TERAPIA GNICA: Un nuevo

enfoque de la terapetica

Terapia gnica
El objetivo principal de la siguiente
presentacin es principalmente conocer y
comprender una nueva forma de medicina
teraputica basada en la manipulacin de
material gentico que promete ser el
remedio a todas los padecimientos que
aquejan al ser humano.

TERAPIA GNICA

DEFINICIN: Es el proceso por el cual se inserta material gentico en una

clula por medio de vectores, con el fin de hacer que esta produzca una
protena normal.
UTILIDAD: curar enfermedades unignicas
modificar totalmente el sistema inmune
La Terapia gnica se realiza con las siguientes acepciones:

somtica (tratamiento de las clulas enfermas),

germinal (para evitar la transmisin hereditaria de enfermedades)

perfectiva (manipula los genes para mejorar ciertas caractersticas)

eugnica (que busca mejorar cualidades complejas del individuo, tales

como la inteligencia).
Por lo tanto el propsito principal de la terapia gnica es:
Cambiar genotipo
para mejorar fenotipo

TERAPIA GNICA
VECTOR: Es aquel medio transportador que nos permitir insertar el
material gentico de inters en las clulas del paciente en cuestin.
Viral:

adeno, herpes, retro

TIPOS DE
VECTORES:
No viral:

liposoma
transferencia de genes mediante

receptores
inyecciones de DNA desnudo
bombardeo con partculas de oro
A continuacin se describe de forma breve el funcionamiento de cada vector,
comenzaremos por los no virales y despus por los virales.

Terapia gnica

LIPOSOMA: funcionamiento en base a propiedades de carga

elctrica.
-ADN a insertar (-) X fostatos de la doble hlice
-lpidos catinicos o liposoma (vector) (+)
-celula (-) X cido silico presente en su superficie

lpidos (+) + ADN (-)

cel
Liposoma con ADN (+) + membrana celular(-)

Penetra ADN dentro del liposoma, el vector se une

a los fosfolpidos de membrana y se libera el ADN
Por lo tanto el DNA evita la degradacin por lisosomas celulares

Terapia gnica
Liposoma se emplea en:
Tx. Fibrosis qustica
defecto gen CFTR que codifica
protena que mantiene libre de moco tubos areos de
pulmones.
ADN a insertar: uno que codifique gen CFTR
liposoma catinico a utilizar: DC-chol/DOPE
Cl. diana: cl. tracto respiratorio.
R: se impide signos de inflamacin o necrosis en el tejido caractersticos
de la enfermedad.

Esquema donde se muestra diversos

tipos de lipidos catinicos utilizados
como vectores en la Terapia Gnica.

Terapia gnica

TRANSFERENCIA DE GENES MEDIANTE RECEPTORES: En este

caso al ADN a insertar se le adiciona un ligante (molculas
reconocidas por receptores especficos/tipo celular elegido) y un fusigeno
para evitar su degradacin por el lisosoma celular.
L

ADN + ligantes

ADN penetra X endocitosis

clula

L R

unin endosoma + lisosoma evitada por fusigenos

ADN entra al ncleo durante la divisin celular

TRANSFERENCIA DE GENES MEDIANTE RECEPTORES se emplea en:

El tratamiento de la hipercolesterolemia
problema de hipercolesterolemia: gen codificador de receptores
LDL
ADN a insertar: Codificador de receptores para LDL
ligando: ASOR-PL
Receptor ASGPr (hgado)
R:
colesterol en suero sanguneo
Nota: Este mtodo a diferencia del liposoma va dirigido contra una
clula especfica por medio del reconocimiento ligando/receptor.

Terapia gnica

INYECCIONES DE DNA DESNUDO: Por este mtodo el ADN o ARN puro circular y
cerrado covalentemente es directamente inyectado dentro del tejido deseado.

BOMBARDEO DE PARTCULAS DE ORO:

1 plsmido de ADN revestido gotas de oro o tungsteno.
2 Estas partculas son aceleradas por una descarga elctrica y son " disparadas" hacia el
tejido.

Utilizado en: inyeccin directa en el msculo, del gen que codifica la protena de matriz del
virus influenza A para el Tx. de dicha enfermedad en el ratn.

VECTORES VIRALES
METODOLOGA:
Trasfieren
Gen a clula
Eucarionte

El DNA o RNA del vector

es cortado por enzimas de restriccin con el fin
de eliminar zonas patgenas e insertar en el lugar de estas e
vectores
gen de inters mdico

modificados

En ella INFECTAN : vector inicia mecanismos de trascripcin y traduccin de

protenas normales, pues sus protenas patgenas fueron reemplazadas por
estas anteriormente.
esenciales

genoma vrico modificado

VECTOR VRICO
componentes

secuencias vricas
DNA de inters

estructura del virin

RETROVIRUS

- ARN de cadena sencilla como genoma viral (huesped x TI ADN)

- tres genes que codifican:
- gag, el grupo especfico de antgenos, protena de la cpsida y de
la matriz
- pol , la transcriptasa inversa, proteasa, integrasa.
- env , protenas de la envoltura del virus
- LTRs promotor viral
- El genoma tambin incluye secuencias:
empaquetamiento del ARN vrico
corte y empalme entre donador y aceptor
ARNs mensajeros envueltos de forma separada.

Retrovirus

Obtencin del Vector: retrovirus naturales se les reemplaza genes

estructurales (gag, pol, env), por uno o varios genes teraputicos deseados.

Expresin de genes terapeticos estar dirigida por el promotor retroviral

(LTR)

estos vectores retrovirales (sin genes estructurales pero con LTR) pueden ser
producidos nicamente en unas lneas celulares de empaquetamiento, que son
capaces de aportar por transcomplementacin las protenas retrovirales
estructurales que son necesarias para la estructura del virin.
-desventaja: solo se integran en clulas que se replican
- ventaja: genes que se integran X retrovirus poseen expresin a largo plazo.

ADENOVIRUS
- Virus no desarrollados que contienen ADN lineal de cadena doble
- El ciclo de infeccin productiva comprende dos fases, la primera, la
ms importante para la sntesis del ADN, la segunda, durante la
cual las protenas estructurales y el ADN vrico son ensamblados en
viriones.

-cuatro unidades transcripcionales, cada una con su promotor,

codifican ARN mensajero empalmados .
- La transcripcin es secuencial en la que los genes E1 se expresan
pronto, y en parte activan la transcripcin de otros genes
tempranos .

adenovirus
-E1 rescata clulas de la quiescencia, dejndolas capaces de
sintetizar ADN vrico y protenas, usando predominantemente
las funciones del cdigo del hospedador.
- E2 : replicacin del ADN.
- E3 : detener los mecanismos de defensa de la clula hospedadora:
anular los efectos de (TNF) en clulas infectadas
bloquear el transporte de MHC I, reduce la presentacin de
pptidos vricos.
- E4 regula fase primaria y secundaria del ciclo de vida vrico.

Terapia gnica
- Obtencin del Vector: se le elimina E1 y E3, crecen en cl. 293
que aportaran por transcomplementacin los genes
estructurales necesarios para integrar el virin.
- Son capaces de infectar clulas quiescentes y persisten como
DNAs no integrado
- por su baja eficiencia es necesario utilizar virus a ttulos muy
altos que podran desencadenar respuesta inflamatoria
inespecfica.
- la expresin de la protena es limitada a solo semanas o meses
por la falta de integracin del DNA, por esto se requiere
readministracin que puede desencadenar respuesta inmune y
limitar su eficiencia.

ADENOASOCIADOS
-

Es un virus muy pequeo, muy simple, no autnomo, que contiene

ADN lineal de cadena sencilla. El virus requiere la coinfeccin con
adenovirus u otros para replicarse
rep, codifica protenas para replicacin e integracin.
cap, codifica tres protenas estructurales vricas.
Los extremos del genoma comprenden repeticiones terminales (TR) de cerca de
145 nucletidos
Vector: Contienen slo las secuencias vricas TR que bordean el ADN de inters.

HERPESVIRUS
-

ADN bicatenario lineal

Dos trozos de ADN bicatenario lineal unidos dando una estructura nica llamadas
molcula L y molcula S. Poseen en sus extremos secuencias repetidas
terminales ( TRL y TRS ) que son los sitios mediante los cuales permite unirse a
las dos molculas.

Vector: Contienen slo las secuencias vricas TRL TRS y DNA de inters.
Lleva grandes secuencias de ADN
Establece infecciones latentes de larga duracin en las cuales el genoma del
virus existe como un episoma con efectos no aparentes en la clula hospedadora
El herpes virus puede ser una herramienta muy valiosa en clulas
del sistema nervioso central.
Cl. en reposo.

Terapia gnica

APLICACIONES DE LA TERAPIA GNICA

Terapia gnica

Terapia gnica

Distrofia muscular de Duchenne:

Terapia gnica

Terapia gnica

Gen codificador de BMP-7 transducido por adenovirus en el Tx.

De la osteoporosis.

-OTROS:
-dolor: La expresin en forma continua de preproencefalina en neuronas
sensitivas
Tx. Dolor cncer, angina, artritis y neuropatas
perifricas.
-Ateroesclerosis: administracin de genes que expresan el factor de
crecimiento endotelial vascular (revascularizar la pierna).
-Disfx. Erctil e infertilidad: adm. gen KL-2 que potencia formacin y
crecimiento de cl. Sertoli (ratas).
-Ceguera: adm. gen RPE95 x virus impide degeneracin y reanudacin de la
actividad elctrica de la retina (animales).
-Alzhaimer: adm. Gen del factor de crecimiento neurolgico (NGF) (monos
viejos)
-Parkinson: gen de la descarboxilasa glutmica cida (GAD)/ cl. hperactivas
del ncleo subtalmico.
-Diabetes tipo I: gen PDX-1
hgado produce insulina (rata)

Transferencia
de genes en
animales

Cultivo de
Clulas
Vegetales

Annticu
A
s
ticueerrppos
o
M
CCuultltivivoss
onnooclon os
M
o
e
r
clonaaleles
a s
s
CCeelu
lul lare
Biologa
Biologa
Molecular
Molecular

Solucin de
crimenes
Tecnologa
del ADN
Bancos de
ADN, ARN
Protenas
Mapas de
Genomas
completos

Diagnsticos

Ingeniera Gentica
Sntesis de Nuevas
Protenas

Produccin de
Protenas humanas

Nuevas
Plantas y
Animales
Nuevos
Alimentos

Clonacin

Recursos humanos
qumicos raros
Nuevos
Antibiticos

Terapia
Gnica

Frmacos
Anti-cncer

Marcadores
Sntesis de
Sondas de
ADN
Localizacin
de desrdenes
genticos

HUELLA GENETICA
(DNA fingerprinting)
En investigacin criminal y medicina
forense, antropologa y manejo de vida
silvestre. Esto tambin puede ser usado
para detectar secuencias que pueden
predisponer a un individuo a enfermedades
genticas tales como muchas formas de
cncer, una forma de HIV, Alzheimer,
fibrosis cstica, Corea de Huntington y otras
condiciones.

HUELLA GENETICA
(DNA fingerprinting)

A. Prueba Forense. Usada en 1980 en Gran Bretaa

como refuerzo de la ley. En USA hasta 1987. En
Virginia, Minnesota, Illinois y Florida, ha exonerado
a individuos acusados de asaltos sexuales.
B. Establecimiento de la paternidad. Los patrones de
ADN son heredados, la mitad de la madre y la
mitad del padre. Para establecer la paternidad, la
huella digital gentica de la madre, nio y del
padre alegado son comparadas.
C. Manufactura. La huella de ADN es usada para

INVESTIGACIONES
EN
BIOTECNOLOGIA
1. CLONACION
2. PRODUCCION DE EMBRIONES PARA
TRANSPLANTES
3. XENOTRANSPLANTES
4. GENOMICA
5. PROTEOMICA
6. ORGANISMOS MODIFICADOS
GENETICAMENTE

CLONACI
N
Trmino genrico para la replicacin en un
laboratorio de genes, clulas u organismos de una
entidad original, con copias genticas exactas del
gen, clula u organismo original. Esta tcnica ha
producido avances sensacionales en medicinas y
vacunas.
Tambin hay investigacin en clonacin de clulas
humanas, rganos y otros tejidos. Esto puede
producir el reemplazo de piel, cartilagos y hueso
para victimas de quemaduras y accidentes, o de
rganos.

COMO CLONARON A DOLLY

1- Clulas de una oveja adulta son extradas y se llevan a un
estado de latencia.
2- El ncleo es removido del huevo infertilizado de otra
oveja y el ncleo de la oveja donadora es colocado en su
lugar.
3- Una pequea corriente elctrica sobre el huevo
manipulado inicia los mecanismos de fertilizacin.
4- Hay divisin celular y comienza el crecimiento y el huevo
es implantado en la madre nodriza similar a una
fertilizacin in vitro.
5- El clon es llevado a trmino y nace la oveja.

EMBRIONES PARA TRANSPLANTES

En 1997, en la Universidad de Bath crearon embriones de

rana sin cabeza, manipulando genes que suprimen el
desarrollo de la cabeza, el tronco y la cola.
Esto se puede aplicar a embriones humanos porque los
mismos genes realizan funciones similares en ambas
especies, y genticamente se puede programar el
embrin para suprimir el crecimiento en todas las partes
del cuerpo, excepto aquellas que se desea, ms un
corazn y la circulacin de la sangre.

CULTIVO DE CELULAS MADRES

Consiste en tomar el ncleo

de una clula del paciente
adulto y transferirlo a un
vulo humano cuyo ncleo se
ha eliminado previamente. El
resultado sera un embrin
humano clnico (un clon del
paciente).
Sin embargo, el embrin no
se implantara en una mujer
(lo que dara lugar a un hijo
clnico del paciente). Slo se
le dejara desarrollarse unos
das.

XENOTRANSPLANTES

Esta

prctica se conoce como

xenotransplantacin.
Organos de otras especies -cerdos y
otros animales - se han convertido
en una fuente promisoria para donar
rganos para humanos.

PRODUCCIN DE
XENO ORGANOS
PPL Therapeutics anunci que el 5
de marzo de 2000, nacieron cinco
cerditas: Millie, Christa, Alexis,
Carrel y Dotcom, como resultado
de transferencia nuclear
(clonacin) que tienen inactivado
el gen de la alfa 1-3 gal
transferasa, cuya azcar es
responsable del rechazo

GENOMICA

Proyecto Genoma Humano, iniciado en 1990, previsto

para el 2007, fue terminado el 26 de Junio de 2000, con
la secuenciacin del borrador del genoma humano, que
contiene unos 100,000 genes y 3 mil millones de pares de
bases (pb). Se espera que los cientficos tengan las
herramientas para encontrar los genes responsables de
las enfermedades.
Con la secuenciacin del genoma humano, los
investigadores pueden mover su enfoque del hallazgo de
genes, el cual puede ser manejado a travs de la base de
datos de la computadora, hacia el entendimiento de la
funcin de dichos genes, a travs de la Protemica.

PROTEOMICA

La Proteomica: es la clave para entender y

tratar a las enfermedades.
Al entender a las protenas, los cientficos consideran
que finalmente podrn resolver los mecanismos
bioqumicos bsicos fundamentales de las
enfermedades y la salud.

The Wall Street Journal

BIOTECNOLOGIA DEL
ADN
RECOMBINANTE
Inici su desarrollo en la dcada de los 70s. Con esta
tecnologa, se pueden aislar los genes, manipularlos,
introducirlos a nuevos hospederos, y clonarlos para
obtener una ventaja novedosa sobre el organismo natural.
Estas tecnologas son intensivas en conocimiento
dependen principalmente del recurso humano calificado,
para utilizar adecuadamente la informacin disponible y
requieren infraestructura instalada e inversiones de
capital que estn al alcance de pases como el nuestro.

Alimentos modificados genticamente

CON VACUNAS INCORPORADAS

Papa con la vacuna que previene la insulina

dependencia de la diabetes mellitus 100 veces
ms poderosa que la actual vacuna. Papa con
la sub-unidad B antignica de la enterotoxina
del Vibrio cholerae causante del clera). Frijol
de soya con anticuerpos que protegen contra e
virus 2 de Herpes simplex (HSV). Tabaco con
anticuerpos que previenen la caries dental
producida por Streptococcus mutans.

CARIOTIPO
ESPECTRAL
Tcnica de laboratorio que permite distinguir los 23
pares de cromosomas humanos al mismo tiempo, con cada par de
cromosomas pintados en un color fluorescente diferente.
.
Muchas enfermedades estn asociadas con anormalidades
cromosmicas, ejemplo, clulas cancerosas exhiben
translocaciones. La tcnica permite identificar translocaciones u
otras anormalidades, cuando un cromosoma est pintado de un
color y tiene una pequea pieza de otro cromosoma pintado de otro
color (Access Excellence About Biotech).

TECNOLOGA BIOCHIP DE ADN

Las mutaciones, resultan en ciertas enfermedades, y es

difcil identificar y caracterizarlas a causa de que los
genes tienen muchas regiones en donde las mutaciones
pueden ocurrir y causar enfermedad
(www.nhgri.nih.gov). Ejemplo, mutaciones en los
genes BRCA1 y BRCA2, son factores de riesgo de 50-85%
de cncer de mama en la mujer. Hedenfalk et al, usando
la tecnologa de microarreglos, de 5361 genes
identificaron 176 genes que se expresaban diferente en
dos tipos de tumor. BRCA1 y BRCA2, expresan diferente
tipo de genes, sugiriendo que una mutacin heredable

TECNOLOGA BIOCHIP DE ADN

El microarreglo gnico est basado en una base de

datos de mas de 40,000 fragmentos de genes llamados
Secuencias Expresadas Marcadoras (ESTs).
Cientos o miles de ESTs son arregladas en una lmina
de microscopio. Los ARNm de una clula particular son
marcados con marcas tags fluorescentes que se
hibridizan, a los ESTs en la lmina cuando estas
secuencias son complementarias a aquellas del ARNm.
Un escaner mide la fluorescencia de cada muestra sobre
la lmina, para determinar la actividad de los genes
representados por los ESTs que estn en la clula

HABITAR MAS ALLA DE

LA TIERRA.
La NASA busca combinar avances en biotecnologa y
nanotecnologa para modificar los genes de las
plantas de manera bioregenerativo para que sus clulas
produzcan micro sensores, transmisores y receptores
moleculares, que supervisen funciones internas de las
plantas e informen sobre su salud, para garantizar una
buena cosecha de manera controlable y que produzcan
flores y frutos bajo comando. Una idea paralela es
disear plantas que produzcan sustancias qumicas que
las protegan del aumento de radiacin en el espacio y
en planetas con atmsferas poco densas tales como