EXMENES

BACTERIOLGICOS

PASOS GENERALES PARA LA

IDENTIFICACIN DE LAS
BACTERIAS

OBTENCIN DE LA MUESTRA
AISLAMIENTO Y SIEMBRA EN MEDIOS DE
CULTIVO A PARTIR DE LA MUESTRA BIOLGICA
INCUBACIN
MORFOLOGA COLONIAL Y
MICROSCOPICA

PRUEBAS BIOQUMICAS

PRUEBAS SEROLOGICAS

MUESTRA PARA COPROCULTIVO

Procedimiento:
El paciente debe defecar en un recipiente limpio y
seco, sin mezclar con orina. (Si es lactante, tomar
del paal la muestra recin emitida)
Recipiente estril: frasco de boca ancha con tapa.
Introduzca directamente en el frasco de boca
ancha, ms o menos 1 a 2 grs. de la muestra;
La muestra debe enviarla al Laboratorio antes de
una hora de su obtencin si esta temperatura
ambiente.
IMPORTANTE :
Informar si est tomando antibiticos
Identificar la muestra con nombre y fecha

AISLAMIENTO DE BACTERIAS EN
MEDIOS DE CULTIVO
Medios de
cultivo para el
aislamiento de
bacterias

No selectivo
Selectivo
EMB
AGAR SIMPLE

SIEMBRA Y AISLAMIENTO
1.- La siembra y el aislamiento de bacterias
se realiza a partir de la muestra biolgica y
se hace junto al mechero para evitar
contaminacin

SIEMBRA Y AISLAMIENTO
2.- Con el asa esterilizada se toma el inculo

SIEMBRA Y AISLAMIENTO
3.- Se deposita el inculo en el medio de cultivo
con movimientos circulares en un rea de
aproximadamente un 1 cm. llamada zona de
descarga

SIEMBRA Y AISLAMIENTO
4.- Se tapa la caja de Petri y se esteriliza el
asa bacteriolgica a la flama del mechero

AISLAMIENTO POR ESTRA

CRUZADA
Una forma de separar a las bacterias para
que formen colonias, consiste en depositar
inicialmente en el medio de cultivo a las
bacterias juntas en una zona de descarga
Despus separarlas con una asa
bacteriolgica, realizando un arrastre con
movimientos en zig zag en cuatro
cuadrantes, esterilizar el asa entre cada uno
de ellos

ESTRA CRUZADA

SIEMBRA Y AISLAMIENTO
Quedan cuatro estras
cruzadas

OBTENCIN DE COLONIAS BACTERIANAS

Una vez que se han
sembrado las bacterias en
el medio de cultivo, es
necesario incubarlas a
37 C durante 24 horas
para que se reproduzcan
y formen colonias, que
son acmulos de una gran
cantidad de bacterias
que pueden ser
detectadas a simple vista

COLONIAS BACTERIANAS

CRECIMIENTO BACTERIANO
SOBRE AGAR SIMPLE

CRECIMIENTO BACTERIANO
SOBRE EMB

MORFOLOGA COLONIAL
El observar colonias diferentes
en un mismo medio de cultivo,
indica que se trata de
bacterias
diferentes

MORFOLOGA COLONIAL

CONSISTE EN DESCRIBIR LAS CARACTERSTICAS

MACROSCPICAS DE LA COLONIA

Tamao: puntiforme, pequeo, mediano, grande

Forma: circular, filamentosa, irregular, rizoide,
fusiforme
Color: incoloras o de color
Elevacin: plana, convexa, acojinada, abultada,
ondulada
Luz reflejada: brillante o mate
Luz transmitida: opaca, translcida, transparente
Borde: entero, ondulado, lobulado, crenado,
filamentoso
Superficie: rugosa o lisa
Consistencia: dura, cremosa, butirosa, mucosa

IMAGEN DE LAS CARACTERSTICAS

DE LA MORFOLOGA COLONIAL

UTILIDAD DE LA MORFOLOGA
COLONIAL

La morfologa colonial nos permite

seleccionar a las colonias
sospechosas de patgenos en el caso
de zonas colonizadas, para continuar
con ellas el proceso de identificacin

En caso de que la muestra biolgica

pertenezca a una zona estril, es
necesario identificar cualquier colonia
que aparezca

MORFOLOGA MICROSCPICA

La morfologa microscpica consiste en

determinar la forma, la agrupacin y el
Gram al que pertenecen que puede ser
positivo o negativo

Este paso al igual que el de la morfologa

colonial nos va orientando hacia la
identificacin de la bacteria

Para
poder
observar
la
morfologa
microscpica es necesario observar a las
bacterias al microscopio, para lo cual es
necesario hacer un frotis y una tincin

TCNICA DE FROTIS BACTERIANO

1- Poner una gota de agua

en un portaobjetos limpio
y seco

3- Con el asa bacteriolgica fra

tomar a las bacterias de la
colonia seleccionada tocndola

2- Esterilizar el asa bacteriolgica

4- Mezclar a las bacterias con el agua,

con movimientos circulares

TCNICA DE FROTIS BACTERIANO

5- Esterilizar el asa bacteriolgica con

la flama del mechero

6- Dejar secar el frotis y fijarlo

al calor, pasndolo varias
veces sobre la flama del
mechero de manera rpida
7- Tocar con el dorso de la mano
la parte de abajo del
portaobjetos, para confirmar que
no se ha calentado demasiado,
pues de ser as se alterar la
morfologa de las bacterias

TINCIN DE GRAM

La mayora de las bacterias son

incoloras, por lo que para poder
observarlas con fines de identificacin
es necesario teirlas. Una de las
tcnicas ms usadas para stos fines
es la tcnica de Gram que nos permite
dividirlas en dos grandes grupos:

Gram (+)
Gram (-)

TINCIN DE GRAM

1- Tren de tincin de Gram

3- Cubrir el frotis con

cristal violeta por el lapso

2- Poner el frotis
bacteriano
sobre el puente de
tincin

4- Enjuagar con agua

TINCIN DE GRAM

5- Cubrir el frotis con

lugol durante 1 minuto

7- Alcohol-acetona paso rpido

6- Enjuagar con agua

8- Enjuagar con agua

TINCIN DE GRAM

9- Cubrir el frotis con safranina

por 1 minuto

10- Enjuagar con agua, dejar

secar el frotis teido y
observarlo en el microscopio
ptico

11- La morfologa
microscpica se observa con
el objetivo de inmersin
100x

FORMAS Y AGRUPACIONES DE LAS

BACTERIAS

GRAM
Al teir a las
bacterias con la
tcnica de Gram las
gram positivas se
tien de color
morado y las gram
negativas de color
rojo, debido a que
existen diferencias
en la composicin
qumica de su pared
celular

Gram (+)

Gram (-)

COPROPARASITOSCOPICO

COPROPARASITOSCPICO (CPS)

Es un examen de laboratorio que

permite
identificar por observacin directa al
microscopio a algunos parsitos;
protozoarios,
helmintos, sus larvas o huevecillos

La muestra utilizada es materia fecal

MUESTRA PARA COPROPARASITOSCOPICO

Procedimiento
El paciente debe defecar en un recipiente limpio y seco, sin
mezclar con orina. (Si es lactante, tomar del paal la
muestra recin emitida);
Coloque una porcin del tamao de una nuez en el frasco de
boca ancha
Las muestras deben obtenerse de 3 das seguidos hasta
completar las tres.
Si observa algn gusano, debe colocarlo en un frasco limpio
con agua de la llave y llevarlo al laboratorio con la muestra.
El estudio del gusano corresponde a una observacin
macroscpica que debe hacerse adicionalmente.
Conservar las muestras en refrigerador a 4C.
IMPORTANTE: identificar la muestra con nombre del
paciente y fecha.

EXAMEN COPROPARASITOSCPICO

Se requieren tres muestras de das

consecutivos, aunque pueden ser de das
salteados

Se piden de das consecutivos para poder

facilitar su entrega en el laboratorio

Examinar tres muestras de materia fecal del

mismo paciente aumenta la probabilidad de
detectar a los parsitos intestinales

MUESTRAS PARA EL CPS

Las muestras del CPS deben analizarse el

mismo da que se tomaron, sobre todo si
son diarreicas, si son formadas se le pide a
las personas que junten las 3 muestras y
las conserven en refrigeracin o en un lugar
seco y fresco; y una vez que las renan las
lleven al laboratorio

MUESTRA BIOLGICA PARA EXAMEN

CPS

La muestra debe ser depositada en un frasco

de boca ancha limpio y seco, o bien en un
copropac

COPROPAC

Examen macroscpico:
Se revisan las caractersticas fsicas de la
muestra buscando rasgos de sangre, moco o
parsitos que se pueden ver a simple vista
Examen microscpico:
La tcnica de Faust es una tcnica de
concentracin por flotacin para la
deteccin de parsitos intestinales
microscpicos, sus larvas o huevecillos

Examen macroscpico
HELMINTOS
En algunas
ocasiones al hacer
el examen
macroscpico de
la muestra pueden
aparecer
progltidos de
Taenia sp.

PROGLTIDOS DE Taenia sp.

TCNICA DE FAUST

La tcnica de Faust es una tcnica que

permite aumentar la probabilidad de
detectar a los parsitos intestinales al
concentrarlos en una pelcula en la
superficie del tubo de ensaye.

Su fundamento es la flotacin

La parte de la muestra de materia fecal

que se toma debe ser aquella donde se
aprecie, moco o sangre

TCNICA DE FAUST

MATERIAL PARA
EXAMEN
COPROPARASITOSCPIC
O
POR LA TCNICA DE
FAUST

TCNICA DE FAUST

1.-Tomar una porcin de materia

fecal con una varilla de vidrio

2.-Hacer una suspensin de

materia fecal con agua y vaciarla
a un tubo de ensayo de 13 X 100

TCNICA DE FAUST

3.- Centrifugar durante 1

minuto a 1500rpm

4.- Decantar y resuspender con

reactivo de Faust (sulfato de
Zinc). Llenar el tubo
aproximadamente hasta 1 cm
abajo del borde con el reactivo de
Faust

TCNICA DE FAUST

5.- Centrifugar 1 minuto a

1500rpm

6.- Formar el menisco

gota a gota con reactivo
de Faust

TCNICA DE FAUST
MENISCO

7.- Dejar reposar el menisco

al menos un minuto
8.- Tomar el menisco
tocando con el
cubreobjetos

TCNICA DE FAUST

9.- Dejar caer el cubreobjetos

sobre una gota de lugol en un
portaobjetos
10.- Se pueden observar
dos muestras en un
portaobjetos

TCNICA DE FAUST

11.- Observar al
microscopio con los
objetivos de 10X y 40X

PROTOZOARIOS

QUISTE DE Entamoeba coli

QUISTE DE Entamoeba histolytica

QUISTES DE Giardia lamblia

HELMINTOS

HUEVECILLO FRTIL DE
Ascaris lumbricoides

HUEVECILLO DE UNCINARIA

COPROPARASITOSCPICO
Los huevecillos de Taenia sp. y
Enterobius vermicularis pueden llegar
a observarse en un examen
coproparasitoscpico, sin embargo
sto no es frecuente, por lo tanto el
CPS no es la tcnica de eleccin para
su diagnstico

OBSERVACIN DEL CPS

Existen ms protozoarios, parsitos y
comensales que pueden encontrarse
en un examen coproparasitoscpico,
aqu se han ilustrado slo algunos de
los ms frecuentes en Mxico

Tcnicas de
diagnstico
parasitolgic
o

Su objetivo es identificar el parsito en

cualquiera de sus estados a travs de tcnicas
directas o indirectas

Mtodo:
*Directo:

Es la observacin del
agente etiolgico y su caracterizacin
morfolgica.

Ejemplos:
*Examen en fresco
*Examen macroscpico
*Examen microscpico
*Mtodos de
concentracin
*Mtodos cuantitativos
*Coloracin rpida

En fresco

*Indirecto:

Deteccin indirecta del parsito, ya

sea por la respuesta humoral que desencadena el
paciente o por la ruptura de los antgenos que el
parsito libera.

Exmen coprolgico
Obtencin de la muestra fecal
Nmero de muestras
Conservacin y envo de muestras fecales

Examen coprolgico
directo
Examen
macroscpi
co

Examen
microscpico

Elementos no parasitolgicos

Coprograma
estudio microscpico + anlisis
bioqumicos
pH
Azcares reductores
Sangre oculta
Prueba para
hemoglobina humana

Mtodo de recuento de huevos

Recuento en placa microscpica a partir de 2 mg de
materias fecales, se hace recorriendo toda la laminilla, el
nmero total de huevos x laminilla se multiplica por 500
para dar el resultado en h.p.g
Tcnica de Kato-katz

Mtodos de
concentracin

Coloraciones para protozoos intestinales

Tincin de
Romanowsky

Tincin de Tricromo

Tincin de Giemsa

Fierro-Hematoxilina