Pontificia

Universidad
Catlica del
Ecuadorn

Elaborado por: Vanesa Carrera

IMPORTANCIA BIOMDICA
o La cintica enzimtica es el rea de la bioqumica

relacionada con la determinacin cuantitativa de las

velocidades de las reacciones que catalizan las enzimas y
el estudio sistemtico de los factores que afectan dichas
velocidades.
o Un conjunto complejo y equilibrado de actividades
enzimticas es fundamental para mantener la
homeostasis.
o Es importante entender la cintica de las enzimas para
saber cmo las condiciones fisiolgicas adversas como
anoxia, acidosis y alcalosis metablicas, toxinas y agentes
farmacolgicos afectan la homeostasis.

oEl anlisis cintico permite conocer el nmero y

orden de los pasos mediante los cuales las enzimas
transforman a los sustratos en productos.
La cintica de las enzimas juega un papel
o
importante en el descubrimiento de los frmacos, la
farmacodinmica comparativa y determina el modo
de accin de los frmacos.

LAS REACCIONES QUMICAS

SE DESCRIBEN POR MEDIO DE
ECUACIONES BALANCEADAS
En una ecuacin qumica balanceada se presentan las especies
qumicas iniciales (sustratos) presentes y las nuevas especies
qumicas (productos) formados por una reaccin qumica
particular, todas en sus proporciones correctas o
estequiomtricas.

A y B : sustratos
P y Q : productos
reaccin reversible

- Para la reaccin (1), si A y B forman P y Q, entonces P

y Q tambin forman A y B. La designacin de un
reactivo particular como sustrato o producto es, por
tanto, un tanto arbitraria ya que los productos para una
reaccin escritos en una direccin son los sustratos
para la reaccin inversa.
- El trmino productos suele utilizarse para designar
los reactivos cuya formacin se favorece desde el punto
de vista termodinmico, entonces la flecha se
representa a menudo con una sola flecha como si fueran
irreversibles.
Las flechas unidireccionales se

A+BP+Q

utilizan para describir las reacciones

en las clulas vivas donde los
productos de la reaccin se
consumen de inmediato en una
reaccin posterior catalizada por
enzimas y la reaccin en condiciones
fisiolgicas es funcionalmente
irreversible

LOS CAMBIOS DE ENERGA

LIBRE DETERMINAN LA
DIRECCIN Y EL ESTADO DE
EQUILIBRIO DE LAS
REACCIONES QUMICAS
El cambio de la energa libre de Gibbs G
describe tanto la direccin hacia la que procede
una reaccin qumica, como la concentracin de
los reactivos y productos que se tienen en el
equilibrio.

El G para una reaccin qumica es igual a la suma de

las energas libres de formacin de los productos de
la reaccin Gp menos la suma de las energas libres
de formacin de los sustratos GS. Mediante G0 se
denota el cambio de energa libre que acompaa a la
transicin desde el estado estndar,
concentraciones uno molar de sustratos y productos,
hasta el equilibrio.

G0 = Estado estndar de protones 10-7 M,

pH 7.0

Si la energa libre de formacin de los productos es

menor que la de los sustratos, el signo G0 y G0 es
negativo, lo que significa que la reaccin como est
escrita favorece en a direccin de izquierda a
derecha. A estas reacciones se les denomina
espontneas. Con el signo y la magnitud del cambio de
energa libre se determina hasta dnde procede la
reaccin.
Keq : constante de
equilibrio

R : constante de los
gases (1.98cal/mol/k, o
bien, 8.31 J/mol/K)
T : temperatura
absoluta en K

La constante Keq es igual al producto de las

concentraciones de los productos de la reaccin,
cada una elevada a su coeficiente estequiomtrico,
dividido entre el producto de los sustratos, cada
uno elevado a su coeficiente estequiomtrico.

Para la reaccin: A + B P + Q

Para la reaccin: A + A P

G0 se podra calcular si se conocen las concentraciones de

sustratos y productos presentes en equilibrio.

* Si G0 es un nmero negativo, Keq ser mayor que

la unidad y la concentracin de los productos en el
equilibrio es mayor que la de los sustratos.
*

Si G0 es positivo, Keq es menor que la unidad y

favorece la formacin de sustratos.

G0 es una funcin exclusivamente de los sustratos inicial y

final de las especies reactivas, por lo que slo proporciona
informacin acerca de la direccin y estado de equilibrio de
la reaccin.
El G0 es independiente del mecanismo de la reaccin y, por
consiguiente, no da informacin respecto a la
velocidad de la reaccin.

LA VELOCIDAD DE REACCIN
SE DETERMINA POR SU
ENERGA DE ACTIVACIN

Las reacciones pasan por

estados de transicin
En esta ecuacin se ilustra una
reaccin de desplazamiento en la que
un grupo entrante E desplaza a un
grupo saliente L, unido inicialmente a
R.

A la mitad del desplazamiento, el enlace entre R y L ya

se debilit pero an no se corta por completo, y el nuevo
enlace entre E y R todava no se forma del todo. Este
intermediario transitorio, en el que no existe sustrato
libre ni producto, se denomina estado de transicin,
transicin E
RL. Las lneas punteadas representan los enlaces
parciales que estn experimentando formacin o
rotura.
Se considera adems, que la ecuacin anterior consta de
dos reacciones parciales, donde la primera
corresponde a la formacin (F) y la segunda al
decaimiento posterior (D) del intermediario del estado
de transicin. Al igual que con todas las reacciones, los
cambios caractersticos de la energa libre,
Gf y GD se relacionan con toda reaccin
parcial.

Para la reaccin global,

G es la suma de Gf y
Gd.
En muchas reacciones
hay varios estados de
transicin, cada uno con
un cambio particular de
energa libre.

Para estas reacciones, el G global representa la suma de

todos los cambios de energa libre relacionados con la formacin y
decaimiento de todos los estados de transicin. Por consiguiente,
no es posible inferir a partir del G global el nmero o tipo de
estados de transicin por los que atraviesa la reaccin.

La termodinmica global no especifica nada

acerca de la cintica.

Gf DEFINE LA ENERGA DE
ACTIVACIN
Para la formacin de los intermediarios del estado de
transicin es necesario superar las barreras de energa.
Al Gf se le conoce a menudo como la energa de
activacin, Eact, la energa requerida para superar una
determinada barrera de energa.
La facilidad, y por consiguiente la frecuencia con la cual
supera esta barrera tiene una relacin inversa con Eact.
Por ello, los parmetros termodinmicos que determinan
qu tan rpido se efecta una reaccin son
los valores de Gf para la formacin de los
estados de transicin por los que pasa la reaccin.

velocidad

significa proporcional a
La energa de activacin para la
reaccin que procede en direccin
opuesta a la sealada es igual a -GD

DIVERSOS FACTORES
AFECTAN LA VELOCIDAD DE
REACCIN
La teora cintica, tambin conocida como teora de colisiones,
establece que para que dos molculas reaccionen deben:
1) aproximarse entre s a la distancia de formacin del
enlace, o bien chocar.
2) deben poseer suficiente energa cintica para superar la
barrera de energa y alcanzar el estado de transicin.

Cualquier cosa que incremente la frecuencia o

energa de colisin entre los sustratos
aumentar la velocidad de la reaccin en la
que participan.

TEMPERATURA
El aumento de la temperatura incrementa la energa cintica de las
molculas.

El nmero total de molculas cuya energa cintica excede

la barrera de energa Eact (barra vertical) para la
formacin de productos se incrementa
desde la
temperatura baja (A), pasando por la temperatura
intermedia (B) hasta la alta (C).
Al incrementarse la energa cintica de las molculas
tambin se incrementa su movimiento y, por consiguiente, la
frecuencia con la que chocan y la velocidad de la reaccin.

CONCENTRACIN DE
REACTIVOS
La frecuencia de colisin de las molculas es
directamente proporcional a sus concentraciones.
Para dos molculas distintas A y , la frecuencia con
la que se chocan se duplica si la concentracin de A o
de B aumenta al doble.
Si se duplican las concentraciones de A y B, se
incrementa cuatro veces la probabilidad de colisin.
Para una reaccin qumica que se efecta a
temperatura constante y en la que participan una
molcula de A y una de B.

A+BP

Velocidad [A][B]

El nmero de molculas que

posea energa cintica suficiente
para vencer la energa de
activacin ser una constante.
La cantidad de colisiones con
suficiente energa para producir
el producto P es directamente
proporcional a la cantidad de
choques entre A y B y, por
consiguiente a sus
concentraciones molares.

De manera similar, para la reaccin representada por:

Que se escribe como:

A + 2B P

A+B+BP

La expresin que corresponde a la velocidad es:

Velocidad [A][B]2

Para el caso general donde n molculas de A

reaccionan m molculas B: nA + mB P
La expresin para la velocidad es:

Velocidad [A]n[B]m

Al sustituir la constante de proporcionalidad con un signo

igual mediante la introduccin de una constante de
proporcionalidad a de velocidad k caracterstica de la
reaccin en estudio se obtienen otras ecuaciones que se
presentan a continuacin, en donde los subndices 1 y -1 se
refieren a las constantes de velocidad para las reacciones
directa e inversa, respectivamente:
Velocidad1 = k1[A]n[B]m
Velocidad-1 = k-1[P]

Keq ES UNA RELACIN DE

CONSTANTES DE VELOCIDAD
En el equilibrio, las concentraciones globales de
reactivos y productos permanecen constantes.
La velocidad de conversin de sustratos en
productos es igual a la velocidad a la que los
productos se convierten en sustratos.
Velocidad1 = Velocidad-1
Por tanto...
Y...

La relacin de K1 / k -1 se denomina constante de equilibrio,

Keq. Se debe tener en mente las siguientes propiedades
importantes de un sistema en equilibrio:
1) La constante de equilibrio es una relacin de las
constantes de velocidad de la reaccin (no de las velocidades
de reaccin).
2) En el equilibrio, son iguales las velocidades de reaccin
(no las constantes de velocidad) de las reacciones directa e
inversa.
3) El equilibrio es una estado dinmico. Aunque no hay
cambio neto en la concentracin de los sustratos y los
productos, las molculas de sustrato y producto se
interconvierten de manera continua.
4) El valor numrico de la constante de equilibrio Keq se
calcula a partir de las concentraciones de sustratos
y productos en el equilibrio o de la relacin k1/k-1.

CINTICA DE LA CATLISIS

Las enzimas disminuyen la

barrera de la energa de
activacin para una reaccin

Todas las enzimas aceleran las velocidades de reaccin

porque proporcionan estados de transicin con menor Gf.
Si el mecanismo o la secuencia de pasos qumicos en el sitio
activo es en esencia igual que para la misma reaccin que se
efecta en ausencia de catalizador, el ambiente del sitio
activo disminuye Gf al estabilizar los intermediarios de
los estados de transicin.

EN LA ESTABILIZACIN INTERVIENEN:
1.- Grupos acidobsicos ubicados de manera
adecuada para transferir protones hacia el
intermediario del estado de transicin en desarrollo
o desde este intermediario.
2.- Grupos cargados o iones metlicos ubicados en
forma adecuada y que estabilizan las cargas en
desarrollo
3.- La imposicin de impedimento estrico en los
sustratos de modo que su configuracin geomtrica
se aproxime al del estado de transicin.

La proteasa de
HIV ilustra la
catlisis
mediante una
enzima que
disminuye la
barrera de
activacin al
estabilizar un
intermediario del
estado de
transicin.

En esta
figura se
ilustra cmo
una enzima
por medio de
la catlisis
covalente
ofrece una
va de
reaccin
nica.

La catlisis
mediante
enzimas que
procede por un
mecanismo de
accin nico se
presenta, por lo
comun, cuando el
intermediario del
estado de
transicin forma
un enlace
covalente con la
enzima (catlisis
covalente)

LAS ENZIMAS NO AFECTAN

LA Keq
Las enzimas aceleran las velocidades de reaccin
porque disminuyen la barrera de activacin Gf.
Aunque podran experimentar modificaciones
transitorias durante el proceso de catlisis, las
enzimas siguen sin cambio al completarse la
reaccin. Por consiguiente, la presencia de una
enzima no tiene efecto en el G0 para la reaccin
global, la cual es funcin slo de los estados
inicial y final de los reactivos.

En la siguiente ecuacin se muestra la relacin entre la

constante de equilibrio para una reaccin y el cambio de
energa libre estndar para esa reaccin.

Si se incluye la presencia de la enzima E en el clculo

de la constante de equilibrio para una reaccin

La expresin para la constante de equilibrio,

Se reduce a otra que es idntica a la de una reaccin en

ausencia de la enzima:

VARIOS FACTORES INFLUYEN

EN LA VELOCIDAD DE
REACCIONES CATALIZADAS
POR ENZIMAS

Al subir la temperatura se incrementa la velocidad

tanto de las reacciones no catalizadas como la de las
catalizadas por enzimas, ya que se incrementa la
energa cintica y la frecuencia de choques de las
molculas reactivas.

La energa calorfica aumenta tambin la energa cintica

de la enzima hasta un punto que excede la barrera de
energa para interrumpir las interacciones no covalentes
que mantienen la estructura tridimensional de la enzima.
Entonces, la cadena polipeptdica comienza a desdoblarse
o desnaturalizarse, con una rpida prdida de la
actividad cataltica. El intervalo de temperatura en el
que una enzima mantiene una conformacin estable,
competente catalticamente, depende de la temperatura
normal de las clulas en las que reside, y por lo regular
dicha temperatura se excede de manera moderada.
Las
enzimas del hombre son estables, por lo general, a
temperaturas de hasta 45 a 55 C. En cambio, las
enzimas de los microorganismos termoflicos que residen
en manantiales calientes de origen volcnico o en
respiradores hidrotrmicos bajo el mar podran ser
estables hasta 100C o por arriba de este valor.

El Q10, o coeficiente de temperatura, es el factor

mediante e que se incrementa la velocidad de un proceso
biolgico para un aumento de temperatura de 10C.
En cuanto a las temperaturas en las cuales son estables
las enzimas, las velocidades para la mayor parte de los
procesos biolgicos se duplican, por lo general en un
aumento de temperatura de 10C (Q10=2). Los cambios en
las velocidades de las reacciones catalizadas por enzimas
que acompaan a un aumento o disminucin de
temperatura corporal, constituye una caracterstica de
supervivencia importante para las formas de vida de
sangre fra, cuyas temperaturas corporales las
determina el medio externo.
En cambio los organismos homeotrmicos, los cambios de
velocidades de las reacciones enzimticas con la
temperatura tienen importancia biolgica slo en
circunstancias como la fiebre o la hipotermia.

CONCENTRACIN DEL ION

HIDRGENO
La velocidad de casi todas las reacciones catalizadas por
enzimas depende de la concentracin del in hidrgeno. La
mayor parte de las enzimas intracelulares muestra
actividad ptima a valores de pH entre 5 y 9.

La relacin entre la actividad y la concentracin del

ion hidrgeno refleja el equilibrio entre la
desnaturalizacin de la enzima a pH alto o bajo y los
efectos en el estado cargado de la enzima, de los
sustratos, o de ambos. Para las enzimas cuyo mecanismo
tiene que ver con la catlisis acidobsica, los residuos que
intervienen deben estar en el estado apropiado de
protonacin para que proceda la reaccin. El enlace y el
reconocimiento de las molculas del sustrato con grupos
disociables, tambin se relacionan con la formacin de
puentes salinos con la enzima. Los grupos cargados ms
comunes son los carboxilato de carga negativa y los de
aminas protonadas con carga positiva.
La ganancia o prdida de grupos importantes con carga
afecta de manera adversa la unin del sustrato, y
por consiguiente, retarda o anula la
catlisis.

POR LO COMN, LA
VELOCIDAD INICAL SE
DETERMINA EN LOS
ESTUDIOS DE REACCIONES
CATALIZADAS POR ENZIMAS
En la mayor parte de las determinaciones de la velocidad
de las reacciones catalizadas por enzimas se utilizan
tiempos relativamente cortos, condiciones que se
aproximan a las de la velocidad inicial. En estas
circunstancias, slo se acumulan trazas de producto, de
modo que es insignificante la velocidad de la reaccin
inversa. Por tanto, la velocidad inicial (V1) de la reaccin
es, en esencia, la misma que la de la
reaccin
directa.

En los estudios de la actividad enzimtica casi

siempre se utiliza un gran exceso molar (103 a
107) de sustrato respecto de la enzima. En
estas condiciones V1 es proporcional a la
concentracin de la enzima. Por tanto, la
medicin de la velocidad inicial permite estimar
la cantidad de enzima presente en una muestra
biolgica.

LA CONCENTRACIN DEL
SUSTRATO AFECTA LA
VELOCIDAD DE LA REACCIN
Las reacciones enzimticas se abordan como si
tuvieran slo un sustrato y un solo producto. Si bien,
la mayor parte de las enzimas tienen ms de un
sustrato, los principios que se analizan a continuacin
tienen la misma validez en enzimas con varios
sustratos.
Para una enzima representativa ,
cuando se incrementa la
concentracin de sustrato, Vi
aumenta hasta que alcanza un
valor mximo Vmx.

Cuando se llega al
punto en que
aumentar ms la
concentracin de
sustrato no
incrementa la Vi, se
dice que la enzima
est saturada con el
sustrato.
Obsrvese que la forma de la curva que relaciona la actividad
con la concentracin del sustrato es hiperblica. En cualquier
instante, slo las molculas de sustrato que estn combinadas
con la enzima como un complejo ES se transforma en producto.
Segundo, la constante de equilibrio para la formacin del
complejo enzima-sustrato es finito. Por consiguiente, aun
cuando el sustrato est presente en exceso, slo una fraccin
de la enzima podra estar presente como un complejo ES.

Representacin de una enzima a baja concentracin (A), a alta

concentracin (C) y a una concentracin de sustrato igual a K m(B)

En los puntos A y B, al aumentar o disminuir

(S) se incrementa o disminuye la cantidad de
complejos (ES) con un cambio correspondiente
en Vi. En el punto C, casi toda la enzima est
presente como complejo ES. Puesto que no
queda enzima libre para formar (ES), otro
aumento de (S) no aumenta la velocidad de
reaccin. En estas condiciones de saturacin,
Vi, depende slo de la rapidez con la que se
libera la enzima libre para combinarse con ms
sustrato y, por consiguiente, est limitada por
dicha rapidez.

LAS ECUACIONES DE MICHAELISMENTEN Y HILL MODELAN LOS

EFECTOS DE LA CONCENTRACIN
DEL SUSTRATO

Se ilustra la relacin entre la velocidad inicial Vi y la

concentracin del sustrato (S).

La constante de Michaelis Km es la
concentracin del sustrato a la cual Vi, es la
mitad de la velocidad mxima (Vmx/2)
asequible a una concentracin particular de la
enzima.. Por tanto, Km tiene las dimensiones
de la concentracin del sustrato. Se podra
ilustrar la dependencia de la velocidad de
reaccin inicial en (S) y Km mediante la
evaluacin de la ecuacin de Michaelis-Menten.

3 condiciones de la ecuacin de MichaelisMenden

1.- Cuando

(S) es mucho menos que Km, el trmino

Km + (S) es esencialmente igual que Km. Si se
sustituye Km + (S) por Km, la ecuacin se reduce a:

Donde el signo = significa aproximadamente igual

a. Puesto que tanto Vmx como Km son constantes,
cuando (S) es bastante menor que Km,
Vi
k(S). Por consiguiente, la velocidad
inicial de
la reaccin es directamente
proporcional a (S).

2.- Cuando

(S) es mucho mayor que Km, el trmino

Km + (S) es esencialmente igual a (S). Si se
sustituye Km + (S) por (S), la ecuacin se reduce
a:

As, cuando (S) excede por mucho a Km, la

velocidad de la relacin es mxima (Vmx) y es
invariable con los incrementos adicionales de la
concentracin del sustrato.

3.- Cuando

(S) es = Km, la velocidad inicial es igual

a la mitad de Vmx.

Se observa tambin que Km es la concentracin del

sustrato a la que la velocidad inicial es igual a la
mitad de Vmx, y se podra determinar de forma
experimental a partir de dicha concentracin.

PARA DETERMINAR Km Y Vmx SE

UTILIZA UNA FORMA LINEAL DE LA
ECUACIN DE MICHAELIS-MENTEN
En la medicin directa del valor numrico de Vmx
y, por tanto, en el clculo de Km, a menudo se
requieren concentraciones de sustrato
demasiado altas para lograr las condiciones de
saturacin. Esta dificultad se supera mediante
una forma lineal de la ecuacin de Michaelis que
permite extrapolar Vmx y Km, a partir de la
velocidad inicial obtenida a concentraciones
menores del sustrato que las de saturacin.

Y el inverso de la ecuacin

Y al factorizar

Cuando se simplifica se obtiene

La ecuacin anterior, corresponde a una ecuacin de una recta,

Y = ax + b, donde Y = 1/Vi y x = 1/(S) como x se obtiene una
recta cuya ordenada al origen y es Km/Vmx. A esta grfica
se le denomina doble recproca o grfica de Lineweaver-Burk.
Si el trmino y de la ecuacin:
Se iguala a cero y se despeja el valor de x se encuentra que la recta
corta al eje de las X en -1/Km.
Por consiguiente, se calcula Km con mas facilidad a partir de la
interseccin con el eje de las x.

ES POSIBLE QUE KM SE APROXIME A

UNA CONSTANTE DE ENLACE
La afinidad de una enzima por su sustrato es el inverso de la
constante de disociacin Kd para la disociacin del complejo ES
formado entre la enzima y el sustrato.

Expresado de otro modo, mientras menor sea la tendencia de la

enzima y el sustrato a disociarse, mayor es la
afinidad de la enzima con su sustrato.

Si bien la constante de Michaelis Km a menudo se

aproxima a la constante de disociacin Kd, esto no
siempre es as.
Para la reaccin caracterstica catalizada por enzima:

El valor de (S) que da Vi = Vmx/2 es

Cuando K-1 K2, entonces

Por consiguiente, 1/Km slo se aproxima a 1/Kd

en condiciones donde la asociacin y disociacin
del complejo ES son rpidas respecto al paso
limitante de la velocidad en la catlisis. Para
muchas de las reacciones catalizadas por
enzimas para las que K-1 + K2 no es
aproximadamente igual a K-1, 1/Km ser una
mala estimacin de 1/Kd.

CON LA ECUACIN DE HILL SE

DESCRIBE EL COMPORTAMIENTO DE
LAS ENZIMAS QUE MUESTRAN UNIN
COOPERTATIVA DEL SUSTRATO
En la mayor parte de las enzimas se observa la
cintica de saturacin simple mostrada
anteriormente, se describe muy bien mediante la
expresin de Michaelis-Menten, pero algunas
enzimas se unen a sus sustratos de manera
cooperativa anloga a la unin del oxgeno con la
hemoglobina. El comportamiento cooperativo es una
propiedad exclusiva de las enzimas
multinumricas que se unen al sustrato en varios
sitios.

Para las enzimas en las que se observa cooperatividad

positiva en la unin del sustrato, la forma de la curva
que relaciona los cambios en Vi, con los cambios en
(S) es sigmoidal.

Ni la expresin de Michaelis-Menten ni sus

grficas recprocas dobles derivadas se utilizan
para evaluar la cintica de saturacin cooperativa.
Por ello, los enzimlogos utilizan una
representacin grfica de la ecuacin de Hill que al
principio se obtuvo para describir el enlace
cooperativo de O2 con la hemoglobina.
A continuacin, la ecuacin recta de Hill, donde K
es una constante compleja.

En la ecuacin se expresa que cuando (S) es baja

respecto de K, la velocidad inicial de la reaccin se
incrementa como la n-sima potencia de (S).
Al graficar el logVi/Vmx-Vi) en funcin de log (S) se
obtiene una recta, donde la pendiente n de la recta es el
coeficiente de Hill, un parmetro emprico cuyo valor es
una funcin del nmero, clase y fuerza de las
interacciones de los diversos sitios de unin de los
sustratos en la enzima.

Cuando n = 1, los sitios de enlace se comportan en

forma independiente y se observa un comportamiento
cintico simple de Michaelis-Menten. Si n es mayor
que 1, se dice que la enzima muestra cooperatividad
positiva. El enlace de la primera molcula de sustrato
incrementa entonces la afinidad de la enzima por la
unin con el sustrato adicional. A medida que
aumenta el valor de n, mayor es el grado de
cooperatividad y ms sigmoideal es la grfica de Vi en
funcin de (S).
Si se desciende de modo perpendicular desde el
punto donde el trmino log Vi/(Vmx-Vi) es cero, se
interseca al eje X en la concentracin del sustrato
que da como resultado la mitad de la Vmx. Por
tanto, S50 es anloga a P50 para el enlace del oxgeno
con la hemoglobina.

EL ANLISIS CINTICO DISTINGUE

LA INHIBICIN COMPETITIVA DE LA
NO COMPETITIVA
Los inhibidores de las actividades catalticas de
las enzimas proporcionan tanto agentes
farmacolgicos como herramientas de
investigacin para el estudio del mecanismo de
la accin enzimtica. A los inhibidores se les
clasifica segn su sitio de accin en la enzima o
de acuerdo con los parmetros cinticos sobre
los que tienen efecto. Desde el punto de vista
cintico se distinguen dos clases de inhibidores
segn si al elevar la concentracin de
sustrato se supera la inhibicin o no.

POR LO COMN, LOS INHIBIDORES

COMPETITIVOS SE ASEMEJAN A
LOS SUSTRATOS
Para superar los efectos de los inhibidores competitivos se
eleva la concentracin del sustrato. En la inhibicin
competitiva, el inhibidor I, se une con frecuencia a la parte
del sitio activo que fija el sustrato e impide que se
interaccione con la enzima. Por tanto, , las estructuras de
la mayor parte de los inhibidores competitivos clsicos
tienden a asemejarse a las estructuras de un sustrato, por
lo que se denominan anlogos del sustrato. La inhibicin
que experimenta la enzima deshidrogenasa de succinato con
el malonato ilustra la inhibicin competitiva mediante un
anlogo del sustrato.

La succinato deshidrogenasa cataliza el retiro de

un tomo de hidrgeno de cada uno de los dos
carbonos de metileno del succinato.

Tanto el succinato como su anlogo estructural malonato

Se pueden enlazar con el sitio activo de la succinato deshidrogenasa para
formar un complejo ES o EI, respectivamente.

Puesto que el malonato contiene slo un carbono

de metileno, no es deshidrogenado. La
formacin y disociacin del complejo EI es un
proceso dinmico descrito por:

Para la cual la constante de equilibrio Ki es:

En efecto, la accin de un inhibidor competitivo

es disminuir el nmero de molculas de enzima
libre disponibles para enlazarse con el sustrato,
es decir, para formar ES y, por tanto, para
formar finalmente un producto.

Un inhibidor competitivo y el sustrato ejercen efectos

recprocos en la concentracin de los complejos EI y ES.
Puesto que la unin (fijacin) del sustrato elimina la
enzima libre disponible para combinarse con el inhibidor,
al incrementar (S) se disminuye la concentracin del
complejo EI y aumenta la velocidad de reaccin. El
grado al que debe incrementarse (S) para superar por
completo la inhibicin depende de la concentracin del
inhibidor presente, su afinidad por la
enzima K1 y la Km de la enzima por su sustrato.

LAS GRFICAS DE LAS DOBLES

RECPROCAS FACILITAN LA
EVALUACIN DE LOS INHIBIDORES
En las grficas de los recprocos se distingue entre inhibidores
competitivos y no competitivos, y se simplifica la evaluacin de
las constantes de inhibicin. La V1 se determina mediante varias
concentraciones de sustrato tanto en presencia como en
ausencia del inhibidor. Para los inhibidores competitivos , las
rectas que unen los puntos de datos experimentales s e
encuentran en el eje y. Puesto que la ordenada al origen y es
igual a 1/V max, este patrn indica que cuando 1/S tiende a 0, V1
es independiente de la presencia del inhibidor. Sin embargo
obsrvese que la interseccin en el eje de las x vara con la
concentracin del inhibidor y puesto que -1/Km es menor que
1/Km. Km (La Km aparente) se vuelve ms grande en
presencia de la concentracin creciente de inhibidor.

As, un inhibidor competitivo no tiene efecto en V max pero induce el

aumento de Km, la Km aparente para el sustrato. Para la inhibicin
competitiva simple, la interseccin con el eje de las x es:

Una vez determinada la Km en ausencia de

inhibidor, K1 se calcula a partir de la ecuacin.
Los valores de K1 se utilizan para comparar
diferentes inhibidores de la misma enzima.
Mientras ms pequeo sea el valor para Ki, ms
eficaz ser el inhibidor . por ejemplo, los
frmacos de estatina que actan como
inhibidores competitivos de la HMG-CoA
reductasa muestran valores Ki varios rdenes
de magnitud ms bajos que la Km para el
sustrato HMG-CoA.

LOS INHIBIDORES NO
COMPETITIVOS SIMPLES
DISMINUYEN LA VMAX PERO NO
AFECTAN A LA KM
En la inhibicin no competitiva, la unin del inhibidor
no afecta la fijacin del sustrato. Por tanto, es posible
la formacin de los complejos EI y EIS. No obstante,
si bien el complejo enzima inhibidor aun puede
enlazarse con el sustrato, disminuye su efectividad
para transformar al sustrato en producto, reflejada
por el valor de la Vmax. Los inhibidores no competitivos
se unen con enzimas en sitios distintos del
sitio de unin del sustrato y, por lo general, tienen
poca o ninguna semejanza estructural con el sustrato.

Para la inhibicin no
competitiva simple, E y
EI poseen afinidad
idntica con el sustrato,
y el complejo EIS genera
producto a ritmo
insignificante.
La inhibicin no competitiva ms compleja se
observa cuando la fijacin (unin) de inhibidor
afecta la afinidad evidente de la enzima con el
sustrato, lo que causa que las rectas se crucen
en los cuadrantes tercero o cuarto de una
grfica recproca doble (no mostrada).

LOS INHIBIDORES IRREVERSIBLES

envenenan A LA ENZIMA

En los ejemplos anteriores, los

inhibidores forman un complejo dinmico
y disociable con la enzima. Por ello la
enzima totalmente activa se recupera al
eliminar el inhibidor del medio
circundante. Sin embargo, hay otros
inhibidores que actan en forma
irreversible al modificar qumicamente a
la enzima.

Estas modificaciones, por lo general,

implican formar o romper enlaces
covalentes con residuos de aminoacilo
esenciales para la fijacin del sustrato, la
catlisis o el mantenimiento de la
conformacin funcional de la enzima.
Puesto que estos cambios covalentes son
relativamente estables, una enzima que fue
envenenada por un inhibidor irreversible
permanece en su estado de inhibicin
incluso despus de eliminar el inhibidor
remanente del entorno.

EN LA MAYOR PARTE DE LAS

REACCIONES CATALIZADAS POR LAS
ENZIMAS HAY DOS O MS
SUSTRATOS
Si bien muchas enzimas tienen un solo sustrato, otras
ms tienen dos sustratos y productos, y algunas veces
ms de dos. Los principios fundamentales estudiados
antes, aunque se ilustraron para enzimas con un solo
sustrato, tambin se aplican a enzimas que actan en
varios sustratos. Pero las expresiones matemticas
utilizadas para evaluar las reacciones de varios
sustratos son complejas. Aunque el anlisis cintico se
consideran a continuacin reacciones de dos
sustratos o dos productos denominadas reacciones bibi.

REACCIONES DE DESPLAZAMIENTO
SIMPLE O SECUENCIAL
En las reacciones secuenciales, es necesario que
ambos sustratos se combinen con las enzimas para
formar un complejo terciario antes de que proceda
la catlisis

A veces, a las reacciones secuenciales se les

denomina reacciones de desplazamiento simple
porque el grupo que experimenta la transferencia
pasa, por lo comn, en forma directa y en un solo
paso, de un sustrato a otro. Las reacciones
sucesivas bi-bi se distinguen tambin porque los
dos sustratos se agregan en orden aleatorio o
forzoso. Para las reacciones de orden aleatorio,
el sustrato A o el sustrato B podra combinarse
primero con la enzima para formar un complejo
EA o uno EB. Para las reacciones de orden
forzoso, A debe combinarse primero con E antes
de que B se combine con el complejo EA. Una
explicacin para un mecanismo forzoso es que la
adicin de A induce un cambio
conformacional en la enzima, lo cual alinea
los residuos que reconoce y se une con B.

REACCIONES DE ping-pong
El trmino ping-pong se aplica a mecanismos
en los que la enzima libera uno o ms productos
antes de que todos los sustratos sean
agregados. En las reacciones ping-pong
interviene la catlisis covalente y una forma
transitoria modificada de la enzima.

Las reacciones ping-pong bi-bi son reacciones de

desplazamiento doble. La enzima desplaza
primero del sustrato A al grupo que experimenta
la transferencia para formar un producto P y una
forma modificada de la enzima (F). La
transferencia posterior del grupo desde F al
segundo sustrato B, que da lugar a la formacin
del producto Q y la regeneracin de E, constituye
el segundo desplazamiento.

LA MAYOR PARTE DE LAS

REACCIONES BI-BI CUMPLEN CON LA
CINTICA DE MICHAELIS-MENTEN
Muchas de las reacciones bi-bi siguen una forma un poco
ms compleja de la cintica de Michaelis-Menten en la que
Vmx se refiere a la velocidad de reaccin obtenida cuando
estn presentes ambos sustratos a concentraciones de
saturacin. Cada sustrato tiene su propio valor
caracterstico Km que corresponde a la concentracin que
produce la mitad de Vmx cuando el segundo sustrato est
presente en concentraciones de saturacin. En cuanto a las
reacciones de un solo sustrato, las grficas recprocas
dobles se puede utilizar para determinar Vmx y Km, Vi se
cuantifica como una funcin de la
concentracin de un sustrato (el
sustrato
variable) en tanto que la concentracin del
otro
sustrato (el sustrato fijo) se mantiene

Si se trazan las
rectas obtenidas para
varias concentraciones
de sustrato fijo en la
misma grfica, es
posible distinguir
entre una enzima
ping-pong, que
generar rectas que se
intersecan.

Los estudios de inhibicin del producto se

utilizan para complementar anlisis cinticos y
distinguir entre reacciones bi-bi ordenadas y
aleatorias. Por ejemplo, en una reaccin bi-bi
de orden aleatorio, cada producto es un
inhibidor competitivo sin importar cul sustrato
se designe como sustrato variable. Pero en el
caso de un mecanismo consecutivo, slo con el
producto Q se obtiene el patrn indicativo de
inhibicin competitiva cuando A es el sustrato
variable, en tanto que slo el producto P
produce este patrn con B como sustrato
variable. Las otras combinaciones de
inhibidor de producto y sustrato variable
producen formas de inhibicin no competitiva
compleja.

EL CONOCIMIENTO DE LA CINTICA
ENZIMTICA, SU MECANISMO DE
INHIBICIN AYUDA AL DESARROLLO
DE LOS FRMACOS

El objetivo de la farmacologa es identificar a

los agentes que pueden:
destruir o alterar el crecimiento,
invasividad o desarrollo de patgenos
invasivos.
estimular los mecanismos de defensa
endgenos
detener o impedir los procesos
moleculares aberrantes precipitados
por estmulos genticos, ambientales o
biolgicos con afectacin mnima de las
funciones celulares normales del
husped.

En virtud de sus funciones fisiolgicas y alto

grado de selectividad, las enzimas constituyen
objetivos naturales para el desarrollo de agentes
farmacolgicos que sean potentes y especficos.
Los frmacos estatina, por ejemplo, disminuyen
la produccin de colesterol inhibiendo la 3hidroxi-metilglutaril coenzima A reductasa,
mientras que la emtricitabina y el fumarato de
tenofovir disoproxil bloquean la replicacin del
VHI por la inhibicin de la transcriptasa inversa
viral.
El tratamiento farmacolgico de la hipertensin
incluye, a menudo, la administracin de enzimas
convertidoras de angiotensina, bajando el nivel
de angiotensina II, un vasoconstrictor.

LA CINTICA DE LAS ENZIMAS

DEFINE LO APROPIADO DE LAS
CONDICIONES DE BSQUEDA
La cintica enzimtica juega un papel muy importante en
el descubrimiento de los frmacos. Es necesario
conocer el comportamiento cintico de la enzima. Lo
primero y de mxima importancia es seleccionar las
condiciones apropiadas del ensayo que detectan con
rapidez la presencia de un inhibidor.
La concentracin del sustrato, por ejemplo, debe
ajustarse a tal grado que se genere el producto
suficiente que permita facilitar la
deteccin de la actividad enzimtica sin
ser tan alta que enmascare la presencia
de un inhibidor.

MUCHOS FRMACOS SE
METABOLIZAN IN VIVO
El desarrollo de frmacos involucra a menudo, ms que
la evolucin cintica de la interaccin de los inhibidores
con la enzima problema. Los frmacos influyen sobre
las enzimas presentes en el paciente o patgeno,
proceso llamado metabolismo de los frmacos. Por
ejemplo, la penicilina y otros antibiticos lactmicos
bloquean la sntesis de la pared celular en las bacterias
envenenando la enzima alanil alanina carboxi peptidasatranspeptidasa.
Muchas bacterias, sin embargo, producen lactamasas
que hidrolizan la funcin crtica de la lactmica. Una
estrategia para vencer la resultante resistencia
antibitica es la administracin simultnea de un
inhibidor de la lactamasa y un antibitico lactmico.

Se requiere tambin la transformacin

metablica para convertir un precursor inactivo
del frmaco, o pro-frmaco, a su forma
biolgicamente activa.
El cido 2-desoxi-5-flourouridlico, inhibidor
potente de la timidilato sintasa, un objetivo
comn de la terapia antineoplsica, es producido a
partir del 5-fluouracilo mediante una serie de
transformaciones enzimticas catalizadas por una
fosforobosil transferasa y las enzimas de la va
desoxirribonucletido. El diseo efectivo y la
administracin de los profrmacos requieren
conocimiento de la cintica y mecanismos de las
enzimas responsables de la transformacin en sus
formas biolgicamente activas.