Clasificacin, Estructura y

Replicacin Viral
Dr. Jorge O. Garca Mndez
Instituto Nacional de
Cancerologa
1

 Los virus son:

Agentes filtrables
Parsitos intracelulares obligados
Incapaces de hacer energa o protenas
independientemente de una clula husped
Su genoma puede ser de ARN o ADN pero no ambos
Pueden tener una cpside desnuda o morfologa de
envoltura
Los componentes virales son ensamblados y no se
replican por divisin
3

Consecuencias de las propiedades

virales
Los virus no son seres vivos
Deben ser infecciosos para durar en la
naturaleza
Deben ser capaces de usar los procesos
celulares del husped para producir sus
componentes (ARNm viral, protenas y copias
idnticas de su genoma)
Deben codificar para cualquier proceso requerido
no provisto por la clula
Los componente virales deben ser capaces de
ejecutar auto-ensamblaje
4

Maneras de clasificacin y nombrar

a los virus
a. Estructura: forma, morfologa y cido
nucleico (p. ej. picornavirus pequeo
ARN-, togavirus)
b. Caractersticas bioqumicas: estructura y
modo de replicacin
c. Enfermedad: encefalitis y virus de
hepatitis

 Modo de transmisin: arbovirus

-arthropod borne virus- virus diseminado
por insectos
Husped: animal (humano, ratn, ave),
planta, bacteria
Tejido u rgano: (tropismo) adenovirus,
enterovirus

 Las unidades de medicin son los nanmetros

(nm)
Los virus + importantes van de 18nm (parvoviruseritema infeccioso) a los 300 nm de los poxvirus
viruela (visibles al microscopio de luz)
del tamao de S. aureus
Los virus mayores, tienen un genoma mayor y
pueden codificar para ms protenas y son ms
complejos
7

Comparacin tamao entre virus y

bacterias

 El virin (la particula viral) consiste de un

genoma de cido nucleico en una capa proteca
(cpside) o en una membrana (envoltura).
El virin puede tambin contener ciertas
enzimas esenciales o accesorias u otras
protenas
La cpside o las protenas unidas a los cidos
nucleicos pueden asociarse con el genoma para
formar la ncleocpside
9

Componente del virin bsico

10

Los virus ADN y su morfologa. Las familias

virales se deteminan por la estructura y la
morfologa del virin

11

Miembros de la familia de virus

ADN

12

Propiedades virus ADN

13

14

Forma

15

16

17

Los virus ARN, su estructura

gentica y su morfologa

18

Miembros de la familia de virus

ARN

19

Propiedades virus ARN

20

21

22

23

24

 El genoma puede ser ADN o ARN

El ADN puede ser de una o doble hebra,
linear o circular.
El ARN puede ser sentido positivo (+)
(como el ARN mensajero ARNm, o
negativo (-) anlogo a un negativo-,
doble hebra (+/-) o bisentido (ambisense)
conteniendo regiones de ARN + y juntas
por la parte final
25

 El ARN puede tambin estar segmentado

para codificar genes nicos (poliprotena)

26

 La capa externa del virin es la cpside o

envoltura
Tiene como funcin el empaquetamiento,
proteccin y entrada del virus de un
husped a otro y a la clula del husped
La remocin inactiva al virus (Ac antienvoltura previenen la infeccin)

27

Estructuras de virus con cpside desnuda arriba

e izquierda) y envueltos ( con una forma de la
nucleocpside icosahrdica y ribonucleocpside
helical derecha- asociado con un genoma ARN

28

Ensamblaje de la cpside de picornavirus, las protenas

individuales se asocian en subunidades, que se asocian
en protmeros, capsmeros y una procpside vaca. La
inclusin del genoma ARN (+) dispara su conversin a la
forma final de la cpside

29

Microscopa croelectrnica
1. nucleocpside
herpesvirus equino;
2. rotavirus simiano;
3. virin reovirus tipo 1
(Lang);
4. partcula intermedia
subviral (reovirus);
5. partcula core (cpside
interior) (reovirus);
6. VPH tipo 19;
7. polyomavirus del ratn;
8. virus del mosaico de la
coliflor.
Barra = 50 nm.

30

 La cpside es una estructura rgida capaz

de resistir condiciones ambientales
adversas
Los virus con cpsides desnudas son
capaces de resistir la desecacin, el cido
y detergentes (cido y bilis del TGI)
Transmisin caracterstica: fecal-oral
Incrementa su transmisin an en aguas
residuales
31

 La envoltura es una membrana

compuesta de lpidos, protenas y
glicoprotenas
La estructura membranosa puede
mantenerse slo en soluciones acuosas
Por ello, deben permanecer hmedos y
ser transmitidos en secreciones
corporales : gotillas respiratorias, sangre y
tejido.
32

Cpside desnuda
Componente: protena
Propiedades: estable al ambiente
siguiente
Temperatura
cido
Proteasas
Detergentes
Desecacin

Se libera de la clula por muerte

33

 Consecuencias
Puede ser diseminado facilmente:
en fomites, mano a mano, por polvo, por gotillas
pequeas
Pueden desecarse y permanecer infectivos
Pueden sobrevivir las condiciones adversas del
intestino
Pueden ser resistentes a detergentes y pobre
tratamiento de agua residuales
Los anticuerpos pueden ser suficientes para la
inmunoproteccin
34

 Virus con cpisde

Se ensamblan de protenas individuales aosicadas en
unidades progresivamente mayores
Las protenas estructurales individuales se asocian
en subunidaes, las cuales se asocian en protmeros,
capsmeros (ME), y finalmente una procpside o
cpside
En unos se forma alrededor del genoma, en otros se
forma como una concha vaca (procpside) a ser
llenada por genoma
35

 Las ms simples estructuras virales que

pueden ser armadas paso a paso son
simtricas e incluyen estructuras: helicales y
icosahdricas
Las primeras parecen como bacilos
Mientras los segundos son como esferas
ensamblados en subunidades simtricas
Las formas no simtricas son formas complejas
y se asocian con fagos (virus bacterianos)
36

 La forma clsica de un virus con simetria

helical:
Virus de la planta del mosaico
Sus capsmeros se autoensamblan en el
genoma ARN en bacilos que tienen la
longitud del genoma
Los capsmeros cubren y protegen al ARN.
Las ncleocpsides helicales se ven en la
mayora de virus ARN de hebra (-)
37

Modelo de paramyxovirus

38

 Los icosahedrones son usados por pequeos

virus (p. ej. picornavirus y parvovirus)
El icosahedrn est hecho de 12 capsmeros
con simetra de cinco lados (pentmero o
pentn)
Para los picornavirus cada pentmero est
hecho de cinco protmeros, c/u compuesto de 3
subunidades de 4 protenas separadas

39

 En cristalografa de RX y anlisis de
imagen de microscopa por croelectrones
tienen definida la estructura de la cpside
de los picornavirus al nivel molecular
En stos, se ha descrito una hendidura
como can que es el sitio de anclaje
para unirse al receptor de la superficie del
husped
40

Estructura de picornavirus e
interaccin con ICAM-1

41

 Los viriones de cpside mayores se construyen

por la insercin de capsmeros
estructuralmente distintos entre los pentones en
sus vrtices.
Estos capsmeros tienen seis vecinos prximos
(hexones)
esto extiende el icosahedron y es llamado un
icosadeltahedron
Su tamao est determinado por el # de
hexones insertados a lo largo de sus orillas y
dentro de las superficies de los pentones
42

 P. ej. la nucleocpside de un herpesvirus

tiene 12 pentones y 150 hexones.
La nucleocpside herptica tambin se
rodea por una envoltura
La cpside del adenovirus est compueto
por 252 capsmeros, 12 pentones y 240
hexones, con una larga fibra que se ancla
a c/penton (protena de anclaje viral
VAP- antgeno especfico)
43

 Los reovirus tienen un cpside doble

icosahdrica con protenas como fibras
parcialmente extendidas de c/vrtice
La capa externa protege al virus y
promueve su captura por el TGI y en
clulas blanco, mientras que la cpside
interna contiene enzimas para la sntesis
del ARN
44

Envoltura
Componentes:

Membrana
Lpidos
Protenas
Glicoprotenas

Propiedades: en el ambiente lbil, fcilmente sufre

disrupcin:

Por cido
Detergentes
Desecacin
Calor

Modifica la membrana celular durante la replicacin

Se libera por gemacin y lisis celular
45

 Consecuencias
Debe permanecer hmedo
No puede sobrevivir el tracto GI
La diseminacin en grandes gotillas, secreciones,
transplantes de rganos y transfusin
No necesita matar la clula para diseminarse
Puede necesitar anticuerpos y respuesta inmune
mediada por clulas para proteccin y control
Fomenta hipersensibilidad e inflamacin para causar
inmunopatognesis
46

Virus con envoltura

La envoltura se compone de lpidos, protenas y
glicoprotenas
Tienen una estructura similar a las membranas
celulares.
Raramente halladas en la envoltura viral, an
cuando se obtienen de la membrana celular
La mayora son redondos o pleomrficos
Dos excepciones (poxvirus con estructura
externa como ladrillo y los rhabdovirus con
forma de bala
47

Diagrama del trmero de la

glicoprotena de HA de InfA

48

 > de glicoprotenas virales tienen un CHO ligado

a asparagina (ligado a N) y se extiende en la
envoltura como una lanza
> de glicoprotnas acta como VAP
VAP-eritrocitos = hemaglutininas
Otras: neuraminidasas orthomyxovirus Y las glicoprotenas de VHS asociadas a los
receptores Fc y C3b o las glicoprotenas de
fusin de los paramyxovirus
49

 La envoltura de los togavirus rodea una

nucleocpside icosahdrica conteniendo una
hebra de ARN(+)
Todos los virus ARN(-) tienen envoltura
Componentes del asociado polimerasa ARNdependiente de ARN de los orthomyxovirus,
paramyxovirus y rhabdovirus
Estas enzimas se requieren para la iniciacin de
la replicacin viral
50

 Las protenas de matriz a lo largo del interior de

la envoltura facilitan el ensamblaje de la
ribonucleocpside en el virin
Influenza A (orthomyxovirus) es un ej. de ARN(-)
con un genoma segmentado
La envoltura (InfA) est alineada con protenas
de matriz y tiene 2 glicoprotenas (H VAP- y
NA)
Los bunyavirus no tienen protenas de matriz
51

 La envoltura de los VHS tiene una

estructura como de bolsa que rodea la
nucleocpside icosadeltahdrica
Dependiendo del VHS especfico, la
envoltura puede contener tanto como 11
glicoprotenas
El espacio intersticial entre la
nuclecpside y la envoltura = tegumento
(contiene enzimas, protenas y an ARN m
52

 Los poxvirus son virus envueltos con formas de

ladrillo, la envoltura tiene una forma de
mancuerna
La estructura de la nucleocpside conteniendo
ADN
Cuerpos laterales
Fibrillas
Un # grande enzimas y protenas, incluyendo la
requeridas para la sntesis del ARNm
53

Replicacin viral
La clula acta como fbrica, provee el
sustrato, energa y maquinaria
Los procesos no provistos por la clula
son codificados por el genoma viral
La manera en la que c/virus lleva a cabo
estos pasos y sobrepasa las limitaciones
bioqumicas de la clula est determinado
por la estructura del genoma y del virin
54

Esquema general de replicacin viral. Virus con

envoltura tienen vas alternativas de entrada (3),
ensamblaje y salida de la clula (8 y 9)

55

 Puede dividirse en varias fases:

Fase temprana, el virus debe reconocer el
blanco apropiado, anclarse a la clula,
penetrar la membrana plasmtica y se
tomado por la clula, liberar (desenrollar) el
genoma en el citoplasma y si es necesario
liberar el genoma al ncleo

56

Curva de crecimiento de un ciclo de un virus

que es liberado con lisis celular

57

 Fase tarda: que inicia con el arranque de la

replicacin viral y la sntesis viral
macromolecular, procede a lo largo del
ensamblaje viral y liberacin
La liberacin uncoating- del genoma abole
su infectividad iniciando el perodo de eclipse
Este finaliza con la aparicin de nuevos
viriones luego del ensamblaje viral
El perodo latente es durante el cual los virus
infecciosos extracelulares son indetectables
58

 c/clula puede producir tanto como 100k

partculas (sin embargo slo 1-10% son
infectivas, el resto son no infectivas =
defectuosas)
Esto ltimo por la mutaciones y errores en la
manufactura
El alcance de los virus infecciosos por clula
y el tiempo requerido para un ciclo nico de la
reproduccin viral est determinado por las
propiedades virales y la clula blanco
59

Ejemplos de VAP

60

 La unin de VAP a los receptores de la clula

determina inicialmente cules celulas sern
infectadas
Pueden ser protenas o CHO en glicoprotenas o
glicolpidos
Los virus que se unen a receptores expresados
en tipos celulares especficos pueden estar
restringidos a ciertas especies (rango de
husped p. ej. ratn-) o tipos celulares
especficos
61

 Las clulas blanco susceptibles determinan el

tropismo especfico (EBV-receptor C3d (CR2) de
clulas B humanas
El parvovirus B19 se une a globsido (antigno
P del grupo sanguneo) expresado en
precursores eritrocitarios
La estructura de anclaje viral para una cpside
viral puede ser parte de la cpside o una
protena que se extiende a partir de la misma
62

 Un can en la superficie de los picornavirus

(rhinovirus 14) sirve como el agujero de una
chapa para la insercin de una porcin de la
molcula ICAM-1 de la superficie celular
Las fibras de los adenovirus y las protenas -1
de los reovirus y flavivirus en los vrtices de las
nucleocpsides interactan con receptores
expresados en las clulas blanco especficas

63

 Las VAP son glicoprotenas especficas de

virus envueltos (HA InfA se une a cido
silico expresado en muchs clulas
distintas y tiene un amplio rango adems
de tropismo celular)
Los -togavirus y los flavivirus se unen a
receptores de muchas especies animales
permitiendo la diseminacin por stos
64

Ejemplos de receptores virales

65

Penetracin
VAP-receptores celulares inicia con la
internalizacin de los virus en la clula
Depende de cada estructura viral y tipo celular
> virus no envueltos entran a la clula por
endocitosis mediado por receptor o por viropexis
Picornavirus y papovavirus entran por viropexis:
las estructuras hidrofbicas pueden estar
expuestas luego de la unin viral a las clulas y
estas estructuras ayudar al virus o genoma viral
a deslizarse a travs de la clula (penetracin
directa)
66

 Los virus envueltos fusionan sus membranas a

la membrana celular para liberar la
nucleocpside o genoma directamente al
citoplasma
El pH ptimo para la fusin determina si la
penetracin ocurre en la superficie celula en pH
neutral o si el virus debe ser internalizado por
endocitosis y fusionarse en un endosoma a pH
cido
La actividad de fusin puede ser provista por
VAP u otra protena
67

 La HA InfA se une a los receptores de cido silico en la

clula blanco
Bajo las conciones acdicas del endosoma, la HA sufre
un cambio conformacional para exponer porciones
hidrofbicas capaces de de promever la fusin de
membrana
Los paramyxovirus tienen una membrana de fusin que
es activa a pH neutral para promover la fusin clulaclula y forma clulas gigantes multinucleadas (sincicio),
algunos VHS y retrovirus se fusionan con clulas a un
pH neutral e inducen sincicios luego de la replicacin

68

 Desenrollamiento:
Una vez internalizado la nucleocpside debe ser
liberado al sitio de replicacin dentro de la clula y la
cpside o envoltura removida
El genoma de los virus ADN excepto poxvirus debe
ser liberado al ncleomientras que la > de ARN
permanecen en el citoplasma
El proceso inicia por anclaje a los receptores o bien
promovido por el ambiente cido o proteasas
localizadas en el endosoma o lisosoma
69

 Las cpsides de picornavirus son

debilitadas por la liberacin de protena de
capside VP4
Los virus envueltos son denudados a la
fusin de la membrana celular (la fusin de
VHS con la membrana plasmtica libera su
nucleocpside que se ancla a la
membrana nuclear para liberar su genoma
ADN directamente al sitio de replicacin
70

 La libracin de la nucleocpside de Inf de su

matriz y envoltura es facilitado por el paso de
protones de adentro del endosoma a travs del
poro de iones formado por la protena de matriz
M2 para acidificar el medio ambiente
Los reovirus y los poxvirus estn slo
parcialmente cubiertos a la entrada
La membrana externa de los primeros se
remueve pero el genoma permanece en la
cpsula interna, la cual contiene las polimerasas
necesarias para la sntesis del ARN
71

 El desenrollamiento inicial de los poxvirus

expone una subpartcula viral al
citoplasma permitiendo la sntesis de
ARNm por enzimas contenidas en el virin
Una enzima desenvuelta puede luego ser
sintetizada para liberar el core
conteniendo el ADN en el citoplasma

72

Sntesis macromolecular
Una vez adentro de la clula, el genoma debe
dirigir la sntesis de ARNm, protenas y generar
copias idnticas
La transcripcin, traduccin y replicacin del
genoma son por ello los pasos ms importante
en la multiplicacin viral
El genoma es intil si no puede ser transcrito en
ARNm funcional capaz de unirse a ribosomas y
ser traducido a protenas
73

Etapas de sntesis macromolecular

viral

74

 La maquinaria celular para la transcripcin y

procesos del ARNm se encuentra en el ncleo.
La mayora de virus ADN usan la ARN
polimerasa II dependiente de ADN de la clula y
otras enzimas para hacer ARNm
P. ej. los ARNm eucariotas adquieren una cola
3poliadelinada (poliA) y un extremo 5metilado
(para unirse al ribosoma), para liberar intrones
antes de ser exportados al citoplasma
75

 Los virus que se replican en el citoplasma

deben proveer estas funciones o una
alternativa
Aunque los poxvirus son ADN se replican
en el citoplasma y codifican enzimas para
estas funciones.
Los virus ARN se replican y producen
ARNm en el citoplasma, excepto por los
orthomyxovirus y los retrovirus.
76

 Los virus ARN deben codificar las

enzimas necesarias para la transcripcin
y replicacin porque la clula no tiene
medios para replicar ARNm
Los ARNm pueden o no adquirir un
extremo 5 o una cola poliA

77

 El genoma desnudo de virus ADN

(excepto poxvirus) y virus en sentido +
(excepto retrovirus) son algunas veces
llamados cidos nucleicos infecciosos
porque son suficientes para iniciar
replicacin al ser inyectados en la clula
Pueden interactuar directamente con la
maquinaria del husped para promover
ARNm o sntesis proteica o ambas
78

 Por lo general el ARNm para estructuras

no proteicas se transcribe primero
Los genes de productos tempranos
(protenas no estructurales) son a menudo
protenas que se unen al ADN y enzimas,
incluyendo polimerasas codificadas por el
virus
Estas protenas son catalticas y slo unas
cuantas son requeridas
79

 La replicacin del genoma usualmente

inicia la transicin a la transcripcin de
genes de productos tardos
Estos codifican para protenas
estructurales, muchas copias de estos
productos son requeridas para empacar el
virus pero generalmente no son
requeridos antes que el genoma se
replique
80

 Diferentes virus ADN y ARN controlan el

tiempo y cantidad de genes virales y
sntesis proteicas en diferentes vas

81

 Replicacin virus ADN

Requiere una polimerasa de ADN
dependiente de ADN, otras enzimas y
trifosfatos desoxiribonucletidos,
especialmente timidina
La transcripcin del genoma del virus ADN
(excepto poxvirus) ocurre en el ncleo,
usando las polimerasas del husped y otras
enzimas para la sntesis del ARNm viral
82

 La transcripcin de los genes virales es regulada por

la interaccin de protenas unidas a ADN especficas
y promotores y aumentadores que son similares en
secuencia a aquellos de la clula que permiten la
unin de la de la activacin de la transcripcin celular
y ARN polimerasa dependiente de DNA
P. ej. las neuronas slo transcriben un gen para el VHS, a
menos que la clula se vea activada por estrs y como
resultado el virus permanece en estado latente.

La transcripcin por ello es un factor en determinar el

tropismo celular y el rango de husped del virus
83

 Los diferentes virus ADN controlan la

duracin, tiempo, y cantidad de genes
virales y sntesis proteica en diferentes vas:
A + complejo el virus > codificacin de sus
propios activadores transcripcionales
VHS codifica para protenas que regulan las
cinticas de la expresin del gen viral.
Los genes pueden ser transcritos ya sea de hebra de
ADN del genoma y en direcciones opuestas
84

 Los genes tardos de los papovavirus y

adenovirus son inicialmente transcritos como
un gran ARN de un simple promotor y luego
procesado para producir varios ARNm luego
de la remocin de varias secuencias entre
exones (intrones)

85

 La replicacin de ADN viral siguen las misma

reglas bioqumicas que el ADN celular
La replicacin se inicia en una secuencia de
ADN nica en el genoma, llamado el origin (ori)
este sitio reconocido por factores nucleares
virales o del husped y por la polimerasa de
ADN dependiente de ADN.
La sntesis del ADN viral es semiconservativa y
las polimerasas de ADN celular y viral requieren
un primer para iniciar la sntesis de la cadena de
ADN
86

 Los parvovirus tienen secuencias de ADN que

son invertidas y repetidas para permitir al ADN a
doblarse e hibridarse consigo mismo para
proveer un primer (secuencia de OligoNT)
La replicacin del genoma de adenovirus es
(primed) por el monofosfato de desoxicitidina
pegado a una porcin terminal.
Una enzima celular (primasa) sintetiza el primer
ARN que inicia la replicacin del genoma de
papovavirus mientras el VHS codifica una
primasa
87

 La replicacin del genoma de virus ADN simples

(parvovirus, papovavirus) usa las polimerasas
ADN dependientes de ADN del husped,
mientras que los virus > complejos (adenovirus,
VHS, poxvirus) codifican sus propias
polimerasas
Las polimerasas virales usualmente son +
rpidas pero menos precisas que las del
husped, causando una mayor tasa de
mutaciones en virus y por ello provee un blanco
para los anlogos de nucletidos como
antivirales
88

 La replicacin de los hepadnavirus es nica en

que un intermediario ARN circular de sentido (+)
es primeramente sintetizado por la polimerasa
ARN dependiente de ADN celular.
Las protenas virales rodean al ARN, una
polimerasa ADN dependiente de ARN
(transcriptasa reversa) en este virin hace una
hebra ADN (-) y luego el ARN es degradado.
La sntesis de ADN hebra (+) se inicia pero para
cuando el genoma y el core estn envueltos,
dejando un genoma ADN circular doble hebra
89

 Las mayores limitaciones para la

replicacin del virus ADN incluyen la
disponibilidad de la polimerasa de ADN y
sustratos de desoxiribonucletidos
La mayora de clulas en la fase de
reposo y no desarrollan sntesis de ADN
porque las enzimas necesarias no estn
presentes y el pool de desoxitimidina est
limitado
90

 A + pequeo el virus ADN, + la dependencia del virus en

la clula
Los parvovirus son los > pequeos y se replican
nicamente en clulas que crecen (precursores
eritroides o tejido fetal)
El acelerar el crecimiento de la clula puede aumentar el
ADN viral y la sntesis de ARNm
El Ag T de SV40 y E6/E7 del papilomavirus y la protena
E1a de adenovirus se une y previenen la funcin de
protenas inhibidoras del crecimiento (p53 y producto del
gen de retinoblastoma) resultando en crecimiento celular
y promocin de la replicacin viral
91

 Los virus ADN > pueden codificar una

polimerasa ADN y otras protenas para facilitar
la sntesis de ADN y son + independientes
VHS codifica una polimerasa ADN y enzimas
oxidantes (desoxirribonucleasa, ribonucletido
reductasa y timidn cinasa), p/generar los
sustratos desoxirribonucletidos necesarios
para replicar su genoma

92

93

94

Virus ARN
La replicacin y transcripcin de los virus
ARN son procesos similares
Los genomas virales son usualmente un
ARNm (ARN hebra +) o una copia de
ARNm (ARN hebra -)
Durante la replicacin y transcripcin, una
rplica ARN doble hebra intermediario es
formado (una estructura normalmente no
hallada en las clulas no infectadas)
95

1.
2.
3.
4.
5.
6.

Replicacin de Picornavirus. Un virus ARN (+) simple

Interaccin de picornavirus con receptor en la superficie celular define el blanco y
debilita la cpside
El genoma es inyectado a travs del virin y cruza la membrana celular
El genoma es usado como ARNm para la sntesis proteica, una gran poliprotena se
produce
La poliprotena es rota proteolticamente en protenas individuales incluyendo una
polimerasa ARN dependiente de ARN
La polimerasa hace una copia de hebra (-) y replica el genoma. Una protena VPg es
agregada de manera covalente al extremo 5 del genoma viral
Las protenas estructurales se asocian en la estructura de la cpside, el genoma se
inserta y los viriones son librados en lisis celular

96

Propiedades de los virus ARN

97

98

 El genoma del virus ARN debe codificar

para polimerasas ARN dependiente de
ARN (replicasas y transcriptasas) ya que
la clula no tiene medios de replicar ARN
Ya que el ARN es degrado rpidamente
las polimerasas deben ser sintetizadas
pronto para generar + ARN viral o la
infeccin se aborta
99

 La mayora de las polimerasas virales

trabaja rpido y por ello puede cometer
errores, causando mutaciones
La replicacin del genoma provee nuevas
copias para la produccin de + ARN m lo
cual amplifica y acelera la replicacin viral

100

 Los genomas virales ARN hebra (+) de los

picornavirus, norovirus, coronavirus, flavivirus y
togavirus actan como ARNm, se unen a
ribosomas y dirigen la sntesis proteica
El genoma ARN sentido (+) desnudo por s solo
puede iniciar la infeccin
Luego que la polimerasa ARN dependiente de
ARN es producida, una copia hebra (-) es
sintetizada
101

 La copia puede ser usada luego para

generar + ARNm replicar el genoma
Para los togavirus y norovirus la copia (-)
tambin se usa para producir un ARN +
pequeo para las protenas estructurales
(genes tardos)
El ARNm de stos no est limitado en el
extremo 5, pero el genoma codifica una
secuencia corta poliA
102

 La transcripcin y replicacin de los coronavirus

comparten muchas de estos aspectos pero son
ms complejos
Los genomas de los virus ARN (-), de los
rhabdovirus, orthomyxovirus, paramyxovirus,
filovirus y bunyavirus son las copias para la
produccin de su ARNm
La hebra (-) no es infecciosa en s y una
polimerasa debe ser acarreada en la clula con
el genoma (asociado con el genoma como parte
de la nucleocpside) para hacer ARNm individual
de las diferentes protenas virales
103

 Como resultado, una hebra de ARN (+) debe ser

producida por la polimerasa viral para actuar
como copia para generar ms copias del
genoma
El genoma es un negativo: cada marco codifica
para una foto/ARNm pero una copia de longitud
completa se requiera para replicar el rollo
Excepto para virus INF, la transcripcin y
replicacin de los virus hebra (-) ocurre en el
citoplasma
104

 La transcriptasa de los INF requiere de un

primer para producir ARNm
Usa los extremos 5 del ARNm celular en
el ncleo como primers para su
polimerasa y en el proceso roba el
extremo 5 del ARNm celular
El genoma de INF se replica en el ncleo

105

 Los reovirus tienen un genoma doble

hebra segmentado y se someten a formas
+ complejas de replicacin y transcripcin
La polimerasa ARN es parte del core
interior de la cpside
Las unidades de ARNm son transcritos de
cada uno de los 10 o + segmentos del
genoma mientras todava estn en el core
106

 Las hebras negativas de segmentos del genoma se

usan como copias para el ARNm de manera similar a las
de los virus ARN hebra (-)
Las enzimas codificadas por los reovirus contenidas en
el core interior de la cpside agregan el lmite 5 al ARNm
viral.
El ARNm no tiene poliA
Los ARNm son liberados al citoplasma donde dirigen la
sntesis proteica o son secuestrados en nuevos core
El ARN (+) en los nuevos core acta como una copia
para el ARN (-) y la polimerasa del core produce la
progenie con ARN doble hebra
107

 Los arenavirus tienen un genoma

ambisense con secuencias (+)
adyacentes a secuencias (-)
Los genes tempranos del virus son
transcritos de la porcin sentido (-) y los
tardos de la rplica intermedia de longitud
completa

108

 Aunque los retrovirus tienen un genoma sentido

(+), el virus no tiene medios de replicar el ARN
en el citoplasma. En lugar de ello llevan 2
copias de su genoma, 2 molculas de ARNt y
una polimerasa ADN ARN dependiente
(transcriptasa reversa) en el virin
El ARNt es usado como un primer para la
sntesis de la copia de ADN circular
complementario (ADNc) del genoma
109

 Este se sintetiza en el citoplasma, viaja al

ncleo y luego se integra a la cromatina del
husped
El genoma viral se convierte en un gen celular
Promotores al final del genoma viral integrado
aumentan la transcripcin de las secuencias del
ADN viral por la clula
Los transcritos completos son usados como
nuevos genomas y ARNm individual son
generados por ruputra difrencial de este ARN
110

 El modo inusual de replicacin es el de los

deltavirus (semejante a un viroide)
El genoma es circular, baciliforme, ARN de una
hebra el cual es hibridizado extensamente a s
mismo
Como excepcin, el genoma ARN del deltavirus
se replica por la ARN polimerasa II ADNdependiente de la clula husped en el ncleo
Una porcin del genoma forma una estructura
ARN llamada un ribozima el cual rompe el
crculo ARN para producir un ARNm
111

Sntesis de protenas virales

Todos los virus dependen de los ribosomas,
ARNt y mecanismos para la modificacin
postraduccional de la clula husped para
producir sus protenas
La unin al ribosoma est mediado por una
estructura 5 limtrofe (cap) de guanosina
metilada a una estructura especial en rizo de
ARN (secuencia interna de entrada al ribosoma
IRES-) el cual se une dentro del ribosoma para
iniciar la sntesis proteica
112

 Esta estructura fue descrita inicialmente en el

genoma de los picornavirus y luego en ARNm
celulares selectos
La mayora pero no todos los ARNm virales
tienen una cola poliA, como los ARNm eucariotas
A diferencia de ribosomas bacterianos que
pueden unirse a ARNm policistrnico y traducir
varias secuencias de genes en protenas
separadas, el ribosoma eucariota slo hace una
protena continua
113

 Los virus tienen que lidiar con ello

P. ej. el genoma entero de un virus ARN (+) es
ledo por el ribosoma y traducido en una
poliprotena gigante que luego es rota por
proteasas virales y celulares en protenas
funcionales
Virus ADN, retrovirus y la mayora de ARN(-)
transcriben ARNm separados para poliprotenas
ms pequeas o bien protenas individuales
Los genomas de los orthomyxovirus y los
reovirus son segmentados y la mayora de los
segmentos codifican una protena nica
114

 Los virus se valen de tcticas distintas para

promover traduccin preferencial de su ARNm en
lugar de ARNm celular
En muchos casos los hacen porque ocupan la
mayora de los ribosomas previniendo la
traduccin celular
Adenovirus bloquea la salida de ARNm celular
del ncleo
VHS inhiben la sntesis macromolecular e
inducen degradacin del ADN celular y ARNm
115

 Los poliovirus usan una proteasa codificada por

el virus para inactivar la protena de 200,000Da
de unin al cap del ribosoma previniendo la
unin y traduccin del ARNm celular 5 capped
Los togavirus y otros virus incrementan la
permeabilidad de la membrana celular, as se
disminuye la afinidad ribosoma para su
respectivo ARNm
Todo ello conlleva a la citopatognesis viral
116

 Algunas protenas virales requieren

modificaciones post-traduccionales
(fosforilacion, glicosilacin, acilacin o sulfacin)
La fosforilacin proteica se lleva a cabo por
proten cinasas virales o celulares y es un medio
de modular, activar o inactivar protenas.
Varios VHS codifican su propia proten cinasa
Las glicoprotenas virales son sintetizadas en
los ribosomas unidos a la membrana y tienen
secuencias de AA que les permiten insercin al
REG y la glicosilacin ligada a N
117

 La forma del precursor rico en manosa de las

glicoprotenas progresa del RE a travs de
transporte vesicular en la clula y es procesado
en el aparato de Golgi (AG)
La presencia de las glicoprotenas determina si
el virin se ensambla

118

Ensamblaje
Es anlogo a un rompecabeza
tridimensional
C/parte del virin tiene estructuras de
reconocimiento necesarias para
ensamblar la estructura final
Este proceso inicia con la sntesis de
piezas necesarias y la [protenas
estructurales] es suficiente para llevar al
proceso termodinmicamente
119

 El proceso puede facilitarse por protenas de

andamiaje que son activadas o liberan energa
en proteolisis
P. ej. la ruptura (cleavage) de la protenas VP0
del poliovirus libera el pptido VP4 que solidifica
la cpside
El ensamblaje de los virus ADN (aparte de los
poxvirus) ocurre en el ncleo y requiere del
transporte de protenas del virin al ncleo.
Los virus ARN y poxvirus en el citoplasma
120

 Los virus de cpside pueden ensamblarse como

estructuras vacas (procpsides) y ser llenada
por el genoma (picornavirus) o ser ensambladas
alrededor del genoma
Nucleocpsides de retrovirus, togavirus y virus
ARN (-) se ensamblan alrededor y
subsecuentemente en una envoltura
La nucleocpside helical de los virus ARN (-)
incluye la ARN polimerasa ARN dependiente
necesaria para la sntesis de ARNm en la clula
blanco
121

 En los virus con envoltura, las glicoprotenas virales son

liberadas a la membrana celular por transporte vesicular
La adquisicin de la envoltura ocurre luego de la
asociacin de la nucleocpside con las regiones
conteniendo glicoprotenas virales de la membrana
celular husped (gemacin)
Las protenas de matriz para virus ARN(-) se alinean y
promueven la adhesin de nucleocpsides con la
membrana modificada de glicoprotenas, la membrana
rodea la nucleocpsdide, llevando a la gemacin del
virus

122

 El tipo de genoma y secuencia proteica de las

glicoprotenas determina el sitio de gemacin
La mayora de los virus ARN gema de la
membrana plasmtica el virus es liberado de la
clula al mismo tiempo
Flavivirus, coronavirus, bunyavirus adquieren su
envoltura al gemar en membranas del RE y AG
y pueden permanecer asociados a la clula en
estos rganos
123

 La nucleocpside de VHS se ensambla en el

ncleo y gema en y del RE
La nucleocpside es descargada en el
citoplasma, protenas virales se asocian con la
cpside y luego la envoltura se adquiere por
gemacin en una membrana de Golgi decorada
con las 10 glicoprotenas virales
El virin se transporta a la superficie celular y es
liberado por exocitosis o lisis celular o
transmitida por puentes clula-clula
124

 Los virus usan diferentes trucos para

asegurarse que tosas las partes se
ensamblen en viriones ocmpletos
La ARN polimerasa rquerida para
infeccin de los virus ARN (-) es llevada
en el genoma como una nucleocpside
helica

125

 El VIH (y otros retrovirus) son empacados en

una procpside consistente en una poliprotena
conteniendo la proteasa, polimerasa, integrasa y
protenas estructurales
Esta procpside se une memranas modificas
con glicoprotenas virales y el virin emerge de
la membrana
La proteasa codificada por el virus es activada
dentro del virin y rompe una la poliprotena para
producir al final la nucleocpside infecciosa y las
protenas requeridas dentro de la envoltura
126

 El ensamblaje de un virus Influenza o reovirus

requiere la acumulacin de al menos una copia
de cada segmento de gen
Aunque Inf requiere 8 segmentos nicos de
genoma, lo viriones pueden empacar al azar 10
a 11 segmentos
Estadsticamente esto equivale a un set
completo de genomas (y virus funcionales) por
cada 20 virus defectuosos
127

 Se hacen errores durante el ensamblaje.

(viriones vacos y viriones conteniendo genomas
defectuosos)
El radio partcula:virus infecioso es alto,
usualmente > 10 y durante la replicacin rpida
viral puede ser 104
Los virus derectuosos pueden ocupar la
maquinaria requierida para la replicacin normal
viral para interferir con la produccin viral
(partculas interferentes defectuosas)
128

Liberacin
Los virus pueden liberarse luego de lisis,
por exocitosis, gemacin de la membrana
plasmtica
Los virus de cpside desnuda
generalmente por lisis
La liberacin de muchos virus con
envoltura ocurre luego la gemacin de la
membrana plasmtica sin matar la clula
Lisis y gemacin son mtodos eficientes
129

 Virus que geman o adquieren sus membranas

en el citoplasma (flavivirus, poxvirus)
permanecen asociados a la clula y son
liberados por exocitosis o lisis celular
Los virus que se unen a los receptores del cido
silico (orthomyxovirus, algunos paramyxovirus)
pueden tener una NA
sta remueve los receptores potenciales de
cido silico en las glicoprotenas del virin y la
clula para prevenir el agrupamiento y permitir la
liberacin
130

Reinicio del ciclo de replicacin

Los virus liberados al medio EC,
usualmente son responsables de iniciar
nuevas infeccines
Sin embargo puentes clula-clula, fusin
clula-clula inducida por virus o
transmisin vertical del genoma a clulas
hijas puede diseminar la infeccin
Esto evita la deteccin por Ac
131

 Algunos VHS, retrovirus, paramyxovirus

inducen la fusin clula-clula para unir
las clulas en clulas gigantes
multinucleadas (sincicios) los cuales se
convierten en gigantescas fbricas de
virus
Los retrovirus y algunos ADN pueden
transmitir su copia integrada del genoma
a la clulas hijas en divisin celular
132

Gentica viral
Las mutaciones espontneamente y fcilmente
ocurren en genomas virales creando nuevas
cepas distintas a la cepa salvaje
Estas variantes se identifican por las secuencias
de nucletidos, diferencias antignicas o
propiedades estructurales o funcionales
La > de mutaciones no tienen efectos o inciden
en el virus
La mutaciones en genes esenciales lo inactivan
133

 Pero mutaciones en otros genes, les

hacen tener resistencia antiviral o alterar
su antigenicidad o patogenicidad
Los errores son producto de la pobre
fidelidad de la polimerasa viral y la rpida
tasa de replicacin del genoma
Adems los virus ARN no tienen un
mecanismo gentico que examine errores
Mutaciones + comunes ARN > ADN
134

 Mutaciones en genes esenciales: letales

Una mutante de delecin: prdida o
remocin selectiva de una porcin del
genoma y la funcin que codifica
Otras mutaciones producen mutantes de
placa, difieren del WT en tamao o
apariencia de las clulas infectadas
Mutantes de rango de husped: difieren
en el tejido o especies afectadas
135

 Mutantes atenuadas: variantes que causan

menos enferemedad
Mutantes condicionales (sensibles a
temperatura, mutantes sensibles al fro) tienen
una mutacin en un gen para una protena
esencial que permite al virus producirse slo a
ciertas temperaturas. Cepas mutantes crecen
mejor a 30 a 35C mientras que la protena
codificada es inactiva a 38 -40 previniendo la
infeccin viral
136

 Las nuevas cepas de virus pueden

generarse por interacciones genticas
entre virus o entre virus y las clulas

137

 El intercambio gentico intermolecular entre los

virus o el virus y el husped es llamado
recombinacin
La recombinacin puede ocurrir entre dos virus
ADN relacionados (VHS 1 y 2)
La integracin del retrovirisu con la cromatina
del husped es una forma de recombinacin
La recombinacin de 2 virus ARN relacionados:
Sindbis + EEEV= WEEV (otro togavirus)
138

 Los virus con genoma segmentado

(Inf/reovirus) forman cepas hbridas en
infeccin de una clula con ms de una
cepa viral

139

 En algunos casos una cepa defectuosa puede

ser rescatada por la replicacin de otra mutante
(WT o por una lnea celular que lleve un gen viral
de reemplazo)
La replicacin del otro virus o la expresin del
gen en la clula provee la funcin faltante
requerida por un mutante: complementacin
El rescate de una mutante o una condicn letal
con una secuencia definida (p. ej. un fragmento
de endonucleasa de restriccin de ADN ) se
llama marcador de rescate
140

 El marcador de rescate se usa para mapear los

genomas de los virus (VHS p. ej.)
Los virus producidos de clulas infectadas con
diferentes cepas viralespueden ser fenotpicamente
mezclados y tener las protenas de una cepa pero el
genoma de otra (transcapsidacin)
Los Pseudotipos son generados cuando la
transcapsidacin ocurren entre diferentes tipos de
virus
Las cepas virales individuales son seleccionada por su
habilidad de usar la maquinaria del husped y resistir
condiciones adversas
141

 Presiones de seleccin: velocidad de crecimiento celular,

la expresin tejido especfica requerida por el virus
Las condiciones del cuerpo, su temperatura elevada,
defensas innatas e inmunes y estructura de tejido son
presiones de seleccin
Una pequea ventaja selectiva en virus mutantes puede
llevar a que se vuelva la cepa predominante. La alta
tasa de mutacin del VIH promueve un cambio en el
tropismo de la clula blanco de macrfagos a clulas T,
el desarrollo de resistencia a ARV y la generacin de
variantes antignicas en el curso de tratamiento
La ausencia de stos en condiciones de laboratorio logra
cepas atenuadas para su uso en vacunas
142

Vectores virales para terapia

Los virus genticamente manipulados son
excelentes sistemas para genes ajenos
Pueden proveer
Terapia de reemplazo
Usados en vacunas para promover inmunidad a
cncer u otros agentes
Pueden actuar como asesinos con blanco definido de
tumores

La ventaja es que pueden ser amplificados por

replicacin en clulas apropiadas y pueden
llegar a tejidos especficos y liberar ADN o ARN
en la clula
143

 Virus que se desarrollan como vectores:

Adenovirus
Retrovirus
VHS
Virus adeno-asociado (parvovirus)
Poxvirus (vaccinia y canarypox)
Algunos togavirus

Los vectores virales usualmente son

defectuosos o atenuados en el que el ADN ajeno
reemplaza un gen virulento o no esencial
144

 El gen puede estar bajo el control de un

promotor viral o bien un promotor tejido
especfico
Los vectores virales defectuosos son crecidos
en lneas celulares que expresan las funciones
virales faltantes complementando el virus
La progenie libera el cido nucleico pero no
virus infecciosos
Retrovirus y virus adeno-asociados pueden
integrarse a clulas y liberar permanentemente
genes al cromosoma celular
145

 Los adenovirus y VHS promueven la liberacin

dirigida del gen ajeno a las clulas que
contienen los receptores
VHS genticamente atenuado es capaz de
desarrollar especficamente la muerte de clulas
en crecimiento de glioblastomas respetando
tejidos circundantes
El virus vaccinia lleva un gen para la
glicoprotena de la rabia (ya utilizada en
mapaches, zorros y zorrillos salvajes)
146