ENZIMOLOGA CLNICA

DRA. ALICIA FERNNDEZ GIUSTI

AGOSTO 2012

DEFINICIN
Las

enzimas son biocatalizadores de

naturaleza proteica
Todas
las
reacciones
qumicas
del
metabolismo celular se realizan gracias a la
accin de catalizadores o enzimas
La sustancia sobre la que acta una enzima
se denomina sustrato
No todas las enzimas son protenas; existen
molculas de RNA con actividad cataltica, las
llamadas ribozimas

IMPORTANCIA BIOMDICA DE LAS ENZIMAS

Son

indispensables para la desintegracin de

los nutrientes con el fin de proporcionar energa
para la contraccin muscular y la unin de las
unidades de construccin en protenas, DNA,
membranas, clulas y tejidos
La deficiencia en la cantidad o de la actividad
cataltica de las enzimas se debe a defectos
genticos, deficiencia de nutrientes o toxinas

MECANISMO DE ACCIN

La sustancia sobre la que acta la enzima se

llama sustrato.
El sustrato se une a una regin concreta del
enzima, llamada centro activo.
El centro activo comprende :
(1) un sitio de unin formado por los
aminocidos que estn en contacto directo
con el sustrato y
(2) un sitio cataltico, formado por los
aminocidos directamente implicados en el
mecanismo de la reaccin .
Una vez formados el producto la enzima
puede comenzar un nuevo ciclo de reaccin
4

Holoenzima = Apoenzima + Cofactor

 1.-

El enzima y su sustrato

2.-

Unin al centro activo

3.-

Formacin del producto

6

Hexokinasa
(Glucokinasa en hgado y clulas B del pncreas)

NOMENCLATURA

Las

enzimas eran nombradas atendiendo al

sustrato sobre el que actuaban, aadindole
el sufijo -asa o haciendo referencia a la
reaccin catalizada

Unin

Internacional de Bioqumica (IUB) ha

elaborado un sistema en el que cada enzima
tiene un nombre nico y un nmero de cdigo

Las

enzimas se agrupan en seis clases, cada

una con varias subclases.
8

CLASIFICACIN

Nombre sistemtico:

Grupo transferido

ATP: hexosa fosfotransferasa

Donador

Aceptor

Grupo

Nmero sistemtico

Enzyme
Comission

Subgrupo

EC 2.7.1.1

Enzima

Sub-subgrupo

Nombre comn:

Hexokinasa

10

1.- Deshidrogenasas u oxidoreductasas

EC 1.1.3.4

1. Oxido-reductasas
(Catalizan reacciones de
oxidorreduccin)

Ared + Box

Aox + Bred

Glucosa : O2
Dador

oxidorreductasa

Aceptor

Nombre comn:
Glucosa oxidasa

A : es el reductor o dador electrnico; en

el curso de la reaccin se oxida (pierde
electrones o hidrgenos)

B : es el oxidante o aceptor electrnico;

en el curso de la reaccin se reduce
(gana electrones o hidrgenos)
11

2: Transferasas (mutasas)
Catalizan reacciones de transferencia de grupo :

2.1.-.2.2.-.2.3.-.2.4.-.2.5.-.2.6.-.2.7.-.2.8.-.Ejemplo:

Grupos monocarbonados
Grupos aldehido o ceto
Aciltransferasas
Glicosiltransferasas
Alquil- o Ariltransferasas
Grupos nitrogenados
Grupos fosfato
Grupos sulfato
Nombre comn:
hexokinasa

EC
2.7.1.1
ATP: D-Hexosa
Fosfotransferasa
Dador: Aceptor - Grupo transferido - transferasa

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3: Hidrolasas
Catalizan reacciones de hidrlisis

A-B + H2O

Clasificacin de las hidrolasas :

3.1.-.- Esterasas (carboxilesterasas,
fosfoesterasas, sulfoesterasas) fosfatasas
3.2.-.- Glicosidasas: amilasa
3.3.-.- ter hidrolasas
3.4.-.- Pptido hidrolasas
3.5.-.- Acil anhdrido hidrolasas,etc

A-OH + H-B

.-No se suelen utilizar

nombres sistemticos en
las hidrolasas
.-Muchas de ellas
conservan el nombre
primitivo: Tripsina,
Pepsina, Papana,
13

4: Liasas
Catalizan reacciones reversibles de adicin de un grupo a
un doble enlace:Entre C y C ;C y O ;C y N

AXB

A=B + X
-

COO
CH
CH

COOFumarato
(trans-)

H2 O

COO
HO CH
CH2

COOL-Malato
14

5: Isomerasas
Catalizan reacciones de isomerizacin

Algunas reacciones isomersicas:

- Racemasas
- Oxidorreductasas intramoleculares
- Mutasas o transferasas intramoleculares

15

6: Ligasas
Catalizan la unin de dos grupos qumicos a expensas
de la hidrlisis de un enlace de alta energa :ATP

A + B + ATP

A-B + ADP + Pi

O bien

C + D + ATP

C-D + AMP + PPi

16

ISOENZIMAS

Tienen distinta estructura molecular aunque su funcin es

similar. Se llaman isozimas o isoenzimas, podemos
observar la existencia de isoenzimas en funcin de:
tipo de tejido: Por ejm., la LDH presenta isozimas distintos
en msculo y corazn
el compartimento celular donde actan por ejemplo, la
malato deshidrogenasa del citoplasma es distinta a la de
mitocondria
el momento concreto del desarrollo del individuo: Por
ejemplo, algunos enzimas de la gliclisis del feto son
diferentes de los mismos enzimas en el adulto. Un
ejemplo de isoenzima la hexokinasa: presenta, al menos,
cuatro formas distintas : Heptica, Cerebral, Muscular,
Eritrocitaria
17

Enzimas plasmticas funcionales

Renovacin tisular

Actividad
muscular
Actividad
enzimtica
fisiolgica

Enzimas plasmticas
especficas

rganos secretores

18

ENZIMOLOGA CLNICA
Es

la aplicacin del conocimiento de las

enzimas en el diagnstico, tratamiento,
evolucin y pronstico de las enfermedades.
Se utilizan como marcadores de ciertas
patologas
En el diagnstico de enfermedades genticas

19

LAS ENZIMAS COMO MARCADORES

DE LESIN TISULAR
Las

enzimas cumplen su actividad en el

interior celular, pero tambin se les puede
encontrar en los lquidos biolgicos
Algunas enzimas ejercen su funcin en el
plasma o suero, ej. LCAT, o los factores de
coagulacin
Las enzimas plasmticas, del LCR., lquido
asctico o pleural se encuentran en bajos
niveles de concentracin

20

ENZIMAS PLASMTICAS

Alteraciones de la concentracin enzimtica

en suero :
1. Aumento de la
actividad enzimtica
(a). Incremento patolgico de la
permeabilidad de membrana
(b). Muerte y destruccin celular

2. Disminucin de la
actividad enzimtica:
(a). Intoxicaciones
(b). Enfermedades crnicas
(c). Alteraciones del estado
nutritivo
(d) Falta de cofactores

(c). Induccin enzimtica

(d). Proliferacin celular

22

Enzimas con inters diagnstico

1. Aminotransferasas
2. Creatin kinasa
3. Fosfatasa alcalina
4. -Amilasa
5. Fosfatasa cida
6. Lactato deshidrogenasa (LDH)
7. -Glutamil transferasa (GGT)
8. Lipasa

23

Aminotransferasas (Transaminasas)
Catalizan la interconversin reversible de aminocidos
y cetocidos. Utilizan piridoxal fosfato como cofactor
B6

COOH
H2N CH
R1

COOH
+ C O
R2

COOH

COOH

C O + H2N CH
R1

R2

Su papel es importantsimo en el metabolismo de

aminocidos.
En clnica se determinan las siguientes:
EC 2.6.1.1, Aspartato aminotransferasa (AST, TGO)
EC 2.6.1.2, Alanina aminotransferasa ( ALT, TGP)

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Aspartato aminotransferasa
EC 2.6.1.1 (AST, TGO)
COO-

COO+

H3N

CH

C
+

CH2
-

COO

Aspartato

CH2

B6

COOC

CH2

CH2

COO

-Cetoglutarato

COO

Oxalacetato

COO+

H3N CH
CH2
CH2
COOGlutamato

Aparece en citosol y mitocondrias de tejidos metablicamente muy activos

La TGO se libera de clulas enfermas en el suero. Su nivel se eleva en el suero
ante afecciones hepticas y despus del infarto al miocardio.

25

Alanina aminotransferasa
EC 2.6.1.2 (ALT, TGP)
-

COO

COO
+

H3N CH
CH3

C O
+

CH2

C O
CH3

CH2
-

Alanina

B6

COO-

COO

-Cetoglutarato

Piruvato

COO+

H3N CH
CH2
CH2
COOGlutamato

Enzima citoslica, de elevada concentracin en el parnquima heptico.

La TGP tambin puede estar elevada despus del infarto al miocardio.
Se considera casi especfica de lesin heptica.

26

Creatino kinasa, EC 2.7.3.2 (CK, CPK)

CH3
HN C

N CH2 COOH
NH2

Creatina

ATP

CH3

ADP
HN C

N CH2 CO O P ONH2

O-

Creatin fosfato

Creatin fosfato es una transferasa que cataliza la formacin de ATP requerido

por los sistemas contrctiles o de transporte.
Es el prototipo de los compuestos conocidos como fosfgenos.
La CPK es importante en el metabolismo energtico, se encuentra en el
corazn, el msculo esqueltico y el cerebro.

27

Isoenzimas de la CPK
+
La CK se presenta en forma de tres isoenzimas
especficas de tejido:

MM

MB

BB

- Forma MM (msculo esqueltico)

- Forma MB (msculo miocrdico)
- Forma BB (cerebro)
Las isoenzimas se distinguen electroforticamente
o por mtodos inmunolgicos
La isoenzima MB es un marcador precoz de
infarto de miocardio.
En el infarto al miocardio, puede ocurrir elevaciones
de STGO ,LDH y beta hidroxibutirato dehidrogenasa y de
CPK., en el infarto pulmonar slo de las tres primeras.

28

Fosfatasa alcalina, EC 3.1.3.1

O
R O P O- + H 2 O
O-

O
R OH + HO P OO-

Hidroliza con baja especificidad fosfomonosteres, a un pH

alto (8 -9 de ah el nombre)
Aparece en gran cantidad de tejidos como seo, hgado, intestino
y placenta

29

La fosfatasa alcalina presenta varias isoenzimas:

- sea
- Heptica
- Intestinal
- Placentaria
Las ms importantes son las dos primeras. Se pueden distinguir
por su termoestabilidad, siendo la sea ms termolbil.

sea: Propia del tejido seo en crecimiento: elevacin fisiolgica en

la adolescencia.
Se encuentra elevada en muchas enfermedades seas, como
osteomalacia o por invasin sea por cncer localizado en mamas,
pulmones o prstata.
Heptica: Propia de las clulas del rbol biliar: se eleva en las
colestasis (obstrucciones biliares)

30

Fosfatasa cida, EC 3.1.3.2

O
R O P O- + H 2 O
O-

O
R OH + HO P OO-

Hidroliza fosfomonosteres con baja especificidad. Presenta

varias isoenzimas, una de las cuales (Fosfatasa cida prosttica)
es un marcador muy fiable del cncer de prstata y se emplea
en el diagnstico precoz

31

Alfa-Amilasa, EC 3.2.1.1
Enzimas digestivas producidas por las glndulas
salivales, el pncreas y la pared intestinal para facilitar
la digestin del almidn, rompen las uniones de
polisacridos alfa 1-4, dando lugar a dextrano, maltosa
y algunas molculas de glucosa
Es un marcador muy importante de afecciones
pancreticas agudas (pancreatitis). Puede incluso
aparecer en la orina, debido a su bajo peso molecular
(amilasuria)

32

Lipasa EC 3.2.1.2
Hidrolasa

que acta sobre los TAG hasta sus

constituyentes cidos grasos y glicerol,
liplisis que se efecta en el tejido adiposo
con produccin de cidos grasos libres en el
plasma.
La lipasa pancretica, permite la digestin y
absorcin de los lpidos
Aumenta en el suero en pancreatitis aguda

Deshidrogenasa lctica LDH

(EC 1.1.1.27)

Cataliza la reaccin reversible de

lactato a piruvato
La LDH est constituida por
cuatros subunidades.
Existen dos tipos de subunidades
diferentes, lo que explica la
existencia
de
5
isoformas
distintas
que
poseen
una
movilidad electrofortica diferente
que permite distinguirlas.
Puede estar elevada despus de
infarto al miocardio y durante
muchas
enfermedades
del
hgado.
Tambin puede estar elevada en
anemia hemoltica.

34

Patrn isoenzimtico de la LDH de suero en

infarto de miocardio y en hepatitis aguda

LDH 1

LDH5

35

g-Glutamil transferasa, EC 2.3.2.2 (GGT)

GSH + aa

-Glu-aa + Cys-Gly

Cataliza una reaccin entre un tripptido: el glutation y un aminocido

para formar un gama-glutamil aminocido y cisteinil glicina.
Tiene un importante papel en el transporte de aminocidos a travs de
membranas.
Es un indicador sensible de enfermedades del hgado.
Es una enzima inducible, y su concentracin en suero aumenta
con xenobiticos (alcohol, drogas, etc.)

36

Enzimas sricas de importancia clnica

Aspartato aminotransferasa (AST/TGO)

Valores normales: < 40U/ml
Aumento importante: Infarto de miocardio, hepatitis, traumatismos

Alanina aminotransferasa (ALT/TGP)

Valores normales: < 50 U/ml
Aumento importante: Hepatitis

Alfa-amilasa
Valores normales: <50U/ml
Aumento importante: pancreatitis aguda, cncer de pncreas

Lipasa
Valores normales: 20-140 U/ml
Aumento importante: pancreatitis aguda y en el cncer de
pncreas
37

Enzimas sricas de importancia clnica

Gamaglutamil transpeptidasa (GGT)

Valores normales: < 35U/ml en varones y <25U/ml en

mujeres
Aumento importante: Hepatitis vrica, obstruccin biliar,
metstasis hepticas, enf. alcohlica

Deshidrogenasa lctica (LDH)

Valores normales: < 120-230 U/ml

Aumento importante: infarto de miocardio (LDH1),
hepatitis vricas (LDH4, LDH5)

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Causas mas frecuentes de elevacin de

transaminasas
Causas hepticas

Causas extrahepticas

Consumo excesivo de alcohol

Enfermedad celiaca

Medicamentos

Miopatas hereditarias o
adquiridas

Hepatitis viral

Ejercicio intenso

Hgado graso

Sarcoidosis

Hepatitis autoinmune

Patologa de vas biliares

Hemocromatosis

Neoplasias con metstasis

Enzimas sricos en la enfermedad cardiaca

Creatn fosfoquinasa (CPK) < 160 U/L (isoenzima mb)

Lctico deshidrogenasa (LDH)< 120-230 U/L;

isoenzima1 (15-25%)

Aspartato aminotransferasa (AST;TGO) < 40 U/L

Tras el infarto, hay una liberacin de protenas
intracelulares de las clulas daadas.
La primera en ser detectada es la troponina (5-10 h
post infarto), seguida de la CPK-MB (pico a 1 da), y
finalmente la LDH 1, cuyo mximo se alcanza a los 2-3
das post infarto

CPK-MB

TGO
LDH 1

41

Troponinas en IMA

PRINCIPALES ENZIMAS SRICAS EN EL

DIAGNSTICO CLNICO
ENZIMA SRICA

PRINCIPAL USO DIAGNSTICO

Aminotransferasas
Aspartato aminotransferasa (TGO)

Infarto de miocardio

Alanina aminotransferasa (TGP)

Hepatitis viral

Amilasa y lipasa

Pancreatitis aguda

Creatina kinasa (CPK)

Trastornos musculares e infarto de

miocardio

Gama glutamil transpeptidasa (GGT)

Enfermedades hepticas
Alcoholismo

Deshidrogenasa lctica (LDH)

(isoenzimas)

Infarto de miocardio

Fosfatasa cida

Carcinoma metastsico de prstata

Fosfatasa alcalina
(isoenzimas)

Trastornos seos y enfermedades

hepticas obstructivas
43

ENZIMAS EN EL DIAGNSTICO DE ENFERMEDADES

GENTICAS
Gracias a tcnicas basadas en el rendimiento cataltico
y la especificidad de la catlisis enzimtica, se pueden
detectar las mutaciones genticas:
PCR (reaccin en cadena de la polimerasa), analiza el
DNA en muestras biolgicas y forenses

RFLP (polimorfismo de longitud del fragmento de

restriccin), facilita la deteccin prenatal de trastornos
hereditarios como rasgo drepanoctico, talasemia B,
fenilcetonuria infantil y enfermedad de Huntington

ENZIMAS EN EL DIAGNSTICO DE ENFERMEDADES

INFECCIOSAS

Ensayo

inmunoenzimtico (ELISA, EnzymeLinked ImmunoSorbent Assay).

Esta tcnica detecta una amplia variedad de
agentes infecciosos. El mtodo se utiliza en la
deteccin de virus sincial respiratorio.
Chlamydia
trachomatis,
Neisseria
gonorrhoeae, rotavirus, adenovirus, virus
hepatitis, virus varicela-zoster y HIV (Virus de
Inmunodeficiencia Humana).

CONCLUSIONES
Las

enzimas son catalizadores biolgicos

eficaces y altamente especficos
El anlisis de las enzimas plasmticas ayudan
al diagnstico, pronstico y evolucin de las
enfermedades
A travs de la terapia gnica se logra
subsanar las deficiencias o los defectos en la
funcin de las enzimas

FIN

47