ADN

RECOMBINANTE

GENERALIDADES

DEFINICIN
El trmino DNA recombinante hace referencia a
la creacin de nuevas combinaciones de
segmentos o de molculas de DNA que no se
encuentran juntas de manera natural. Aunque el
proceso gentico de la recombinacin produce
DNA recombinante, este trmino se reserva a las
molculas de DNA producidas por la unin de
segmentos que provienen de diferentes fuentes
biolgicas.

 La tecnologa del DNA recombinante utiliza

tcnicas que provienen de la bioqumica de los
cidos nucleicos unidas a metodologas genricas
desarrolladas originalmente para la investigacin
de bacterias y de virus. La utilizacin del DNA
recombinante es una herramienta poderosa para
el aislamiento de poblaciones puras de secuencias
especficas de DNA a partir de una poblacin de
secuencias mezcladas. Los procedimientos
bsicos incluyen una serie de pasos:

ENZIMAS DE RESTRICCIN
Las enzimas de restriccin reconocen una secuencia especfica de
nucletidos (denominada sitio de restriccin) de una molcula de
DNA de doble cadena, y cortan el DNA por esa secuencia.

VECTORES
Son esencialmente molculas de DNA transportadoras.
1. Debe poder replicarse independientemente junto con el segmento de
DNA que transporta.
2. Debe contener algunos sitios de corte para enzimas de restriccin,
presentes slo una vez en el vector.
3. Debe tener algn marcador de seleccin para poder distinguir las
clulas husped que transportan el vector de las que no lo contienen.
4. El vector de la clula husped debe ser fcil de recuperar.
Actualmente se utilizan tres tipos principales de vectores: los
plsmidos, los bacterifagos y los csmidos.

TRANSFORMACIN
DEL DNA

Casos

Streptococcus
Bacillus
Thermoactinomyces
Neisseria
Moraxella
Acinetobacter
Azotoacter
Pseudomonas

TRANSFORMACIN
ARTIFICIAL

TRANSDUCCIN

TIPOS
Generalizada

Transfiere
cualquier parte
del genoma
bacteriano.
bacteriano.
DNA del virus no
se incorpora a la
cpsida, solo el
DNA bacteriano.

Especializada

Porciones
especficas del
genoma
bacteriano.

CLONACIN DE DNA EN
ESCHERICHIA COLI.

SEGUNDO PASO

CLONACIN EN
HESPEDES
EUCARITICOS

Vectores de Levadura

Son molculas que

transfieren y
replican
fragmentos de
DNA
Levadura hay un
plsmido de origen
natural plsmido
2 micras.

Cromosomas Artificiales
de levadura

Biblioteca de ADN
Es una coleccin de los fragmentos derivados del genoma de un organismo
determinado
uno
uno,
vector de clonacin.
Rotura delinsertado,
ADN purificado
delpor
vector
poren
unaun
enzima
de restriccin.
Resultado
ADN genmico a clonar se reduce a fragmentos de
tamao apropiado por una enzima de restriccin

Separacin de fragmentos (centrifugacin

isopicnica)
Mezcla de fragmentos por el vector linearizado y
ligacin.

Transformacin de las clulas bacteriana.

Gran poblacin de
bacteria o fagos,
siendo cada uno de
ellos portador de
una molcula de
ADN diferente

Biblioteca de cADN
Librera de ADN mas especializada, solo incluye aquellos
genes que estn siento expresados en un organismo
determinado e incluso ciertos tejidos o clulas.
Se extrae mRNA total
del organismo

Se produce ADN
complementario(cADN)
mediante la
transcriptasa inversa.

Los fragmentos de
doble hebra se insertan
en un vector adecuado y
se clonan.

Biblioteca de cADN

Identificacin de un clon con el fragmento

de ADN deseado

Mtodos de anlisis de las

secuencias clonadas

Transferencia de Southern y
Northern
1
2

El DNA clonado se corta en fragmentos.

Estos fragmentos se separan por

electroforesis en gel.

Se transfieren a un filtro de un material,

normalmente nitrocelulosa o un
derivado del nylon

Filtro se coloca en una bolsa sellada con

calor con una solucin que contiene
sonda marcada

Se lava la sonda no unida, y se

visualizan los fragmentos hibridados

Secuenciacin de DNA (Sanger)

Transferencia de DNA

Clulas vegetales
Bacteria: Agrobacterium
tumefaciens
Transfiere un segmento
de ADN conocido como TDNA o ADN-T
No
afecta
a
plantas
monocotiledneas : Maiz,
el trigo, otros granos

Clulas de mamfero

APLICACIONES
Investigacin
y
medicina
Es evidente que la produccin
de protenas de utilidad
mdica
como
la
somatostatina, la insulina, la
hormona del crecimiento
humana y losinterferones, es
de gran importancia prctica.

En la agricultura
Tambin es posible evitar los mtodos tradicionales de mejora gentica y transferir directamente las
caractersticas deseables a animales y plantas importantes desde el punto de vista de la agricultura. Estas
tcnicas tienen la capacidad de aumentar las tasas de crecimiento y la produccin global de protenas de
los animales de granja.

La Clonacin
La clonacin recordemos que los plsmidos son molculas de ADN
circulares, pequeas, que se encuentran en las bacterias por fuera del
ADN cromosmico. Dado que se adaptan a albergar otro pedazo de
ADN, se abre la posibilidad de poner un gen determinado (o un
tramo de ADN determinado) en un plsmido circular, generando un
ADN recombinante. En estas circunstancias el plsmido est
funcionando como un vector: es capaz de llevar el trozo de ADN
(que denominamos inserto) mantenerlo, tenerlo aislado, lo cual era
uno de los propsitos de la manipulacin gentica.

 Enzimas de restriccin
Uno de los avances ms importante en los inicios de la biologa molecular, fue el
descubrimiento de las endonucleasas de restriccin, es decir de enzimas que
pueden cortar el ADN y que tienen la ventaja de que lo cortan en sitios concretos.
Fueron descubiertas en bacterias, y son enzimas que estas bacterias usan para
destruir ADN que ingresa a ellas, por ejemplo ADN de virus bacterifagos.

 Nuevas tendencias
Bioplsticos
Los plsticos comunes son polmeros creados a partir del petrleo, que es una fuente de
combustible fsil no renovable. Cuando se acabe el petrleo, podramos quedarnos no slo
sin combustible para nuestros autos, sino tambin sin plstico. Esta posibilidad ha
estimulado a la ciencia para crear bioplsticos. Estos son creados a partir de productos de
las plantas, a menudo a travs de mtodos de ADN recombinante. Los cientficos han
creado un gen que producir un compuesto casi idntico al plstico comercial y su
aplicacin es hoy en da una zona caliente de la investigacin. De tener xito, los cientficos
se habrn asegurado de que nunca nos quedemos sin plstico o tengamos que preocuparnos
sobre la polucin que produce la fabricacin de plstico a partir de las antiguas tecnologas
no renovables.