S

E
N
O
I
C
A
R
O
S
L
A
O
N
C
A
I
B
O
R
C
I
M

Los microorganismos pueden

ser observados de dos formas:

Sin teir

Candida sp

Teidos mediante colorantes

COLORANTES

Compuestos orgnicos e inorgnicos con carcter coloreado.

Benceno + G. Cromforos + G. Auxcromos

G.C.: G. Nitroso, amido, azo, alqueno, ciano, tiociano.

G.A.: Hidroxilo, amino, metilo

 C. CIDOS ()

EOSINATO
AZUL DE
METILENO

C. NEUTROS (0)

EOSINAS,
AURAMINAS

FUCSINA
BSICA,
AZUL DE
METILENO

C
I
F
I
S
A
L

I
AC

C. BSICOS (+)

NEGRO
SUDN
(LIPDICOS)

C. INDIFERENTES

T. Gram, t.
Zhiel
neelsen
Visualizar
diferentes
tipos
bacteriano
s

I
C
A
R
O
L
CO
A
N
A
I
R
E
T
BAC

Morfologa
bacteriana

Tinciones Diferenciales (2 o
+)

Tincin Negativa (1)

Morfologa
bacteriana,
presencia de
cpsulas

Tincin simple (1)

T. De
flagelos, t.
De cilios, t.
Esporas, etc.
Tinciones Especiales
(Selectivas)

TINCIN SIMPLE
PROTOCOLO
1.

Colocar mediante un asa

previamente esterilizada
una cantidad de muestra
en un portaobjetos limpio
(con gota de agua)

2.

Dejar secar al aire y/o fijar

con calor

3.

Agregarle azul de
metileno

4.

Agregar agua

5.

Dejar secar al aire

6.

Observar en el microscopio.

TINCIN
NEGATIVA
PROTOCOLO
1.

Colocar mediante un asa

previamente
esterilizada
una cantidad de muestra
en un portaobjetos limpio.

2.

Agregarle una gota de

solucin de nigrosina al
1% y mezclar.

3.

Agregar agua

4.

Dejar secar en el aire

5.

Observar
microscopio.

en

el

Cpsulas

TINCIN DE GRAM
PARED CELULAR BACTERIANA

TINCIN DE
GRAM
PROTOCOLO
1.

Colocar mediante un asa previamente

esterilizada una cantidad de muestra
en un portaobjetos limpio (con gota
de agua)

2.

Dejar secar al aire y/o fijar con calor

3.

Agregarle cristal de violeta

4.

Agregar agua

5.

Aadir un mordiente (Lugol) y lavar

6.

Decolorar con alcohol y lavar

7.

Agregar un segundo
(Safranina) y lavar

8.

Dejar secar al aire

9.

Observar en el microscopio.

colorante

COLORACI
ON
DE
ZIEHL-

MICOBACTERI
AS

PARED
CELULAR
DIFERENTE

IMPERMEABL
E

ACIDOS
MICOLICOS

CONSISTENCI
A
HIDROFOBICA

ACIDOALCOHOL
RESISTENTE
Tincin muy
til en
laboratorios
clnicos
Prueba
del BK

FUCSINA
FENICADA

ALCOHOLACIDO

ACIDOALCOHOL
RESISTENTE
BACILOS
ACIDO ALCOHOL
RESISTENTES
(BAAR)

COLORACIONES
ESPECIALES

METODO DE
WRITZCONKLIN

ENDOSPO
RAS

BACILLUS Y
COLSTRIDIUM

METODO DE
LEIFSON

FLAGELOS

METODO DE
WRITZCONKLIN
VERDE
MALAQUITA

TIE LAS
ESPORAS EN
CALIENTE

SAFRANINA

DA CONTRASTE
ROJO O
ROSADO

SE BASA EN
EL
ENGROSAMIE
NTO
SIRVE COMO

METODO DE
LEIFSON
FUCSINA
BASICA
EN ETANOL

ACIDO TANICO

COLORANTE
PRIMARIO

ACTUA COMO
MORDIENTE

S
E
N
O
I
C
S
E
N
L
TI
A
R
U
T
C
U
R
T
S
E

Tincin de
Corpsculos
Meta cromticos
Caractersticas
Un color diferente al del colorante
primario
Permite la deteccin de la bacteria
Cornebacterium.
Tienen alta afinidad por los colorantes
catinicos

acumulaciones de polifosfato
que se encuentran dentro de
la clula
Almacena sustancias de
reserva

Se pueden observar con la ayuda de otros colorantes

cuyo uso constituyen diferentes mtodos como:

Ejemplo: Observacin de
bacillos difteroides saprofitos

Mtodo de Loeffer
Se fija el frotis con calor
1. Agregar
muestra de
sarro dental

Se echa agua
a la muestra.
Se deja secar

Se echa el colorante azul de

metileno
Se agrega agua destilada. Se deja
secar.
Se observa al microscopio

3. Colocar el
colorante azul
de metileno

Se lleva a
observar al
microscopio

1
2
3
4

Mtodo de
Albert

Procedimiento

Colorante de Albert

Fijar el frotis con calor

Contiene verde
malaquita

Echar colorante de Albert

en la muestra. Agregar
agua y dejar secar-

Observar al microscopio

Resultado

la
visualizacin
de
los
corpsculos
metacromticos de color caf verdoso oscuro.

Echar colorante de Neisser

en la muestra. Agregar agua
y dejar secar-

la
visualizacin
de
los
corpsculos
metacromticos de color azul intenso
mientras los dems se ven de color
amarillo pardo.

Resultado

Teir con crisodina durante

10 min. Echar agua y secar..
Obsservar al microscopio

Crisoidina
Fijar el frotis con calor,
colocando la muestra 10 min
hasta la salida de vapores

Colorante de Neisser

Procedimiento

MTODO DE
NEISSER

Tincin de Cpsulas
Caractersticas
Son consideradas como un factor
de virulencia.
Poseen un espesor variable
Su composicin es de carcter
proteico
su teido es ms dificultoso

Estructuras que se
encuentran rodeando la
pared bacteriana
brindarle mayor resistencia

Para la observacin de cpsulas se deber entonces encontrar un

mtodo de tincin negativa como:

Mtodo de
Procedimiento
La
tinta
SUSPENSIN DE KLEBSIELLA/ STREPTOCOCCUS CAPSULADOS
chinaTinta China

Resultado

Se espera el
secado para
observar al
microscopio
con lente de
inmersin.

Se agrega
tinta china.
Con otra
lmina
portaobjetos
se hace una
extensin en
forma de
pelcula
delgada

Se coloca
una gota de
agua en el
extremo de
la lmina,

la
visualizacin
de
los
corpsculos
metacromticos de color caf verdoso oscuro.

tinta china es una

suspensin coloidal de
carbn

Procedimiento

Mtodo de
STREPTOCOCCUS CAPSULADOS
Hiss
CRISTAL VIOLETA

Coloca una gota de agua en el

extremo
Esperar el secado y teir con el
cristal violeta durante dos
minutos
Lavar con la solucin de sulfato
cprico.
debe dejar secar al aire y se coloca
en el microscopio para observar

Resultado

la visualizacin cocos
violetas con cpsulas
tenues.

o diplococos
celestes muy

Tincin de La Pared
Celular
Caractersticas
Pueden destruirse o romperse en condiciones
especiales.

Tiene menos afinidad con los colorantes que el citoplasma

Es importante encontrar un aumentar la afinidad y el grosor

de la misma

Es una estructura rgida que

da forma a la clula.
Brinda proteccin,
flexibilidad

Para realizar una identificacin de la pared celular por medio de

tincin, se debe hacer:

Procedimiento
Se coloca en una lmina una fraccin de una
colonia bacteriana

MTODO DE
TINCIN DE LA
PARED CELULAR
CRISTAL VIOLETA

Agregar una gota de agua destilada . Dejar

secar. Se deber fijar por medio del calor

cubrir el frotis con el mordiente de cido

tantnico por 30 minutos.

Importancia
lavar con agua para adicionar el cristal
violeta.

Luego de 2 o 3 minutos laver con agua.

Esperar el secado. Observar al microscopio

Permite la
distincin entre
las bacterias
Gram negativas
de la Gran
positivas.

Gram positivas

Gram negativas

TINCIONES ESPECIALES Se utilizan

Tincin de Auramina

utilizar colorantes
fluorescentes especiales

Es un colorante fluorescente
Son colorantes
fluorescentes especiales

Se utiliza generalmente para

teir micro bacterias cuando
haya gran cantidad de muestras

Ejemplo
La tcnica de colorazcin es
rpida y cmoda

Se logra observar los bacilos de

mycobacterium como bastoncillos
luminiscentes de color amarillo dorado
sobre un fondo oscuro negro violceo

Tincin de naranjo de acridina

esta tcnica se utiliza preferentemente
en lugares donde haya menos cantidad
de medios de cultivo
Su funcionamiento se trata de la unin
selectiva del naranja de acridina al
ADN bacteriano
se observar en el microscopio una
parte de la bacteria del color amarillo
fluorescente sobre los restos celulares

Ejemplo

Este puede ser el caso del

hemocultivo, el LCR, etc.