UNIVERSIDAD AUTNOMA DE CHIAPAS

FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS

CAMPUS IV TAPACHULA
MAESRTRA EN CIENCIAS EN BIOQUMICA
CLNICA
TIPOS DE METODOS EN QUIMICA CLINICA:
ESPECTROFOTOMETRIA Y FLUOROMETRIA
FOTOMETRIA DE LLAMA
ESPECTROFOTOMETRIA DE ABSORCION
ATOMICA

DOCENTE: DRA CONSUELO CHANG RUEDA

TAPACHULA, CHIAPAS. 21 DE AGOSTO 2015

ESPECTROFOTOMETRIA
La espectrofotometra es la medicin de
la cantidad de energa radiante que
absorbe o transmite un sistema qumico
en funcin de la longitud de onda; es el
mtodo de anlisis ptico ms usado en
las
investigaciones
qumicas
y
bioqumicas. El espectrofotmetro es un
instrumento que permite comparar la
radiacin absorbida o transmitida por
una solucin que contiene una cantidad
desconocida de soluto, y una que
contiene una cantidad conocida de la

Todas las sustancias pueden

absorber energa radiante,
aun el vidrio que parece ser
completamente transparente
absorbe longitud de ondas
que pertenecen al espectro
visible;
el
agua
absorbe
fuertemente en la regin del
infrarrojo.
El color de las sustancias se
debe a que stas absorben
ciertas longitudes de onda de
la luz blanca que incide sobre
ellas y solo dejan pasar a
nuestros
ojos
aquellas
longitudes
de
onda
no
absorbida.

Medicin de Transmitancia
y Absorbancia

La
transmitancia
y
la
absorbancia se miden en un
instrumento
llamado
espectrofotmetro, la solucin
del analito se debe contener en
algn recipiente transparente,
tubo o celda.

yes y principios de la Espectrofotome

En
la
espectrofotometra
se
aprovecha la absorcin de radiacin
electromagntica en la zona del
ultravioleta y visible del espectro.
La muestra absorbe parte de la
radiacin incidente en este espectro
y promueve la transicin del analito
hacia
un
estado
excitado,
transmitiendo un haz de menor
energa radiante.

Ley de Beer
La Ley de Beer afirma que la cantidad de
luz absorbida por un cuerpo depende de la
concentracin en la solucin.

Ley de Lambert
La Ley de Lambert dice que la cantidad de luz
absorbida por un objeto depende de la
distancia recorrida por la luz.

FLUOROME
TRIA
Es
un
tipo
de
espectroscopia
electromagntica,
la
cual
analiza
la
fluorescencia de una muestra.
Su tcnica complementaria es el espectro de
absorcin el cual nos arroja datos de manera
cualitativa y cuantitativa . El equipamiento
que mide la fluorescencia es llamado
fluormetro o fluormetro.

La tecnologa del fluormetro

permite
recoger
un
amplio
espectro de longitudes de onda
(absorbancia, transmitancia, o
intensidad) en menos de un
segundo.Se puede determinar
fcilmente la concentracin de
una solucin (la ley de Beer), o
controlar los porcentajes de
reaccin.
Con sus dos longitudes de onda
de
excitacin
diferente,
SpectroVis
Adems
cuantitativamente puede medir
los espectros de fluorescencia de
muchos compuestos, tales como
la clorofila, fluorescena, y mucho
ms.

Aspectos importantes de Fluorimetra:

Tcnica espectrofotomtrica que se basa en la absorcin de
radiacin por parte del analito a medir en una muestra y su
posterior emisin. Su fundamento es la fluorescencia que es la
emisin de radiacin por electrones excitados.
En el fenomeno de fluorescencia , una molecula absorbe
radiacion electromagnetica y debido a ello los electrones pasan
de un estado basal a otra fase de excitacin.

Aplicaciones de la fluorometria en el
laboratorio clinico
Medir
iones
inorgnico
s
Medicion
de
nucleotido
s
Triglicerido
sy
vitaminas

Determinacion de aminoacidos y
sustancias relacionadas con los mismos.

Determina
r enzimas

Medir esteroides
y drogas

Partes opticas de un
fluorimetro

ESPECTROMETRA DE EMISIN DE LLAMA

La espectroscopia de emisin con llama
un mtodo analtico basado en la medida
la energa radiante emitida por tomos
iones o molculas) de un elemento que
encuentra en estado de vapor.

es
de
(o
se

A temperatura ambiente, todos los atomos

de
una
muestra
se
encuentran
esencialmente en el estado fundamental.
Los atomos son elevados a un estado
electronico excitado termicamente, es decir,
a
traves de colisiones con los gases

Hay cuatro etapas principales durante

la espectrometra de emisin por
llama:

La fotometra de llama se divide en

dos grandes categoras

VAPOR
ATOMICO

Fotometra de llama de
emisin

A*

A+ hv

La energa se separa en
diferentes longitudes de onda
del espectro caracterstica para
cada elemento.

Un fotmetro de llama de emisin

consiste esencialmente
en las siguientes partes:
SELECTOR DE
LONGITUD DE ONDA
LLAM
A

SOLUCI
N

SISTEMA DE
QUEMADOR
ES

FOTOMET
RO

 Reguladores de presin y
medidores de flujo para los
gases
combustibles y
La
Llama
comburentes.

La llama se emplea para:

- Transformacin de la muestra.
-Descomposicin
molecular.

del

compuesto

- Excitacin de las partculas

Hay principalmente dos
tipos de llama:
-La llama blanda.
-La llama dura.

Temperatura de la llama (C) con

diversas
mezclas de combustible

CARACTERSTICAS DE LA
LLAMA
1-Temperatura de la llama

2-Perfiles de la llama

Sistema de quemadores

Es la parte del fotmetro donde se evapora

instantneamente el disolvente y la muestra se
convierte en un gas.

El sistema de quemadores consta de:

Nebulizador
Quemador

Sistema ptico

Consiste en:
- Un filtro.
- Una lente sencilla.

Detector fotosensible:

Los mas simples:

Fotoclula
Los mas complejos :
Fototubo
Fotomultiplicador

FOTOMETRA DE ABSORCIN
ATMICA
La absorcin atmica es una tcnica
capaz de detectar y determinar
cuantitativamente la mayora de los
elementos del sistema peridico. Sus
campos de aplicacin son por lo
tanto muy diversos.
En la espectrofotometra de
absorcin atmica la muestra es
vaporizada mediante un proceso
a alta temperatura.

A este proceso se le conoce con el nombre de

atomizacin y son principalmente de tres
tipos:
De llama
Electrotrmica
Con plasma.
La tcnica de atomizacin ms usada es la
Absorcion atmica en llama o flamaque nebuliza la
muestra y luego la disemina en forma de aersol
dentro de una llama de aire de acetileno u oxido
nitroso acetileno.

Este mtodo se puede aplicar en la

deteccin de ciertos metales como:
Antimoni
o
Cesio

Cadmio

Calcio

Cobalto
Oro

Cromo

Niquel

Plomo

Se
hace
pasar
un
rayo
de
luz
monocromtico proveniente de una
lmpara de ctodo hueco, a travs de
una llama y se mide la atenuacin de los
fotones luego de la interaccin con los
tomos en estado de energa basal que
as se transforman en tomos excitados.

Un fotmetro de llama de Absorcin Atmica

consta esencialmente de las siguientes
partes:

plicaciones en el Laboratorio Clnico

Se utiliza ampliamente para la
determinacin de metales en
diferentes
sustancias
problemas.
Es capaz de analizar ms de 65
elementos distintos.