Control de Microorganismos

Control del crecimiento microbiano
1 Definicin de trminos ms frecuentes

2 Control de los microorganismos por medios fsicos
2.1 Esterilizacin por calor
2.2 Esterilizacin mediante radiaciones
2.3 Esterilizacin por filtracin
3 Control de los microorganismos por medios qumicos
3.1 Control qumico del crecimiento
3.2 Antispticos, desinfectantes y esterilizantes
4 Agentes antimicrobianos utilizados in vivo
4.1 Agentes antimicrobianos sintticos
4.2 Antibiticos
4.3 Antifngicos y antivricos
FUNDAMENTOS
Historia
Los egipcios empleaban fuego para esterilizar

material infeccioso.
Los griegos quemaban azufre para fumigar los

edificios.
La ley de Moises obligaba a los hebreos a quemar

todas las ropas de los que morian de lepra
Principales razones para

controlar los microorganismos:
Prevenir la transmisin de
enfermedades
Evitar el deterioro de los alimentos y
otros materiales
Evitar la contaminacin en procesos
industriales que requieran cultivos
puros, en laboratorios de diagnstico
o investigacin.
Impedir la presencia de lama

bacterial en las fbricas ( de
papel y de azcar).
Controlar las algas en las
piscinas recreacionales y en los
sistemas acuticos de
refrigeracin.
Prevenir el deterioro bacterial
en las pinturas a base de agua.
Controlar las manchas y la

podredumbre de origen mictico
en las maderas.
Impedir la incidencia de
enfermedades en las cosechas
agrcolas causadas por
patgenos
Erradicar microorganismos de
un hospedador que est
infectado
Importancia del control microbiano

Prevenir:
1. La transmisin de infecciones
2. La contaminacin o proliferacin de
microorganismos perjudiciales
3. El deterioro o destruccin de materiales
por los microorganismos.
MUERTE DE LAS
POBLACIONES
MICROBIANAS Y CURVAS
DE SUPERVIVENCIA
Criterio de muerte de un
microorganismo: prdida irreversible
de la capacidad de reproduccin en un
medio adecuado. Tambin implica
destruccin de la clula
Proliferacin: desarrollo y crecimiento
de los microorganismos y por lo tanto,
incremento de su poblacin
Supervivencia: no hay ni muerte ni
proliferacin, permaneciendo los
microorganismos inactivos o inhibidos.
Caso terico de desinfeccin

Tiempo Supervivientes Muertes por
unidad de
tiempo
Total
muertes
Porcentaje
total de
muertes
1.
1.000.000
2.
100.000
900.000
900.000
90,0000%
3.
10.000
90.000
990.000
99,0000%
4.
1000
9.000
999.000
99,9000%
5.
100
900
999.900
99,9900%
6.
10
90
999.990
99,9990%
7.
999.999
99,9999%
por unidad de volumen
Logaritmo de los
sobrevivientes
por unidad de volumen
Sobrevivientes
100%
Tiempo (horas)
Cuando una poblacin microbiana se expone a un

agente letal, la cintica de la muerte es casi siempre
exponencial ya que el nmero de supervivientes
disminuye de forma geomtrica con el tiempo.
Factores que afectan el control

de los microorganismos
El nmero de microorganismos
El tiempo de exposicin.
La concentracin del agente de control
Condiciones ambientales locales
El tipo de microorganismos
La temperatura
El estado fsico de el microorganismo
El nmero de microorganismos
A mayor nmero de
microorganismos y/o resistencia de
la poblacin se necesitar mayor
tiempo de esterilizacin.
Para determinar el nmero de

sobrevivientes es necesario conocer
el tamao inicial de la poblacin.
poblacin
El tiempo de exposicin.
D: tiempo requerido para
reducir la poblacin
microbiana un 90%
Disminucin progresiva en el nmero de microorganismos

sobrevivientes en funcin del tiempo de exposicin al agente
3,48
mg/
l
3,7
96
3,
6m
g/l
l
mg/
l
g/
m
4,25
4,62 mg/l
6,04 mg/l
Logaritmo de los
supervivientes por ml
Efecto de la concentracin del

agente de control
Tiempo (minutos)
Efecto de diferentes concentraciones

de fenol sobre una poblacin de E.coli
Condiciones Ambientales
El calor es ms eficaz en un medio

cido que en uno alcalino.
La consistencia del material, acuoso
o viscoso, influye marcadamente en
la penetracin del agente.
Las concentraciones altas de
carbohidratos aumentan, por lo
general, la resistencia trmica de los
organismos.
La presencia de materia orgnica

extraa reduce notablemente la eficacia
de los agentes antimicrobianos :
No permite que el agente llegue al

microorganismos
Se combina con el desinfectante y lo
precipita
Se combina con el desinfectante y lo
inactiva dejando libres concentraciones tan
bajas que no logran el efecto deseado sobre
la poblacin microbiana
La naturaleza del
microorganismo
Desinfeccin por UV
http://www.cepis.ops-oms.org/eswww/fulltext/aguabas/ultravio/ultravio.html
Estado fisiolgico
de las clulas: las
clulas jvenes son
ms vulnerables
que las viejas.
Tipo de
microorganismo:
las clulas
vegetativas en
desarrollo son
mucho ms
susceptibles que las
esporas.
El estado fsico de el
microorganismo
Agente
Escherichia Esporas Esporas
Virus y
esterilizante
coli
bacterianas fngicas bacterifagos
Calor hmedo
1
3.000.000
2-10
1-5
Calor seco
1
1.000
2 - 10
5
Fenol
1
100.000.000 1 - 2
30
Formaldehdo
1
250
2
Radiacin
1
2-5
5 - 100
5-10
ultravioleta
Orahn, Bacteriol.Rev.,9, 1 , 1945
Modo de accin de los agentes

microbianos:
Alteran la permeabilidad de
la membrana
Daan las protenas y los

cidos nucleicos
Definicin de trminos
Esterilizacin: Proceso de destruir todas las formas de vida

microbiana incluidas las esporas (Estril, esterilizar,
esterilizacin).
Saneamiento: Todas las acciones necesarias para reducir la

poblacin microbiana a niveles no peligrosos por medio de
un agente, (por lo regular, qumico) segn los requerimientos
de salud pblica
Aplicados casi siempre a objetos inanimados.
Condicin sanitaria que no necesariamente supone
desinfeccin.
Desinfectante: Agente por lo regular qumico, capaz de

destruir, eliminar o matar las formas en desarrollo, pero no
necesariamente las esporas resistentes de microorganismos
patgenos (sustancias que se usan en objetos inanimados).
Desinfeccin.
Antisptico: Toda sustancia que se opone a la sepsis o impide

el desarrollo o accin de los microorganismos para destruirlos
o inhibir su crecimiento y actividad.
Generalmente se refiere a a sustancias aplicadas al cuerpo.(no daan el
tejido por lo tanto no suelen ser txicos como los desinfectantes).
Agentes antimicrobioanos: Interfieren en el crecimiento y

actividad de los microbios. Antibacteriano o antifngico.
Agentes teraputicos: agentes antimicrobianos utilizados en el

tratamiento de las infecciones.
Germicida (microbicida): Agente que mata las formas en

desarrollo pero no forzosamente las esporas resistentes; en la
prctica, es casi lo mismo que un desinfectante, aunque los
germicidas se utilizan para todo tipo de grmenes y en cualquier
tipo de aplicacin.
Bactericida, fungicida, viricida, esporocida: se

refieren a agentes que matan respectivamente,
bacterias, hongos, virus, esporas.
Bacteriostasis: Supresin del desarrollo de bacterias

(agente bacteriosttico). Microbiostticos.
Curva y velocidad de muerte bacteriana
Muerte bacteriana: Prdida irreversible de la capacidad de

reproduccin cuando el microorganismo se siembra en un medio
adecuado.
Caso terico de una desinfeccin
Tiempo
Sobrevivientes
Muertes por
unidad de
tiempo
1 000 000
100 000
900 000 = 90%
900 000
10 000
90 000 = 90%
990 000
1 000
9 000 = 90%
999 000
100
900 = 90%
999 900
10
90 = 90%
999 990
9 = 90%
999 999
Total de
muertes
Curva y velocidad de muerte de Escherichia coli

expuesta a varias concentraciones de fenol a
35C.
Al aumentar la
concentracin de
desinfectante
disminuye la
supervivencia
bacteriana.
Condiciones que influyen en la accin

antimicrobiana
Agentes fsicos
Temperatura (calor seco, hmedo)
Luz UV
Radiaciones ionizantes
Clases de microorganismos
Clulas vegetativas
Esporas
Estado fisiolgico de las bacterias

Clulas jvenes/viejas
Condiciones ambientales
(cido o alcalino) (acuoso o viscoso)
Combinacin de dos o ms agentes
Carbohidratos, lpidos, protenas
Presencia de materia extraa
Condiciones que influyen en la

accin antibacteriana
E. coli expuesta a una concentracin de 4.62 g/l de fenol a temperaturas entre 30 y 42C.
La temperatura disminuye la supervivencia bacteriana cuando la concentracin del
desinfectante permanece constante.
Cundo est muerto un

microorganismo?
Control de microorganismos
Agentes Fsicos
Agentes Qumicos
Agentes Antimicrobianos
Esterilizacin por calor

Esterilizacin por radiacin
Esterilizacin por filtracin

antimicrobianos
Dao a la pared celular

(Gram positivas son atacadas por lisozima---protoplastos).
Alteracin de la permeabilidad celular

(fenoles, detergentes, compuestos cuaternarios, jabones)
Alteracin de las molculas de protena y de

cidos nuclicos.
(desnaturalizando. Altas temperaturas o fuertes concentraciones de agentes
qumicos).

antimicrobianos
Inhibicin de la accin enzimtica

Ejemplo: Cianuro- citocromo oxidasa, fluoruro-gluclisis,
compuestos arsenicales trivalentes- bloquean el ciclo del cido
tricarboxlico, el fenol- desacopla los fosforilaciones
oxidativas.
Inhibicin de la sntesis de cidos nuclicos

a) Compuestos que interfieren con la formacin de los bloques
estructurales de los cidos nuclicos, los nucletidos purina y
pirimidina.
b)Compuestos que interfieren con la polimerizacin de los nucletidos en
cido nuclico.
FACTORES FISICOS DE
CONTROL DEL
CRECIMIENTO
MICROBIANO
Clasificacin de los mtodos fsicos para el

control de microorganismos
Calor
Filtracin
Radiacin
Seco
Flama directa
Calor directo
(incineracin)
Aire caliente (horno
de Pasteur)
Hmedo
Autoclave
Tindalizacin
Pasteurizacin
Ultrpasteurizacin
Ebullicin
Rayos X
Rayos gamma
Rayos catdicos
Radiaciones no ionizantes
Luz ultravioleta
Otros mtodos fsicos para el control de

microorganismos
Bajas temperaturas
(congelacin)
Liofilizacin
Presin osmtica
Desecacin
Altas Temperaturas
A.- Esterilizacin por calor

hmedo:
Autoclave
Tindalizacin
Pasteurizacin
Hervir
B.- Esterilizacin por calor seco:

Horno
Incineracin
Hay que distinguir entre calor hmedo y

calor seco:
La alta temperatura
combinada con un
alto grado de
humedad es uno de
los mtodos ms
efectivos para
destruir
microorganismos.
El calor hmedo mata

los microorganismos
porque coagula sus
protenas siendo ms
rpido y efectivo que el
calor seco que los
destruye al oxidar sus
constituyentes
qumicos.
La accin letal del calor es una

relacin de temperatura y tiempo
afectada por muchas condiciones.
Las esporas de Clostridium botulinum

son destruidas:
En 4 a 20 minutos a 120 C en calor
hmedo
En 2 horas de exposicin al calor seco.
Bacteriosttico
Bactericida
Bacterioltico
Esterilizacin por
calor hmedo
Control de microorganismos por

calor
Es uno de los mtodos ms generalizados
Para todos los microorganismos existe
una temperatura mxima de crecimiento
por encima de la cual mueren
A temperaturas muy altas, casi todas las
molculas pierden su estructura y su
funcin

calor
mata
a
los
microorganismos porque coagula sus
protenas
Calor
hmedo
Calor seco destruye al oxidar sus
constituyentes qumicos
Definiciones
Punto trmico letal: es la temperatura ms baja a la

cual una suspensin de bacterias muere en 10 minutos.
Tiempo trmico letal: es el tiempo ms corto necesario

para matar una suspensin de bacterias o esporas a una
temperatura determinada y bajo condiciones especficas.
Tiempo de destruccin trmica (TDT):Tiempo

necesario para destruir un nmero dado de
microorganismos a una temperatura determinada.
Definiciones
Valor D: Es el tiempo de reduccin decimal o tiempo

necesario para destruir el 90% de los
microorganismos.
Este valor es numricamente igual al nmero de
minutos necesarios para que la curva de
supervivencia atraviese un ciclo logartmico.
Valor z: Son los F necesarios para que la curva de

destruccin trmica atraviese un ciclo logartmico.
Control de microorganismos por calor

hmedo
La alta temperatura
combinada con un alto
grado de humedad es
uno de los mtodos ms
efectivos para destruir
microorganismos.
Presin del
vapor
(lb/pulgada2)
Temperatura
(C)
0
5
10
15
20
100.0
109.0
115.0
121.5
126.5
Tiempo de muerte microbiana

aplicando calor hmedo
Microorganismo
Tiempo de
muerte (min)
Temperatura
( C)
Bacteria
5-10
60-70
Levaduras y hongos
5-10
50-60
Esporas de hongos
5-10
70-80
Largo perodo
de exposicin
Ms de 100
Esporas de bacterias
Las clulas vegetativas son ms sensibles al calor que las esporas
Tiempo de destruccin de esporas

bacterianas empleando calor seco y calor
hmedo
Esporas
Tiempo
(min)
4-20
Clostridium botulinum
Temperatura
(C)
Calor hmedo a 120
120
Calor seco a 120
2-15
Calor hmedo a 100
Bacillus anthracis
60 -120
Calor seco a 150
Olla de presin
Calentar 1.1 kg/cm2 = 121oC = 15
lb/ pulgada cuadrada
Lo que mata a los

microorganismos es la
temperatura,
no la presin
Foto tomada por Martnez., 2006
Ventajas del vapor a presin
Calentamiento rpido
Penetracin
Humedad en abundancia
Esto facilita la coagulacin de las protenas de los

microorganismos
Tiempos de exposicin necesarios para la esterilizacin

de soluciones acuosas o lquidos
RECIPIENTE
Minutos de Exposicin al Calor

250 254 F (121- 123 C)
Tubos de Ensayo:
18 x 150 mm
32 x 200 mm
36 x 200 mm
12 14
13 17
15 20
Frasco Erienmeyer:
50 ml
500 ml
1000 ml
2000 ml
12 14
17 22
20 25
30 35
Frasco Frenwal:
500 ml
1000 ml
2000 ml
24 28
25 30
40 45
Bacterias de disolucin de leche 100 ml

Bacteria de suero 9 000 ml
13 14
50 55
Pasteurizacin
Es un proceso que reduce

las poblaciones microbinas
de la leche y otros
alimentos sensibles al
calor.
Eliminar: microorganismos
causantes de la tuberculosis,
fiebre Q y la fiebre tifoidea
Foto tomada por Garay., 2003
La temperatura se eleva a 71 C durante 15 segundos o a

66C durante 30 minutos, seguido de un enfriamiento rapido.
Otros mtodos de esterilizacin de altas

temperaturas
Esterilizacin fraccionada o tindalizacin (sustancias

que no pueden calentarse a ms de 100C) se esteriliza
a 100C durante 3 das con sucesivos periodos de
incubacin.
Agua hirviente: periodos cortos en agua hirviente.
Esterilizacin con aire caliente: exposicin a 160C

durante dos horas.
Autoclave + gas etileno: material y aparatos

quirrgicos
Autoclave
Dispositivo
sellado
que
permite la entrada de vapor de
agua bajo presin
No es la presin del autoclave

lo
que
mata
a
los
microorganismos, sino la
elevada temperatura que
puede alcanzarse cuando el
vapor de agua se somete a
presin
Madigan y col. 2001
Autoclave:
El calor en
forma de
vapor a
saturacin y
a presin
proporciona
temperaturas
superiores a
las que se
obtienen por
ebullicin.
El aparato utilizado se llama

autoclave (una olla que
regula la presin interna y el
tiempo).
Los autoclaves de laboratorio :

Presin de vapor de una atmsfera por
encima de la presin atmosfrica lo cual
corresponde a una temperatura de 120C.
El tiempo de exposicin depende del

volumen del lquido, de tal manera que
para volmenes pequeos (hasta unos 3
litros) se utilizan 20 minutos a 120 C; si
los volmenes son mayores debe
alargarse el tiempo de tratamiento.
Usualmente 15 minutos a 121C
No se deben esterilizar en el autoclave:

Sustancias que no se mezclan con el
agua porque no pueden ser alcanzadas
por el vapor sobreviviendo los
microorganismos que contengan.
Sustancias que se alteran o son
destruidas por tratamientos prolongados
de calor.
La esterilizacin comienza cuando se ha

alcanzado la temperatura ptima en el interior del
aparato (autoclave o estufa)
Segn el contenido, un autoclave puede requerir

tiempos ms largos para alcanzar la temperatura
de esterilizacin.
Esterilizacin casera de frascos en olla a

presin:
Se llena de agua la olla hasta 1/3 del alto de
lo que se vaya a esterilizar
Se colocan los frascos bien lavados
se tapa la olla y se deja a fuego vivo
Cuando pita se saca el aire para que quede
slo vapor de agua.
Se deja volver a pitar y se baja el calor a
bajo
Se dejan cuentan de este momento en
adelante 15 minutos.
Se puede apagar el fuego y dejar enfriar
antes de sacar el material
Pasteurizacin:
Es un proceso que reduce la poblacin

microbiana de un lquido.
La leche, nata y ciertas bebidas
alcohlicas (cerveza y vino), los jugos,
se someten a tratamientos de calor
controlado que slo matan a ciertos
tipos de microorganismos pero no a
todos.
todos
La leche pasteurizada no es estril.
La temperatura seleccionada para la

pasteurizacin se basa en el tiempo
trmico mortal de microorganismos
patgenos
Es el tiempo ms corto necesario para

matar una suspensin de bacterias a
una temperatura determinada.
Mycobacterium tuberculosis es el patgeno

ms resistentes al calor que puede
transmitirse por la leche cruda y se
destruye en 15 minutos a 60 C.
Coxiella burnetti, agente causal de la fiebre
Q, se encuentra a veces en la leche, es
ms resistente al calor que
Mycobacterium tuberculosis por lo que la
pasteurizacin de la leche se realiza:
A 62,8 C durante 30 minutos
A 71,7 C durante 15 segundos
Pasteurizacin tradicional:
tradicional 63 a
65C por 30 min
Pasteurizacin Flash:
Flash el lquido se
calienta a 72 o C por 15 seg y
rpidamente se enfra. Puede ser
adaptada a flujos continuos.
Ultrapasteurizacin:
Ultrapasteurizacin 150 C por 1-3
seg
Tindalizacin o pasteurizacin
fraccionada:
Calentamiento del material de 80 a 100 C

hasta 1 hora durante 3 das con sucesivos
perodos de incubacin.
Se utiliza cuando las sustancias qumicas no
pueden calentarse por encima de 100 C sin
que resulten daadas.
Las esporas resistentes germinarn durante
los perodos de incubacin y en la siguiente
exposicin al calor las clulas vegetativas son
destruidas.
Esterilizacin
por calor seco:
Horno :
La esterilizacin seca se logra a

160170 C por 2-3 hrs.
El calor seco se utiliza principalmente
para esterilizar material de vidrio y otros
materiales slidos estables al calor.
Para el material de vidrio de laboratorio
se consideran suficientes dos horas de
exposicin a 160 C.
Incineracin:
La destruccin de los microorganismos

por combustin o cremacin.
En los laboratorios, las asas de
siembra se calientan a la llama de
mecheros Bunsen.
La incineracin tambin se utiliza en la
eliminacin de residuos hospitalarios.
Bajas Temperaturas
En general, el metabolismo de las bacterias se

inhibe a temperaturas por debajo de 0 C.
No matan a los microorganismos sino que
pueden conservarlos durante largos perodos de
tiempo.
Circunstancia aprovechada por los
microbilogos para conservar los
microorganismos indefinidamente.
Los cultivos de microorganismos se conservan
congelados a -70 C o incluso mejor en tanques
de nitrgeno lquido a -196 C.

seco: flama directa
Procedimiento simple
y eficaz, consiste en la
exposicin
de
un
objeto pequeo (asa de
cultivo) al efecto de la
llama
hasta
la
incandescencia
Foto tomada por Martnez., 2006
Para todos los microorganismos existe una temperatura de

crecimiento por encima de la cual disminuye su viabilidad.
La mayora de las macromolculas pierden su estructura y
su funcin por el proceso llamado desnaturalizacin.

seco: incineracin
Es el mejor sistema para

esterilizar
todos
aquellos productos en
los que no importa su
destruccin
Animales de laboratorio
infectados
Materiales de desecho
infectados
jeringas, cajas de
plstico, pipetas, guantes
etc.

radiacin
Radiacin electromagntica (luz)

Fenmeno de ondas continuas
Fenmeno de partculas discontinuas (quantas o
fotones)
Interaccionan con la materia
Radiaciones ionizantes: (gamma y X) tienen

suficiente energa para empujar los electrones
fuera de las molculas y ionizarlos. Se producen
H2, OH-, H2O2.
Espectro electromagntico
http://www.efn.uncor.edu/dep/biologia/intrbiol/fotosint.htm
Las microondas, la radiacin ultravioleta, los rayos x, las

radiaciones gamma y los electrones son tipos de radiacin
que pueden reducir el crecimiento microbiano.
La radiacin UV causa modificaciones o incluso roturas en
el DNA y puede provocar la muerte del organismo expuesto.

radiacin
Luz UV: menos energticas, no se ionizan, son

absorbidas por diferentes compuestos que
excitan electrones y los elevan a niveles
mayores de energa.
Esterilizacin fra
Luz Ultravioleta
Radicaciones desde 150-3900 .

Radiaciones de 2650 mayor eficacia bactericida.
Lmparas 2600-2700
Quirfanos, cuartos de llenado asptico, superficies
contaminadas, agua.
Poca capacidad de penetracin
Mecanismo de accin:
Es absorbida por materiales celulares y ms por los cidos
(pirimidinas)
Forma un dmero de la pirimidina en la cual dos
pirimidinas adyacentes se enlazan. Si los dmero no son
separados por enzimas intracelulares especficas, se inhibe
la relplicacin del DNA y puede haber mutaciones.
Campana de seguridad biolgica con una

fuente de radiacin ultravioleta
Madigan y col. 2001
Es una radiacin electromagntica con suficiente

energa para producir iones y otras molculas reactivas.
Mecanismo es degradar y alterar polmeros biolgicos

como el DNA y las proteinas.
La unidad de radiacin es el roentgen (medida de la

emisin de radiacin de una fuente).
1 gray=100 rad
200 gray
Rayos X
Letales para los microorganismos y formas

superiores de vida.
No son prcticos para el control

poblaciones microbianas porque:
Costo
Difciles de utilizar eficientemente
de
Rayos Gamma
Tienen mucha energa, son emitidas por istopos

radiactivos (Co60).
Longitud de onda mas corta, gran capacidad de

penetracin en la materia
Letales para todas las formas de vida.
Utilizados en la esterilizacin de materiales de gran

grosor o volumen.
Requiere gran diseo de equipo seguro y fuente de

radiacin para aplicarse a gran escala.
Rayos catdicos
Se establece un potencial de voltaje elevado entre el

nodo y el ctodo en un tubo al vaco, el ctodo emite
rayos de electrones llamados rayos catdicos o haz de
electrones.
Los electrones acelerados a velocidades extremas son

microbicidas.
Acelerador de electrones se usa para esterilizar material

quirrgico, drogas y otros materiales.
Poder de
penetracin limitado, pero logra la esterilizacin por
exposiciones muy breves.
Dosis letal de distintas

radiaciones
TIPO DE
Rayos
Del haz
Rayos
ORGANISMO
catdicos de
aceleradores
Van de Graft
Rayos x de la
fuente 3-Mev
vibrante del
capacitron
gamma del
CO60
0.1 0.25
0.45 0.55
0.1 0.25
0.15 0.25
0.03 0.5
0.5 2.1
0.2 0.4
1.5
0.5 2.0
0.25 1.15
0.35 0.4
0.2 0.3
0.25 1.0
0.3
0.25 1 .5
Vegetativo:
- No patgeno
- Patgeno
Esporas
bacterianas:
Mohos:
Levaduras:
0.5 1.0
Pelczar y col. 1982
3.- Radiaciones
A.- Radiaciones ionizantes

Rayos gamma
Rayos catdicos
B.- Radiaciones no ionizantes

Luz ultravioleta
Radiaciones
ionizantes
Rayos gamma
Las radiaciones gamma tienen mucha

energa y son emitidas por ciertos
istopos radiactivos como es el Co60.
Son difciles de controlar porque este
istopo emite constantemente los
rayos en todas direcciones.
direcciones
Estos rayos pueden penetrar
materiales,
materiales por lo que un producto se
puede empaquetar primero y despus
esterilizar.
Rayos catdicos
Radiacin con haz de electrones

Se usan para esterilizar material
quirrgico, medicamentos y otros
materiales.
Ventaja: el material se puede esterilizar
despus de empacado (ya que stas
radiaciones penetran las envolturas) y a
la temperatura ambiente.
ambiente
Radiaciones no
ionizantes
Luz ultravioleta:
Radiaciones con longitudes de onda

alrededor de 265 nm son las que tienen
mayor eficacia como bactericidas (200 295 nm).
La luz UV tiene poca capacidad para
penetrar la materia por lo que slo los
microorganismos que se encuentran en la
superficie de los objetos que se exponen
directamente a la accin de la luz UV son
susceptibles de ser destrudos.
Se usan para reducir la poblacin

microbiana en:
Quirfanos
Cuartos de llenado aspticos en la
industria farmacutica
Superficies contaminadas en la
industria de alimentos y leche.
Bodegas de carne refrigeradas
Ondas ultrasnicas
(sonicacin)
En general, los microorganismos

suspendidos en un lquido y sometidos
a la accin de ondas ultrasnicas de
altas intensidades (20,000 ciclos/seg.)
durante cierto tiempo se destruyen
porque se rompe la pared celular y
se pierde el contenido de la clula.
Se usan en tratamiento de pequeos
volmenes de agua

filtracin
La filtracin se utiliza para esterilizar lquidos, sobre

todo los que contienen compuestos termolbiles
suero de animales, soluciones de enzimas, algunas vitaminas
y antibiticos
Los filtros actan mecnicamente y por absorcin

electrosttica
Debido a su tamao los virus pueden no eliminarse
Tipos de filtros
Filtro de profundidad: hoja fibrosa,

asbesto o fibras de vidrio. Funcionan
como prefiltros para eliminar
particulas grandes.
Filtro de membrana: compuesto de

acetato de celulosa o de nitrato de
celulosa.
Filtro Nucleopore: compuesto de

policarbonato (10 micras de grosor),
utilizado
para
microscopia
electronica.
Esterilizacin por filtracin
Efecto de otros agentes fsicos sobre

los microorganismos
Desecacin
Detiene la actividad metablica, seguida de una

declinacin de la poblacin viable total
El tiempo de sobrevivencia varia dependiendo de
1) La clase de microorganismos
2) El material en el que, o con el que, desecan los
microorganismos
3) La terminacin del proceso de desecacin
4) Las condiciones fsicas a las cuales los microorganismos
son expuestos, por ejemplo luz, temperatura, humedad.

los microorganismos
Bajas temperaturas (congelacin)

En general, el metabolismo de las bacterias est inhibido a
temperaturas por debajo de 0 C.
Se emplea en la conservacin de microorganismos.
Liofilizacin (deshidratacincongelacin)
Los microorganismos son sometidos a gran deshidratacin
en estado de congelacin y despus a sellado al vaco
Los cultivos liofilizados de microorganismos permanecen
viables durante muchos aos

los microorganismos
Presin osmtica
Osmosis es la difusin de productos a travs de una

membrana semipermeable que separa dos soluciones de
diferentes concentraciones. Al cabo de esta difusin, la
concentracin es igual a ambos lados de la membrana.
Plasmlisis: cuando hay una gran concentracin de solutos al

exterior de las clulas estas se deshidratan
Plasmoptisis: cuando la concentracin de solutos en la solucin es
baja las clulas dejan pasar agua a su interior
A la mayor parte de los microorganismos las

concentraciones elevadas de sal (10 a 15%) y azcar (50 a
70%) los inhiben
Aplicacin: Conservacin de alimentos

los microorganismos
Electricidad.
Empleo de corriente elctrica de alta y baja frecuencia a
travs de lquidos para eliminar bacterias.
Acta elevando la temperatura y por cambios qumicos
iniciados por la corriente (produccin de cloro y ozono)
Aplicacin limitada: pasteurizacin de leche, jugos de
frutas y desinfeccin de agua.
Tensin superficial (lquido-aire)
Aplicacin de agentes fsicos en el

METODO
Calor hmedo:
Autoclave
Vapor fluyente o
agua hirviente
USOS RECOMENDADOS
LIMITACIONES
Esterilizacin de
instrumentos, lienzos,
utensilios y bandejas de
tratamiento, medios y otros
lquidos.
Sin efecto contra

organismos dentro de
materiales
impermeables al
vapor, no se puede
usar para artculos
sensibles al calor.
Destruccin de patgenos
no formadores de esporas,
ropa de cama, y vajillas.
No se puede
garantizar que
produzcan
esterilizacin en una
sola exposicin.

METODO
Calor seco:
Horno caliente
Incineracin
USOS RECOMENDADOS
LIMITACIONES
Para esterilizar materiales

impermeables o que se
daan por la humedad,
como aceites, vidrio,
instrumentos cortantes,
metales.
Destruyen los
materiales que no se
pueden someter a
temperaturas elevadas
por mucho tiempo.
Para objetos contaminados

desechables que no se
volvern a usar
Capacidad de
incinerador: debe ser
adecuada para
quemar cargas
grandes de manera
rpida y efectiva;
contaminante potencial
del aire.

METODO
Radiaciones:
Luz ultravioleta
Radiaciones
ionizantes
USOS
RECOMENDADOS
LIMITACIONES
Control de la
infecciones
trasmitidas por el aire,
desinfeccin de
superficies.
Debe ser absorbida

para ser efectiva pasa
a travs del vidrio
transparente objetos
opacos; irrita los ojos
y la piel, baja
penetracin.
Para la esterilizacin
de material quirrgico
sensible al calor y
otros materiales
usados en medicina
Caro y requiere
facilidades especiales
para su uso.

METODO
Filtracin:
Filtros de membrana
Filtros de fibra de
vidrio (HEPA)
Limpieza fsica:
Ultrasnica
Lavado
USOS
RECOMENDADOS
LIMITACIONES
Para esterilizar lquidos Los lquidos deben

biolgicos sensibles al estar relativamente
calor
libres de partculas
suspendidas
Desinfeccin del aire
Costosa
Efectiva para la
descontaminacin de
instrumentos delicados
No es efectiva sola,
pero como
procedimiento auxiliar
incrementa la
efectividad de otros
mtodos
Mano, pies, objetos
Limpia, reduce la flora

microbiana
Inhibicin
de la sntesis de la pared
celular.
Inhibicin de la sntesis proteica.
Inhibicin de la sntesis de cidos
nuclecos.
Alteracin de membrana celular.
Antagonismo metablico.
Inhiben
las enzimas de la transpeptidacin que

participan en los enlaces de las cadenas
polisacridos del peptidoglucano de la pared
celular bacteriana y activan las enzimas lticas
de la pared celular.
Por ejemplo: penicilina o ampicilina utilizadas
en el tratamiento de enfermedades como tos
ferina, meningitis, infecciones urinarias, etc.
Se
ligan a la subunidad 30S de ribosoma

bacteriano para inhibir la sntesis proteica y
causan errores de lectura del mRNA.
Se liga a la subunidad 50S del ribosoma y
bloquea la formacin de enlaces pptidos por
la inhibicin de la peptidil-transferasa.
Por ejemplo estreptomicina, gentamicina y
cloranfenicol utilizadas e el tratamiento de
neumona, tifus y gastroenteritis.
Inhiben
la DNA girasa bacteriana y as

interfieren en la replicacin del DNA y la
transcripcin.
Bloquea la sntesis de RNA unindose e
inhibiendo a la RNA polimerasa.
Por ejemplo: ciprofloxacino y rifampicina
utilizados en el tratamiento de la disentera y
la neumona.
Se
liga a la membrana plasmtica y altera su

estructura y propiedades de permeabilidad
Por ejemplo Polimixina B.
Inhiben
la sntesis del acido flico bloquea

la sntesis de tetrahidrofolato por la
inhibicin de la dihidrofolato reductasa.
por ejemplo sulfamidas y trimetoprima
utilizadas en el tratamiento de la disentera
e infecciones urinarias.
Filtracin
Membranas con poros de un tamao

determinado o materiales filtrantes. El
tamao del poro depender del uso al que
se va a someter la muestra.
Los microorganismos quedan retenidos en
parte por el pequeo tamao de los poros
del filtro y en parte por adsorcin a las
paredes del poro durante su paso a travs
del filtro debido a la carga elctrica del filtro y
de los microorganismos.
Debido al pequeo tamao de los virus,

nunca es posible tener certeza de que,
por los mtodos de filtracin que dejan
libre de bacterias una solucin, se van a
eliminar tambin los virus.
Son difciles de utilizar en lquidos con

muchos slidos suspendido
Segn el tamao del poro se puede

lograr esterilidad o reduccin de los
microorganismos
En las plantas de tratamiento de agua se
logra remover hasta el 90-99% de los
microorganismos filtrando el agua
previamente floculada y sedimentada
La filtracin se utiliza para

Emulsiones oleosas, aceites, algunos tipos
de pomadas.
soluciones termolbileS: lquidos biolgicos
(suero de animales, soluciones de
enzimas, algunas vitaminas y antibiticos).
Esterilizar soluciones oftlmicas,
soluciones intravenosas, drogas
diagnsticas, radiofrmacos, medios para
cultivos celulares, y soluciones de
antibiticos y vitaminas.
Existen tres tipos bsicos de filtros:
Filtros profundos o Filtros de profundidad:

consisten de un material fibroso o granular
prensado, plegado, activado, o pegado dentro de
los canales de flujo.
En este tipo de filtros la retencin de las
partculas se produce por una combinacin de
absorcin y de retencin mecnica en la matriz.
Filtros HEPA
Un filtro HEPA (High Efficiency Particulate

Air)
Est compuesto por pliegues de acetato
de celulosa que retienen las partculas
(includos los microorganismos) del aire
que sale de una campana de flujo laminar.
Membranas filtrantes: tienen una estructura

continua, y la retencin se debe
principalmente al tamao de la partcula.
Los filtros de membranas son discos de steres
de celulosa con poros tan pequeos que
previenen el paso de los microorganismos
Partculas ms pequeas al tamao del poro
quedan retenidas en la matriz del filtro debido
a efectos electrostticos.
Estos filtros son desechables.
Los filtros de membrana se utilizan en:

La esterilizacin de lquidos
En el anlisis microbiolgico de aguas ya
que concentran los microorganismos
existentes en grandes volmenes de
agua.
Filtro de
microfibras de
vidrio.
Electron
micrograph
Whatman
Filtros
de
membrana de
nitrocelulosa
Electron
micrograph
Schleicher
and Schuell
Millipore
PVDF membrane.
Electron
micrograph
Filtros de huella de nucleacin (Nucleoporo): son

pelculas muy delgadas de policarbonato que son
perforadas por un tratamiento conjunto con
radiacin y sustancias qumicas.
Son filtros con orificios muy regulares que
atraviesan la membrana verticalmente.
Funcionan como tamices, evitando el paso de toda
partcula con un tamao mayor al del poro.
10.3 AGENTES QUMICOS

Agente antimicrobiano
Compuesto qumico natural o sinttico que mata o

inhibe el crecimiento de los microorganismo.
Varan con respecto a su toxicidad selectiva
No selectivos: actan sobre todo los tipos de clulas
Selectivos: actan principalmente sobre micoorganismos
tiles para el tratamiento de las enfermedades infecciosas
Definiciones
Antisptico
Agentes qumicos que matan o inhiben el crecimiento de
los microorganismos y pueden aplicarse en tejidos vivos
dada su escasa toxicidad
Desinfectante
Productos qumicos que matan microorganismos y se usan
en objetos inanimados
Agentes esterilizante
Son desinfectantes que en condiciones apropiadas, matan
todos los tipos de vida microbiana, se usan para esterilizar
objetos inanimados y superficies
Control qumico antimicrobiano

Cada da empleamos una serie de compuestos
qumicos para el control de los
microorganismos
Aseo personal
Hogar
Laboratorios
Industria
Aplicacin de los agentes

desinfectantes
Muy tiles en aquellos casos en los que no se

puede usar el calor o la radiacin en la
descontaminacin o esterilizacin
Criterios de seleccin de agentes

qumicos antimicrobianos
Naturaleza del material que ser tratado

Piel, superficie inerte, lquidos
Tipo de microorganismos
Si se aplicar a bacteria, levadura, hongos, algas o
virus
Condiciones ambientales
Temperatura, pH, tiempo, concentracin y presencia
de material orgnico extrao
Caractersticas del desinfectante

ideal
Actividad antimicrobiana
Solubilidad
Estabilidad
No deber ser txica al hombre u otros animales
Homogeneidad
No deber reaccionar con material orgnico extrao
Toxicidad para los microorganismos a la temperatura
ambiente y a la del cuerpo.
Capacidad de penetracin
No deber corroer ni teir
Propiedad desodorante
Capacidad detergente
Disponibilidad
Mecanismos de accin de los productos

desinfectantes
Desnaturalizacin de protenas
Proceso de oxidorreduccin
Combinacin de grupos cidos con grupos
bsicos
Inactivacin de enzimas
Modificacin de la permeabilidad de la
membrana celular
Interferencia con grupos activos de las
protenas
Efecto de los agentes antibacterianos

sobre el crecimiento
Bacteriostticos
Se Inhibe el crecimiento, la clula no muere
Bactericidas
Mata a las clulas pero no da lugar a lisis
Bacteriolticos
Provoca la muerte celular por lisis
Principales grupos de agentes

qumicos antimicrobianos
Fenol y compuestos fenlicos

Alcoholes
Cloro
Halgenos
Metales pesados y sus compuestos
Colorantes
Detergentes
Compuestos de amonio cuaternarios
Acidos y Alcalis
Glutaraldehdo
Quimioestabilizadores gaseosos (xido de etileno, betapropiolactona, formol)
Fenol y hexaclorofeno: Actualmente no se

utilizan por su toxicidad.
Cresoles: derivados fenlicos que se utilizan

unidos a jabones y lejias para obtener
compuestos estables (Lisol, sotal etc).
Dependiendo de la concentracin pueden ser

bactericidas o bacteriosttico
Actan desnaturalizando protena y daando

membranas celulares.
Algunos
(hexilresorcinol)
considerablemente la tensin superficial.
Las esporas bacterianas y virus son ms resistentes

que clulas vegetativas. Altamente fungicidas.
Se emplean como desinfectantes: suelos paredes y

superficies.
reducen

Control de Microorganismos

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Control del crecimiento microbiano

1 Definicin de trminos ms frecuentes

Los egipcios empleaban fuego para esterilizar

Los griegos quemaban azufre para fumigar los

La ley de Moises obligaba a los hebreos a quemar

Principales razones para

Impedir la presencia de lama

Controlar las manchas y la

Importancia del control microbiano

Caso terico de desinfeccin

por unidad de volumen

por unidad de volumen

Cuando una poblacin microbiana se expone a un

Factores que afectan el control

La concentracin del agente de control

Condiciones ambientales locales

El estado fsico de el microorganismo

Para determinar el nmero de

Disminucin progresiva en el nmero de microorganismos

Efecto de la concentracin del

Efecto de diferentes concentraciones

El calor es ms eficaz en un medio

La presencia de materia orgnica

No permite que el agente llegue al

Modo de accin de los agentes

Daan las protenas y los

Esterilizacin: Proceso de destruir todas las formas de vida

Saneamiento: Todas las acciones necesarias para reducir la

Desinfectante: Agente por lo regular qumico, capaz de

Antisptico: Toda sustancia que se opone a la sepsis o impide

Agentes antimicrobioanos: Interfieren en el crecimiento y

Agentes teraputicos: agentes antimicrobianos utilizados en el

Germicida (microbicida): Agente que mata las formas en

Bactericida, fungicida, viricida, esporocida: se

Bacteriostasis: Supresin del desarrollo de bacterias

Curva y velocidad de muerte bacteriana

Muerte bacteriana: Prdida irreversible de la capacidad de

900 000 = 90%

Curva y velocidad de muerte de Escherichia coli

Condiciones que influyen en la accin

Estado fisiolgico de las bacterias

Condiciones que influyen en la

Cundo est muerto un

Esterilizacin por calor

Modo de accin de los agentes

Dao a la pared celular

Alteracin de la permeabilidad celular

Alteracin de las molculas de protena y de

Modo de accin de los agentes

Inhibicin de la accin enzimtica

Inhibicin de la sntesis de cidos nuclicos

Clasificacin de los mtodos fsicos para el

Otros mtodos fsicos para el control de

A.- Esterilizacin por calor

B.- Esterilizacin por calor seco:

Hay que distinguir entre calor hmedo y

El calor hmedo mata

La accin letal del calor es una

Las esporas de Clostridium botulinum

Control de microorganismos por

Control de microorganismos por

Calor seco destruye al oxidar sus

Punto trmico letal: es la temperatura ms baja a la

Tiempo trmico letal: es el tiempo ms corto necesario