CO3 + BaCl2 BaCO3 + 2NaCl
NaOH (residual) + HCl NaCl + H2O
1.Muestra de suelo, 2.Recipiente con
agua
3.Solucin de NaOH 0.5 N
4.Aguja #20 (Venocat calibre 17)
5.Jeringa desechable de 20mL
6.Tubo de plstico flexible de 1-2 mm de
dimetro
7.Plastilina

4.- CINETICA DEL

CRECIMIENTO

La velocidad de crecimiento es el cambio en el numero de

clulas en la unidad de tiempo.
El crecimiento es una consecuencia del hecho de que
cada clula se divide dando dos clulas hijas, las cuales se
dividen luego, cada una en otras dos, de modo que en
cada perodo de divisin la poblacin se duplica.
Parametros:
Tiempo de duplicacin.
Tasa de crecimiento.

a.- Tiempo de duplicacin. (g)

Es el tiempo necesario para duplicar una biomasa.
Xo ----g--- 2Xo
Al tiempo 0
X = Xo
Despus de: 1 generacin
X= 2.Xo.
En 2 generaciones
X = 2(2Xo.) =22 Xo
En 3 generaciones
X = 2(22 Xo)= 23Xo
En n generaciones
=2n.Xo

X = 2nXo , Y

El nmero de generaciones en un tiempo t ser:

n = t/g
(1)

 Aplicando logaritmos: X = 2n Xo
Log X = log Xo + n log 2

(2)
(3)

Sustituyendo log 2 por su valor 0.3010, se tiene que

1/0.3010 = 3.3
n = 3.3(logX logXo)
n = 3.3 log (X/Xo)
(4)
Reempazando en ec.1: n = t/g
g= 0.3t/log(X/Xo)
(5)
En ln la ec.3: n= (LnX-LnXo)/Ln2
O tambin LnX=nLn2+LnXo (6)
(ln2=0.69), y remplazando n =t/g se tiene:
g =0.693 t/(lnX-lnXo)
(7)

Tiempos de generacin en
bacterias
Bacteria

Medio

Tiempo de
generacion (min)

E. Coli

Glucosa-sal

17

Bacillus megaterium

Sacarosa-sal

25

Streptococcus lactis

Leche

26

Staphylococcus
aureum

Caldo infusion de
corazon

27-30

Streptococcus lactis

Caldo lactosa

48

Lactobacillus
acidfulus

Leche

66-87

Rhizobium japonicum

Leche

344-461

Mycobacterium
tuberculosis

Sinttico

792-932

Ejemplo.1
Se tienen 1000 bacterias en un medio de cultivo
ptimo y despus de 4 horas de incubacin,
creciendo exponencialmente, se obtienen 100 000
bacterias. Calcule el tiempo de generacin.
Xo = 1000
X = 100 000
T = 4 horas =240 minutos
g =? g = t/n
Clculo de n de la ec (3):
n = 3.3 log X/Xo , n = 3.3 log 100000/1000 = 6.6
generaciones
g =t / n
g = 240/6.6 = 36,36 minutos
Otra forma: con g =0.693 t/(lnX-lnXo)
g= (0.693x4)/(ln100) = 0.602 hr = 36.12 min

Ejemplo 2.
En un cultivo se tiene inicialmente 5x107
bacterias y despus de 6 horas se tiene 5x10 8
Calcule el tiempo de generacin
Ecuaciones:
n=t/g, : n= (LnX-LnXo)/Ln2
Reemplazando:
n = (20-17.7)/0.693
n = 3.3
g = t/3.3 = 6/3.3
g =Td = 1,8 h

Ejemplo 3.
En un proceso de fermentacin microbiana, se
toman datos del conteo celular, obtenindose los
t siguientes:
(hr)
0 0.5 1 1.5 2 2.5
3 3.5
4 4.5
5 5.5
6 6.5
X

8 16

32

7
102 204
1638
64 128 256 512
4
8 4096 8192
2

Calcule
el 1tiempo
de generacin.
0 0.5
1.5 2 2.5
3 3.5
4 4.5

t (hr)
X
lnX

5 5.5
6 6.5
7
1
2
4
8 16
32 64 128 256 512 1024 2048 4096 8192 16382
0 0.7 1.4 2.1 3 3.47 4.16 4.9 5.5 6.2 6.93 7.62 8.32 9.01 9.704

Solucin por correlacin:

La ecuacin de la recta es: LnX = 1.3863 t + 0.00001
De la Ec. 5, LnX=nLn2+LnXo.
LnX=Ln2(t/g) + LnXo
Se observa que: Pendiente: m = 1.386 = Ln2/g =
0.693/g
g = o.5 h

Solucin
Grfica:
(criterio)
La pendiente de
la lnea de
ajuste
corresponde a la
variacin del
doble del valor
de X en la
ordenada y de
un valor g en la
abscisa.
Se observa que: Pendiente: m =0.693/g = 1.386
Por
m=
1.386 = 0.693/g
tanto:
m=Ln2/g
g = 0.5 h

b.- Tasa de crecimiento

La velocidad de crecimiento para la fase exponencial es

directamente proporcional a la concentracin de clulas y
est dada por la siguiente relacin:
Reemplazando el signo de proporcionalidad

(8)

Unidades de rx son (biomasa/L.h)

rx=X

(9)

rx=Velocidad o tasa de crecimiento bacteriano en la fase de

crecimiento logartmico
X=concentracin de microorganismos
=Velocidad especfica de crecimiento, dado por la
ecuacin de Monod.

Valor de . Velocidad especfica de

crecimiento
()depende de: La composicin
Para
un m.o. dado
concentracin del
Temperatura y pH.

medio,

Presencia

de

y
inhibidores,

Ec. de Monod. (10)

x = concentracin de microorganismos g/l

t = tiempo, h
= velocidad especfica de crecimiento h-1,
S = Concentracin del sustrato, masa/unidad de
volumen
Ks=Constante promedio de velocidad. Concentracin
de sustrato a la mitad del mximo de velocidad de
crecimiento. masa/unidad de volumen

Limitaciones de la Ec. De
Monod
Posee limitaciones
1) A muy bajas concentraciones de sustratos no va
bien
2) A muy altas concentraciones de sustratos Ks real
es cte
Extensin: de las ecuaciones 8 y 10, se tiene:

5.- ESTEQUIOMETRIA
Estudia el grado en que un microorganismo puede
transformar los componentes del medio de cultivo en
nuevas clulas (biomasa) y productos.
Esto determina la viabilidad de un proceso industrial.
Se puede establecer las relaciones estequimetricas a
travs de:

balance de materiales.

los coeficientes de rendimiento.

5.1.- Coeficientes de
a.-rendimiento
Coeficiente de rendimiento biomasa-sustrato
Definicin. Es la relacin entre la variacin de la biomasa y
la variacin del sustrato.

Yx/s= -X/S

(5)

Yx/s =Coeficiente de mximo rendimiento en biomasa (masa

de clulas formadas/masa de sustrato consumidos).
Si para obtener 30 gl-1 de levadura para panificacin, se
consumen 60 gl-1 de fuente carbonada, el rendimiento ser
Yx / s= 0.5 g de levadura/gr de sustrato.
En un medio especfico, la relacin de la velocidad de
utilizacin de sustrato y la velocidad de crecimiento, esta
dada por:

Yx/s = - rx/rsu

rx = -Yx/s . rsu

(6)

rsu = Velocidad de utilizacin del sustrato. masa/unidad de

volumen tiempo.

a.- Coeficiente de rendimiento

biomasa-sustrato
(7)
El trmino m/Y = k, representa la mxima velocidad de
utilizacin de sustrato por unidad de masa microbiana.
Reemplazando en la ecuacin (7) se tiene:

Para organismos aerobios que crecen en glucosa se tiene

que los Yx/s tpicos son:
para levaduras y bacterias vara entre 0.4 y 0.6 g/g,
en condiciones anaerobias el valor de Yx/s es
substancialmente menor.
En metano, con bacterias el Yx/s ser 0.6 y 1.0 g/g

b.- Coeficiente de Rendimiento

biomasa-oxgeno.

Esta dado por la relacin de biomasa producida y el

consumo de O2 del medio.
Yx/o2 = -X/O2
Yx/O2 para bacterias y levaduras aerobias que crecen en
glucosa es de 0.9 a 1.4 g/g
Un cambio en el sustrato ocasionar variaciones en el
valor del coeficiente.
Los mismos m.o. en las mismas condiciones, pero en
metano tendrn un Yx/O2 de alrededor de 0.2 g/g.

Coeficientes para m.o aerobios

Organismo

Sustrato

Yx/o2

Yx/s
g/g

g/mol

g/g-C

g/g

Maltosa

0.46

149.2

1.03

1.50

Manitol

0.52

95.2

1.32

1.18

Fructosa

0.42

76.1

1.05

1.46

Glucosa

0.40

72.7

1.01

1.11

Candida utilis

Glucosa

0.51

91.8

1.28

1.32

Penicillium chrysogenum

glucosa

0.43

77.4

1.08

1.35

Pseudomonas fluorescens

glucosa

0.38

68.4

0.95

0.85

Rhodopseudomonas
spheroides

glucosa

0.45

81.0

1.12

1.46

Saccharomyces cerevisiae

Glucosa

0.50

90.0

1.25

0.97

Ribosa

0.35

53.2

0.88

0.98

Succinato

0.25

29.7

0.62

0.62

Glycerol

0.45

41.8

1.16

0.97

Lactato

0.18

16.6

0.46

0.37

Piruvato

0.20

17.9

0.49

0.48

Acetato

0.18

10.5

0.43

0.31

Enterobacteraergenes

Enterobacter aergenes

Coeficientes para m.o aerobios

Organismo

Sustrato

Yx/o2

Yx/s
g/g

g/mol

g/g

g/mol

Cndida utilis

Acetato

0.36

21.0

0.90

0.70

Pseudomonas fluorescens

Acetato

0.28

16.8

0.70

0.46

Cndida utilis

Etanol

0.68

31.2

1.30

0.61

Pseudomonas fluorescens

Etanol

0.49

22.5

0.93

0.42

Klesbiella sp.

Metanol

0.38

12.2

1.01

0.56

Metylomonas sp.

Metanol

0.48

15.4

1.28

0.53

Pseudomonas sp.

Metanol

0.41

13.1

1.09

0.44

Metyloccocus sp.

Metano

1.01

16.2

1.34

0.29

Pseudomonas sp.

Metano

0.80

12.8

1.06

0.20

Metanol

0.60

9.60

0.80

0.19

Metano

0.56

9.00

0.75

0.17

Pseudomonas metnica

c.- Coeficiente de formacin de producto (qr), o

Yp/s.
Yp/s = - P/S
Puede variar segn el producto y la forma como se
producen.
Los productos microbianos pueden ser clasificados
en tres categoras: productos asociados al crecimiento,
productos no asociados, y productos asociados mixtos.
En productos asociados. La formacin de producto es
proporcional a la tasa especfica de crecimiento (). Ej.
La produccin de una enzima constitutiva.
Productos no asociados. Antibiticos

5.2.- Balance del consumo de

sustrato
Resulta de gran inters conocer el destino del sustrato
durante el crecimiento microbiano.
El sustrato es utilizado por las clulas como fuente de
energa y como materia prima para la sntesis de
macromolculas constitutivas.
Por tanto en un tiempo cualquiera, el consumo de
sustrato (S) es:

s = sx + sp + sE
Donde:

(8)

S = Sustrato total consumido

Sx = Fraccin de sustrato utilizado en formacin de
biomasa
Sp = Fraccin de sustrato utilizado en formacin de
producto
SE = Fraccin de sustrato utilizado para obtener energa

a.- Balance de biomasa en

En
un biorreactor
continuo,
reactor
abierto
el sustrato entra al digestor,
donde existen las condiciones
(pH, temperatura, nutrientes,
oxigeno.) adecuadas para el
crecimiento celular.
En el biorreactor, el sustrato
es convertido a productos y
nuevas clulas por los
microorganismos presentes
en el medio.
Con el tiempo, la cantidad de
biomasa se incrementa a
expensas del sustrato que
disminuye.
El balance de biomasa para
reactor aerobio de mezcla
total es:
Qo Xo + V(rx) = Qe Xe
(12)

rx=Tasa de crecimiento
celular.
Reemplazando el valor de
rx, se tiene:

Balance de biomasa en reactor

abierto
QoXo + V(r'g) = QeXe (10)

Qo=Flujo de agua en el influente.

Qe=Flujo de agua producto o agua en el efluente.
So=Concentracin de sustrato en el influente.
S=Concentracin de sustrato en el reactor.
Se=Concentracin de sustrato en el efluente
Xo=Concentracin de biomasa en el influente.
X=Concentracin o masa de biomasa en el reactor.
Xe=Concentracin o masa de biomasa en el efluente
V=Volumen del reactor.
r'g=Tasa o velocidad real de crecimiento de los microorganismos.

RESUMEN DE TRMINOS CINTICOS EN TRATAMIENTO DE

AGUAS RESIDUALES

=Velocidad especifica de crecimiento

m=mxima velocidad de crecimiento
Ks=Constante promedio de velocidad. Concentracin de sustrato a la mitad
del mximo de velocidad de
crecimiento. mg DBO/L
S=Concentracin del sustrato. mg DBO/L
rg=velocidad o tasa de crecimiento celular
rg= -Yrsu
Y=Coeficiente de mximo rendimiento medido durante un periodo finito en
la fase de crecimiento
logartmico. Se define como la masa de clulas formadas/masa de sustrato
consumidos.
rsu=Velocidad de utilizacin del sustrato. masa/unidad de volumentiempo.
rd = velocidad de decaimiento por metabolismo endgeno
rd = kdX
kd=constante especifica de velocidad de decaimiento endgeno dias-1
X=concentracin de clulas en el reactor mg SVS/L
r'g=rg-rd
r'g=velocidad neta de crecimiento de clulas en el reactor
r'g =(mXS/Ks+S)- kdX

b.- Balance de carbono

La base del balance, es la composicin celular en los
elementos mayoritarios (C, N, H, O).
Se ha encontrado que la composicin elemental de un
microorganismo durante un cultivo no se modifica
mayormente y, que las composiciones elementales de
distintos tipos de microorganismos (bacterias y hongos)
son semejantes.
Se puede definir un "microorganismo promedio" con
una composicin (% p/p) de: C = 46.5; H = 6.49; 0 =
31.0; N = 10.85, y el contenido de sales 5%.
Sin embargo, la composicin macromolecular, esto es:
protenas, cidos nucleicos, etc., varia en el proceso.
El contenido de tomos para 1 C, de la formula global ser:
n =(%n/%C)*(PAC / PAn)
Aplicando se obtiene la frmula global de un m.o.
promedio ser: CH1,79O0,5N0,2 (representa el 95% p/p
de la biomasa)

c.- Mol de biomasa.

1 C-mol de biomasa es la cantidad de biomasa que
contiene 1 tomo gramo de C, su peso ser:

Por tanto una concentracin de X en gL -1 de biomasa es

equivalente a X/25.8 C-mol de biomasa l -1, o bien Xox /12 Cmol de biomasa l-1 .
Donde ox es la fraccin de Carbono de la biomasa
(0.465 para el "microorganismo promedio").
ox se obtiene de bibliografa, o se puede suponer ox =
0.465.
1 C-mol de glucosa (C6H12O6), se representa por CH2O y pesa
30 g, y 1 C-mol de etanol (C2H60) se representa por CH3O0.5 y
pesa 23 g.
En general para un compuesto de la forma CnH lOqNm, 1 Cmol esta representado por C Hl/n Oq/n Nm/n.

d.- C-mol de fuente de energa, y 1 Cmol

de
producto.

El crecimiento puede representarse por la "reaccin qumica:

Donde NH3 es la fuente de nitrgeno, y los coeficientes

estequiomtricos estn dados en 1 C-mol de fuente de C y
energa.
yx/s representa los C-moles de biomasa formada por cada Cmol de fuente de C y E consumida., b los moles de O2
consumido por cada C-mol de fuente de C y E consumida,
etc.
Los valores de yx/s e yp/s se calculan a partir de Yx/s e Yp/s:

e.- El grado de reduccin" ()

Es el nmero de electrones transferidos desde 1 C-mol del

compuesto a oxidar, al O2.
En la tabla estn los valores de para la oxidacin de 1 Cmol de distintos compuestos orgnicos a CO 2 y H2O, y el
calor de reaccin q.

Clculo de por estequiometria

De la tabla se observa que: La cantidad de calor liberado

por cada mol de electrones transferidos al oxgeno (q/ ),
es similar, con un valor promedio de:
qo = 27.5 k cal (mol electrones transferidos al O 2)-1
En general para calcular el grado de reduccin de un
compuesto se plantea la ecuacin de oxidacin del mismo
a CO2 y H2O, y el valor de se obtiene multiplicando por 4
el coeficiente estequiomtrico del O2 (ver tabla).
Si el compuesto contiene nitrgeno, deber especificarse
su estado de oxidacin final.
En un compuesto dado por CHaObNc, y para calcular el
valor de y con respecto al nivel de referencia dado por
CO2 , H2O y NH3 ser: De la ecuacin de oxidacin:
El valor de ser igual a 4n.

Calculo directo de
Por balance elemental de C, H, O y N se tiene:

Por tanto ser:

(7)

Tanto para CO2, H2O y NH3 es = 0 (no tienen electrones

disponibles) por ser ste el nivel de referencia elegido.

Si en lugar de NH3, se elige N2: = 4 + a - 2b.

Para aplicar el balances de materia y energa, se plantea
la "reaccin qumica" que representa al cultivo.
Para simplificar el tratamiento suponer que la fuente de
C y E no contiene nitrgeno (es lo usual) y que la fuente
de nitrgeno es una sal de amonio, por lo que estar
dado por la ecuacin 7

e.- Ecuaciones de balance en Cmol de Carbono:

Balance

Con los rendimientos referidos a 1 C-mol de fuente de

Carbono y energa, resulta:

(8)

Balance de grado de reduccin:

Los electrones disponibles a la izquierda y a la derecha

de la reaccin debern ser iguales, luego:

(9)
Para: NH3 , H2O y C02 es = 0. Adems el grado de
reduccin del O2 es -4.
Reordenando la ecuacin (9) queda:

(10)
O bien:

(11)

Donde: , , representan la fraccin de energa

transferida a la biomasa, al producto y al oxgeno
respectivamente.
Por cada mol de electrones transferidos al O2 se liberan
qo = 27.5 k cal, y el calor producido esta dado por:
q = 4 bqo (k cal / C-mol fuente de C y E) (15)
e representa la fraccin de energa disipada como calor.
Mediante las ecuaciones (8) y (10) es posible analizar los
resultados y verificar si las determinaciones han sido
correctas.
Se puede aplicar las ecuaciones para calcular un
rendimiento no medido, por ejemplo yp/s en base a los
dems.

Ejemplo 1:
Se cultiv la levadura Candida utilis en un medio conteniendo
glucosa, S04(NH4)2 y sales. La concentracin inicial de
microorganismos fue de 0.53 gL-1, y la glucosa 15.2 gL-1. Al
cabo de 9.5 horas, se consumi totalmente la glucosa, se
consumieron 0.123 mol de O2 L-1, se produjeron 0.179 mol de
CO2 L-1 y la biomasa alcanz un valor de 6.07 gL-1. Se desea
averiguar si, adems de biomasa, se form algn producto.
Datos:
Xo = 0.53g/L , So= 15.2 g/L
t= 9.5 hr.
Sf= 0, Xf= 6.07 g/L
consumo: O2= 0.123 mol/L
Productos: CO2= 0.179 mol/L .
Criterios de solucin: se usa formula de microorganismo
promedio, y el valor de C-mol.

Ecuacin de reaccin:
CH2O + O2 + SO4(NH4)2 ---Yx/s(CH1.79O0.5N0.2) +yp/sP
Biomasa formada = (6.07 -0.53)/25.8 = 0.215 Cmol/L
Glucosa consumida = 15.2/30= 0.506 C-mol/L
Rendimiento: yx/s = 0.215/0.506 = 0.425
yco2/s = 0.179/0.506= 0.354.
Puesto que la suma de yx/s y yco2/s es inferior a 1,
es obvio que se ha formado algn producto:
yp/s= 1-(0.425 + 0.354) = 0.22

6.- MODELOS CINETICOS

El crecimiento microbiano es un proceso difcil de
modelar debido a las mltiples interacciones entre las
clulas y el medio, y a la gran cantidad de reacciones
bioqumicas que intervienen en la actividad celular.
Varios modelos conceptuales y matemticos se han
formulado con el objeto de explicar y replicar el
comportamiento
que
muestran
los
sistemas
biolgicos.
Estos modelos se han clasificado segn las
consideraciones asumidas respecto a la estructura de
las clulas o a la distribucin de la poblacin celular.
La clasificacin ms general incluye modelos noestructurados,
y segregados
Modelo estructurados
No
estructurados
estructurados
No segregados
Segregados

CAJA NEGRA
CASO REAL

a.- Modelos No-Estructurados

Son los modelos ms simples para describir el
crecimiento microbiano.
Se asume que las clulas son una entidad en solucin,
que interacta con el ambiente.
No se reconoce ninguna estructura celular interna, ni la
diversidad de la poblacin. Por tanto, todos los
componentes celulares se representan por una nica
concentracin, la de la biomasa (X).
Los modelos no segregados no estructurados
suelen llamarse del tipo "Caja Negra".
Los mas usados son:
Modelo de Monod, Modelo de Contois, Modelo de
Mosser,

Modelo de Monod
Monod en 1942 desarroll una ecuacin cintica simple.
Parte de suponer que slo una enzima con cintica
Michaeliana es la responsable del consumo de S.
El modelo asume tambin que la produccin de biomasa
depende exclusivamente de la concentracin de un
sustrato limitante. Representacion:

Modelo de Monod
X : Concentracin de microorganismos.
: tasa efectiva de crecimiento K S
S : Concentracin de substrato, mg/L
m : tasa mxima de crecimiento
Ks : Constante de saturacin. Relacin inversa con
afinidad del m.o por el sustrato. L valor de S cuando
= m/2
Cuando S > > Ks, toma el valor de m y rx slo
depende de x.
En general Ks tiene valores muy bajos, del
orden de los mg/l.
En promedio:
En bacterias m
0.9
h-1
Las levaduras0.45 h-1
Los hongos filamentosos
0.25 h-1
El modelo tiene limitaciones para concentraciones

Modelo de Monod

El coeficiente Yx/s, estar dado por:

Yx/s= (aumento de biomasa)
= (dX/dt) = dX

descenso en conc de sustrato

(dS/dt) dS

Modelo de Monod

Utilizacin del sustrato

Linearizacin del modelo

La solucin emprica del modelo requiere hacer la
linearizacion de Lineweaber-Burk.

Otros modelos no
estructurados
de Contois.

Modelo
Muestra
una
dependencia de la
tasa especfica de la
reaccin con respecto
a la concentracin de
organismos
activos
presentes.

m S

K sx x [S ]

Ejemplo
Una cultivo de microorganismos BATCH en
crecimiento, en sustrato de glucosa, dio los
siguientes datos.
TIEMPO
(h)

CONC. CELULAS (X)

(g/l)

ln X

CONC. GLUCOSA
(g/l)

1.25

0.2231

100.00

2.45

0.8961

97.00

16

5.10

1.6292

90.40

23

10.50

2.3514

76.90

30

22.00

3.0910

48.10

34

33.00

3.4965

20.60

36

37.50

3.6243

9.38

40

41.00

3.7136

0.63

a) Calcular la velocidad mxima de crecimiento.

b) Calcular la variacin de sustrato (coeficiente biomasa-sustrato)
c) Cul es la concentracin celular mxima que podra esperarse si
150g de glucosa fueron usados con la misma cantidad de inoculo.
Rpta. a)

ln X

ln X

t (h)

y ln X
tg m

x
t
b) Rpta.

ln 37.5 ln 5.1
m
0.1 h 1
36 16

Calcular la variacin de sustrato por el crecimiento celular .

X celuar
Rango de Conc. Celular

S sustrato
Rango de Conc. Sustrato

41 1.25
y
0.40 gr de clulas / gr de sustrato
0.63 100

c) Rpta.

X max X 0 Y .S 0
X max 1.25 0.4(150)
X max 60.25

g clulas
lt

Modelo logistico
Los modelos anteriores representan el
comportamiento de los m.o, slo en la fase log de
un cultivo batch (donde es constante)
Si se quiere representar todo el proceso, es
necesario recurrir al modelo logstico.
Este modelo es capaz de arrojar una curva
sigmoidal
Se obtiene combinando la ecuacin de Monod con
la expresin de y la de rendimiento biomasasustrato (Yx/s).
dX = m(Yx/s.So + Xo X) . X
dt
(Ks.Yx/s + Yx/s.So +Xo-X)22

Modelos Estructurados
Los modelos estructurados modelan a la clula
como un sistema de componentes mltiples
(ribosomas, enzimas, membranas,etc.), y esta se
describen con ms de una variable.
En estos modelos, los componentes de la
biomasa se juntan en algunas variables clave que
son representativas del comportamiento celular.
La actividad microbiana es funcin de variables
abiticas y de la composicin celular, adems la
actividad microbiana depende de las condiciones
ambientales que el cultivo ha sufrido en el
pasado.
Estos modelos tienen mayor capacidad de
prediccin que los modelos no-estructurados

Modelos estructurados.
Al construir el modelo se debe decidir cuantos
componentes celulares se tomaran en cuenta. (de 2 a 40)
Estos modelos consideran: las concentraciones
intrnsecas, (cantidad de un componente por unidad de
masa celular) (Ci/X), y las concentraciones extrnsecas o
cantidad de un componente por unidad de volumen del
reactor.
d(Ci/X) = (1.dCi) - ( Ci. dX/dt)
dt
X.dt
X. X
Un resultado aceptable se produce usando al menos 3
componentes celulares.
Con mas componentes el modelo ser mas preciso, pero
tambin mas complejo.
Ci, es la concentracin de cada componente.

Modelos estructurados.
Con ms de un substrato limitante se pueden usar
modelos modelos multiplicativos, modelos aditivos
y modelos nominativos
Son desarrollados con amplitud en el libro de
Shuler-Kargi.
El modelo aditivo toma la forma:

= W1.S1 + W2.S2 + ... + Wn. Sn

max
donde W1, W2, ..., Wn son funciones del peso, y
sigue la cintica Monod.

Modelos segregados
Los modelos segregados tienen en cuenta que la
poblacin celular es heterognea, reconoce a las
clulas como discretas, por lo que resultan
complejos.
Estos modelos pueden reconocer como diferentes a
las "clulas ms viejas" de las "clulas ms jvenes".
Se aplican a sistemas microbianos en los cules se
observa que la diferenciacin de las clulas juega un
papel importante en el desempeo global del cultivo,
y que las cinticas de crecimiento y la productividad
del cultivo son afectadas por la aparicin de ms de
un tipo de clula. (Paz Astudillo)

Referencias
Sanz J.L. Microbiologia ambiental.
Scragg Alan.