Procesos de

Bioseparacin

Unidad I
RUPTURA CELULAR
CLASE 3

Visto anteriormente
Estrategia de Diseo de Proceso
DOWNSTEAM
Composicin de entrada a una
corriente DSP
Varios procesos de produccin
Tabla de Purificacin

Caldo de Fermentacin
Con Clulas

Protenas
intracelular

Sin Clulas
Clulas inmovilizadas
Clulas retenidas

Separacin de Clulas

Rompimiento Celular
Separacin Material
Intracelular (Desechos)

Sobrenadante
Precipitacin cidos
Nucleicos, Proteasas
Tratamiento de cuerpos incluidos
Concentracin

Purificacin Alta
Resolucin

Refinamiento
Permite
Altos niveles de pureza
Estabilidad del producto

Qu sabemos acerca un frmaco

biotecnolgico?

EFECTO

Teraputico

Preventivo

Rehabilitator
io
Protenas recombinantes, anticuerpos
monoclonales, secuencia de cidos
nucleicos

Sistemas de expresin de PROTENAS

RECOMBINANTES

Bacteri
as

Levadu
ras

Vir
us

Cultivos de
clulas
animales

Qu implica conocer todo

esto?
Localizacin del producto de
inters

Extracelular
Antibiticos,
enzimas
extracelulares,
Muchos polisacridos
y mayora de
aminocidos.

Intracelular

Ruptura
Celular
Mayora de las protenas
producidas
por
manipulacin gentica de
bacterias que no segregan
las protena al medio.

Ruptura
PROTENASCelularPROTENAS
PROTENAS
PROTENAS

Los equipos involucrados en

esta
etapa
no
han
sido
diseados especialmente para
el rea biotecnolgica sino que
son prestadas de otras reas:
(rea de alimentos, de pinturas
y pigmentos).

Mtodos mecnicos

Mtodos NO
mecnicos

Resistencia
Temperatura
a:

Ruptura
Celular

Medios alcalinos
Detergentes
Enzimas
Esfuerzos de corte

Mtodos
NO
mecnicos
Mtodos
mecnicos

La tcnica empleada
determinar el
tamao de los
desechos

Mtodos NO mecnicos

Agentes
Qumicos

Solventes orgnicos,
detergentes, lcalis, agua
(shock osmtico)

Agentes
enzimticos

Permeabilizan en forma
selectiva las membranas
celulares
Lisozima
Manana
Glucana
sas
sas

Los mtodos no-mecnicos son fciles de escalar, si

uno necesita tratar 10 veces ms materia orgnica basta
con adicionar 10 veces ms reactivo qumico o
enzimtico.

Mtodos NO mecnicos
Tcnicas

Principios
Permeabilizacin de la pared

Permeabilizaci

celular, lo cual produce el

n enzimtica

rompimiento de la pared
celular

Shock

Ruptura osmtica de la

osmtico

membrana

Solubilizacin
Disolucin de
lpidos
Tratamiento
con lcalis

Disolucin de la membrana
con detergentes
Solventes orgnicos que
disuelve la pared celular y la
desestabilizan
Solubilizacin de la
membrana por saponificacin
de los lpidos

Stress

Costos

Ejemplos
Tratamiento de
M.
lysodeikticus
con lisozima.
Ruptura de
Clulas de
Glbulos Rojos.

Rompimiento
de bacterias
con SDS
Rompimiento
de levaduras
con Tolueno
NaOH,
Hipoclorito

ESTUDIO INDIVIDUAL
Estructura y
Funciones de la
membrana celular
Tipos de
Gram PositivasNegativas

clulas

Tratamiento Enzimtico
Teora:

Enzimas hidrolizan la membrana celular

hasta la permeabilizacin.

Ruptura

Permeabilizaci
n

Tratamiento Enzimtico

Metodologa
Enzima
celular

Reaccin selectiva

deterioro de pared

Teora:

Shock Osmtico

Flujo osmtico de agua que puede existir al interior de la

clula debido a los solutos que estos contiene.

Se usa para el aislamiento de mitocondrias y cromosomas

mitticos.
La susceptibilidad de las clulas es relativa y depende
fuertemente de su tipo.

Shock Osmtico
Cmo saber la presin necesaria para
romper las clulas?

Solubilizacin
Teora: Solubilizacin de los lpidos de la pared o
membrana celular.
Taurocolato de
sodio

Parte HIDROFLICA

Parte HIDROFBICA

Detergente Aninico
Detergente Catinico
Detergente no inico y
polidispersante

Solubilizacin
Aninicos

tuyendo los grupos CARBOXILOS por SULFATOS se puede superar esa desventaja

Solubilizacin
Catinicos
Detergentes ms suaves

Rompimiento ms suave

No inicos

Polmeros solubles en agua

Solubilizacin
Actividad
monmero
Monto solubilizado
Tensin superficial

Concentracin de
Detergente
A bajas concentraciones de detergente no se produce
degradacin de los lpidos, pero a alta concentracin se
produce una degradacin que resulta linealmente
proporcional a la concentracin de detergente. Junto a
esta variable tambin se altera la tensin superficial de la
solucin.

Fuentes de informacin
Belter P. Cussler E.L. Shou Hu W.
Bioseparations.
Downstream
processing for biotechnology
Gohs
R.
Principles
Bioseparations Engineering

of