BIOTECNOLOGA

La ingeniera gentica
Aplicaciones industriales
Aplicaciones medioambientales
Aplicaciones agrcolas, ganaderas
pisccolas
Aplicaciones mdicas
Aplicaciones jurdicas

1. La ingeniera gentica
La ingeniera gentica, conocida tambin como manipulacin gentica, surge
en los aos 70 (siglo XX) cuando se consigue introducir material gentico
de una especie en clulas de otra especie muy distinta.
La biotecnologa manipula y modifica microorganismos o clulas obtenidas de animales
y plantas en el mbito industrial (medicina, farmacia).
No se incluyen actividades que manipulen animales o plantas enteras, aunque stas son
necesarias posteriormente.

En la naturaleza se produce una transferencia de material gentico entre bacterias,

fenmeno llamado transformacin.
La transferencia de forma artificial se realiza mediante la tcnica del ADN
recombinante. A sta se han ido sumando otras tcnicas de ingeniera gentica que se
analizan seguidamente.

1.1. Fragmentacin del ADN

Se basa en la capacidad de ciertas bacterias que contienen enzimas llamadas
restrictasas o endonucleasas de restriccin (actualmente se comercializan ms de cien
enzimas diferentes) que cortan el ADN por sitios especficos que reconocen,
obtenindose fragmentos de restriccin. Para que se puedan unir despus los
fragmentos de ADN extrao y el ADN que se utilizar como vector, se han de cortar
ambos con la misma restrictasa. Comparando dichos fragmentos, se construyen los
mapas de restriccin, los cuales se usan para comparar genomas de especies diferentes
y establecer cambios evolutivos as como para detectar mutaciones cromosmicas como
delecciones e inserciones.
Restrictasa
(Bacteria origen)
EcoR1
(Escherichia coli)

Secuencia
reconocida
...G-A-A-T-T-C...
...G-T-T-A-A-G...

Fragmentos
de restriccin
A-A-T-T- C...
G...
G...
...C-T-T-A-A

Cuadro I: Fragmentos de restriccin originados por la enzima EcoRl

1.2. Transformacin por vectores

La transformacin de bacterias con ADN extrao se produce en muy pocas clulas (baja
eficacia) en condiciones de laboratorio. Por ello, se emplean vectores genticos que
funcionan como taxistas que transportan a un cliente el ADN recombinante.
Los vectores ms usados son:
a) un plsmido (fragmento extra de ADN bicatenario circular de unos 4,3 kb, que
existe en algunas especies de bacterias).
b) un csmido (similar al plsmido pero de mayor longitud, unos 40 kb).
c) un virus vector ( en este caso el ADN extrao que se quiere transferir se
incorpora al ADN vrico y funciona como ADN recombinante).
Si la introduccin de ADN extrao se realiza en clulas eucariotas no reproductoras
se denomina al proceso transfeccin.
Si la introduccin se realiza en clulas reproductoras de plantas y animales, la
alteracin gnica va a estar presente en todas clulas del cuerpo, en este caso se
habla de transgnesis

1.3. Seleccin de transformantes

La multiplicacin de las clulas que contienen el ADN recombinante
(ADNr), ya sea en un plsmido o en un csmido, o en su propio ADN (si se
us un virus vector), produce una clonacin de ste, es decir, la
produccin de mltiples copias idnticas de ADNr que lleva el gen
extrao, una copia en cada clula.
Pero cada clon de clulas tendr un fragmento de ADN extrao distinto.
Al conjunto de estas copias de ADNr diferentes se denomina biblioteca
genmica.
Lo que se tiene que hacer ahora es seleccionar el clon de clulas (colonia
crecida en agar) en cuyo interior est contenido el fragmento de ADN
con el gen que interesa.
Esto se consigue mediante la obtencin de una molcula de ADN
complementario (ADNc) a partir de su propio ARNm procedente del gen
extrao que se ha expresado.

1.4. Anlisis de ADN clonado

El siguiente paso es localizar la posicin del gen (regin codificante de
protena) que interesa en el fragmento que est clonado en la colonia de clulas
seleccionada.
Se emplea la tcnica de transferencia de Southern (su inventor fue E.M.
Southern).
Esta tcnica se basa en la obtencin de fragmentos de restriccin del clon
seleccionado y el tratamiento con ADNc radiactivo que hibridar con la regin
transcrita del gen porque el ADNc se ha obtenido a partir del ARNm producido
en la transcripcin de las clulas del clon seleccionado. Como el ADNc se ha
construido con istopos radiactivos funciona como una sonda y marcar en una
autorradiografa la posicin de los fragmentos que hayan hibridado (unin segn
bases complementarias de los nucletidos) con el ADNc radiactivo. En esta
tcnica se basa el procedimiento para la obtencin de "huellas genticas".

1.5. Secuenciacin.
La tcnica de la clonacin de ADN ha permitido obtener gran cantidad
de este cido nucleido para que pueda realizarse su secuenciacin y
conocer la composicin qumica de cada gen, conocimiento que se
considera de incalculable valor. Esto ha posibilitado la obtencin de
secuencias de genomas completos (son cada vez ms los organismos y
virus que son secuenciados, incluida la especie humana).
La tcnica de Sanger (o del didesoxi), que es como se llama, se basa en la
sntesis de ADN, usando como molde una versin monocatenaria del ADN
que va a ser secuenciado. La tcnica utiliza cuatro nucletidos
especiales, los didesoxinucletidos (de aqu el nombre de la tcnica) que
provocan la terminacin de la sntesis de fragmentos de ADN, los cuales
segn su longitud se situarn en distintos sitios en una placa de gel y de
ah se deduce la secuencia de nucletidos.

.6. PCR (Reaccin en cadena de la polimerasa)

Mediante la tcnica de la reaccin en cadena de la polimerasa (PCR en ingls) se pueden
obtener grandes cantidades de ADN que permiten diferentes anlisis, a partir de cantidades
mnimas. Se basa en el proceso de replicacin del ADN, para ello se utilizan unos
oligonucletidos que se han de disear como cebadores que inician la replicacin "in vitro".
La replicacin se repite multitud de veces duplicando en cada ciclo la cantidad de ADN
obtenido.
Esta sntesis artificial de ADN se ha de
realizar a altas temperaturas para que las
dos cadenas de ADN no se enrollen entre
s, lo cual puede realizarse gracias a una
enzima ADN polimerasa obtenida de una
bacteria termfila.
Esta tcnica tiene mltiples utilidades:
realizar pruebas de paternidad o averiguar la
autora de un delito; diagnosticar
enfermedades hereditarias antes del
nacimiento, analizar restos de tejidos en
huesos para hacer estudios filogenticos;
realizar secuenciaciones de genomas (mucho
ms rpido que a partir de la clonacin en
clulas), etc.
Figura 1: Clonacin de ADN por la reaccin en cadena de la polimerasa

aciones industriales de los microorgan

Existen en la naturaleza unos
centenares de especies de
microorganismos (bacterias, levaduras,
mohos, algas unicelulares) que producen
sustancias que presentan algn inters
para la especie humana.

Cuadro II: Algunos de los principales productos

industriales obtenidos con la ayuda de los
microorganismos

Los productos que tienen un inters comercial se pueden agrupar en cuatro clases:
a)

productos del metabolismo primario( dixido de carbono, etanol, cido actico, aminocidos, etc.).

b)

productos del metabolismo secundario (antibiticos, toxinas).

c)

macromolculas (polisacridos, enzimas); y

d)

clulas microbianas (pienso animal llamado protenas microbianas).

2.1. Industria farmacutica

La industria farmacutica produce

actualmente toda una gama de
sustancias que obtiene de
microorganismos como son: sustancias
antimicrobianas (sobre todo
antibiticos de diversos tipos), vacunas,
vitaminas, hormonas peptdicas (como
la insulina, la hormona del crecimiento o
somatotropina), factores hipotalmicos
(como la somatostatina, ver figura) y
enzimas.

Figura 2: Sntesis de la somatostatina en

Escherichia coli

El proceso de fermentacin ha
sido manipulado por el hombre
de diversas formas para
obtener toda una serie de
alimentos y bebidas.
As, por fermentacin lctica
se produce queso y yogur;
la fermentacin alcohlica se
emplea para la elaboracin de
pan fermentado (en este caso
se aprovechan las burbujas de
dixido de carbono para
esponjar el pan) y bebidas
alcohlicas como el vino, la
cerveza (ver figura 3), sidra,
etc.
En la fermentacin alcohlica
se emplean diferentes
especies de levaduras (hongos
unicelulares) del gnero
Saccharomyces

2.2. Industria alimentaria

Figura 3: Produccin de la cerveza

2.3. Industria qumica y minera

Diversos tipos de industrias utilizan microorganismos para la obtencin de
sustancias de inters como aminocidos (cido glutmico en forma de
glutamato monosdico usado como potenciador de sabores y aromas); cidos
orgnicos como ctrico, actico (utilizado en la fabricacin de acetatos,
pelculas fotogrficas, etc.); butanol (empleado en la fabricacin de
plastificantes), etanol (como combustible), enzimas como proteasas (usadas
en detergentes), etc.

En las industrias mineras se utilizan micoorganismos para extraer por

biolixiviacin metales preciosos, metales pesados, uranio y petrleo.

3. Aplicaciones medioambientales
Para la proteccin del medio ambiente se
utilizan tcnicas de biorremediacin
empleando microbios que son capaces de
metabolizar el petrleo en casos de mareas
negra y en el lavado de tanques de
petroleros; as como para descontaminar
aguas residuales de diferente industrias que
contengan metales pesados, uranio,
hidrocarburos, etc.

Aplicaciones agrcolas, ganaderas y

isccolas
Las tcnicas biotecnolgicas se aplican a la agricultura y a la ganadera para obtener
mayores cosechas y mejores alimentos con plantas y mayor cantidad y calidad en la cra
de ganado, as como evitar el fraude en el consumo de alimentos (comercializar unas
especies pisccolas por otras, alimentos transgnicos, etc.).
Se trabaja en tres lneas biotecnolgicas:
a) para obtener mltiples individuos iguales con una caracterstica que interese.
b) Modificacin gentica de especies con caractersticas nuevas (transgnesis)
c) Desarrollo de huellas genticas para identificar especies o bsqueda de
genes concretos.

4.1. Clonacin en plantas

La clonacin en plantas se consigue sobre todo mediante la manipulacin de cultivos celulares.
La principal tcnica empleada es la micropropagacinn o propagacin vegetativa in vitro, la cual
permite clonar en corto tiempo un gran nmero de especies. Este procedimiento se utiliza para la
seleccin y produccin de plantas en grandes cantidades, as como para la investigacin en biologa
vegetal.
Se consigue mediante la obtencin de unos
fragmentos o explantes de la planta madre.
Los explantes se colocan en un medio de
cultivo adecuado y produce un callo (masa
de clulas sin diferenciar); los callos
pueden dividirse en multitud de fragmentos
o incluso hacerse una suspensin de clulas.
En el momento que se desee, se cambian las
concentraciones de hormonas auxina y
citoquinina, esto hace que se diferencien
las clulas de los callos con lo que
originarn plantas enteras. Esta tcnica
puede ser muy til para la conservacin de
especies y variedades en peligro de
extincin, as como para hacer ms
rentables la produccin de flores o de
metabolitos secundarios (perfumes,
pigmentos, etc.)

Figura 4: Mtodo de obtencin de callos caulinares

4.2. Plantas transgnicas

Para obtener plantas trsgnicas con genes de otras especies ( sean plantas, microbios o
animales) se pueden utilizar dos grupos de tcnicas: las indirectas y las directas.

tcnica indirecta
La ms usada es la transformacin de clulas
mediante la bacteria Agrobacterium
tumefaciens.
Esta bacteria vive en el suelo y produce en
las plantas dicotiledneas una enfermedad
tumoral llamada "agalla de cuello".
Cuando contacta con las clulas de la planta
les transfiere un segmento de ADN del
plsmido Ti (inductor de tumores) que
contiene la bacteria. Este plsmido puede
integrarse en uno o ms cromosomas de las
clulas vegetales, por lo que puede utilizarse
como vector de genes que se deseen
introducir en plantas de especies
dicotiledneas.
La clula que recibe genes extraos puede
regenerar una planta entera mediante la
tcnica de la micropropagacin y obtener as
una planta transgnica.
Figura 5: Transferencia de ADN extrao a una clula vegetal mediante el
vector bacteriano Agrobacterium tumefaciens

tcnica directa
Entre las diversas tcnicas de
transferencia directa de material
gentico una de las ms empleadas
es la "de la perdigonada" o
transformacin biolstica. Se trata
de disparar bolitas de oro que llevan
fragmentos de ADN adheridos, con
una especie de pistola, sobre una
poblacin de clulas. Las bolitas que
queden en el citoplasma pueden
transferir el ADN que transportan a
algn cromosoma de la clula
bombardeada.
Las aplicaciones agrcolas van desde
el mejoramiento de procesos bsicos
como la fotosntesis y la fijacin de
nitrgeno atmosfrico por parte de
las plantas, hasta la resistencia a
herbicidas, agentes patgenos y
factores de estrs (salinidad del
suelo, sequa, etc.), as como la
obtencin de productos agrcolas de
mejor calidad y caractersticas
nuevas.
Figura 6: Obtencin de una planta transgnica por transformacin biolstica

4.3. Clonacin en animales

La obtencin de un gran numero de animales con alguna caracterstica comn (producir mucha leche,
engordar rpidamente, producir lana azul, etc.) es una aspiracin de muchos ganaderos. La forma de
conseguirlo es mediante la clonacin con la que se consiguen animales genticamente idnticos. Se usan
para ello dos tcnicas:

a) la disgregacin de clulas embrionarias a

partir de un embrin, de modo que cada
clula separada funciona como un zigoto y
originar un animal.
b) la transferencia nuclear; sta consiste en
obtener vulos enucleados (se les ha extrado el
ncleo por microsuccin) y conseguir introducir
un ncleo de una clula embrionaria o de una
diferenciada (especializada), con esta ltima
modalidad se obtuvo la famosa oveja Dolly.
Cuanto ms diferenciada est una clula ms
difcil es conseguir su reprogramacin para que
funcione como un zigoto y origine un nuevo animal.

Obtencin de reses clnicas mediante la transferencia

de ncleos de clulas embrionarias de mrula

4.4. Animales transgnicos

En los animales el ADN extrao o transgn se
introduce en zigotos de modo que el embrin que
resulte haya integrado el transgn en todas las clulas
y origine un organismo transgnico. Una forma de
conseguir la transgnesis es mediante la tcnica de la
microinyeccin de zigotos, en la que se inyecta con una
micropipeta el material gentico que se desee. Otra
posibilidad es utilizar clulas embrionarias en las que
se inocula el transgn mediante diversas tcnicas
(electroporacin, transfeccin con virus o por
microinyeccin).

Aparato de microinyeccin

Las aplicaciones son mltiples, como con las plantas,

desde el uso de animales como biorreactores para la
produccin de protenas de inters (humanas o de otro
tipo), hasta el estudio de genes especficos y la
posibilidad de la terapia gnica en humanos.
Cuando el ADN extrao que se introduce no afecta a
clulas germinales, sino a las clulas somticas, se
denomina al proceso tranfeccin y para conseguirla se
usan distintas tcnicas. Las clulas transfectadas tienen
gran inters en la obtencin de lneas celulares alteradas
capaces de producir compuestos comerciales.
Fases en la transfeccin de ADN segn diversas tcnicas

5. Aplicaciones mdicas

1. Proyecto Genoma Humano

Este proyecto de investigacin tiene como objetivo
averiguar la secuenciacin completa de nucletidos
de los 23 pares de cromosomas humanos, para
conocer la composicin qumica exacta de todos los
genes (genoma) y su ubicacin en cada uno de los
cromosomas, as como toda la informacin adicional
extra no codificante (el llamado ADN basura) y
estudiar su funcin.

En 1997, el Genoma humano fue declarado

patrimonio de la Humanidad por la UNESCO, para
evitar que se comercialice con l. En junio del ao
2001 se presenta una primera aproximacin de la
secuencia completa, descubrindose que tenemos
muchos menos genes (unos 30.000) de los
inicialmente previstos (100.000).

Ubicacin de algunas enfermedades genticas

conocidas en el mapa gentico humano

5.2. Terapia gnica

Las enfermedades genticas debidas a un solo gen defectuoso ascienden a ms de
4000, de las cuales 345 afectan al cromosoma X, por lo que sern transmitidas a los
nios varones, si su madre posee uno de esos defectos genticos.
La terapia gnica est siendo considerada la cuarta revolucin de la medicina (despus
de las medidas de salud pblica, la anestesia, y las vacunas y antibiticos). Para su
aplicacin se siguen dos estrategias:
a) Insertar una copia sana de un gen en las clulas del paciente con una
enfermedad gentica, para compensar el efecto del gen defectuoso ( esto se
consigui con una nia que tena una inmunodeficiencia grave).
b) Introducir un gen especialmente diseado para que proporcione una nueva
caracterstica a las clulas (por ejemplo, introducir en linfocitos un gen que
produzca un inhibidor del virus del sida en pacientes afectados por el VIH).

5.3. Vacunas y anticuerpos

Las vacunas contienen un agente patgeno causante de una enfermedad infecciosa, pero o
est muerto o est atenuado (son cepas muy poco virulentas). Tambin se puede vacunar con
subunidades del patgeno, stas pueden hoy da fabricarse mediante ingeniera gentica en
gran cantidad. Las subunidades son protenas con poder antignico. As, se ha conseguido
obtener la vacuna de la hepatitis B mediante la tecnologa del ADN recombinante. El gen de la
subunidad proteica del virus de la hepatitis fue introducido en la bacteria Escherichia coli y en
la levadura Saccharomyces cerevisiae, las cuales produjeron en cultivo la protena del virus.
Los anticuerpos sirven como defensa frente a enfermedades infecciosas y sustancias
extraas, pero adems son un medio de curacin para aquellos enfermos que no son capaces de
producirlos.
La tcnica de los anticuerpos monoclonales permite obtener gran cantidad de ellos y sin
impurezas; consiste en inmortalizar las clulas responsables de su fabricacin, las clulas
plasmticas que se forman por activacin de los linfocitos B. La forma de conseguirlo es
hibridando clulas plasmticas y clulas tumorales con capacidad para multiplicarse
indefinidamente (clulas de mielomas), el resultado son clulas hbridas llamadas hibridomas
que se pueden clonar. Cada clon (procedente de un solo hibridoma) producir un anticuerpo
monoclonal.

6. Aplicaciones jurdicas
La biotecnologa se puede aplicar a otras facetas de la vida social adems de las mencionadas. De entre todas
ellas es de destacar su utilizacin en relacin con el derecho y la ciencia forense.

6.1. Huella gentica

En el esclarecimiento de un crimen puede ser crucial la
prueba que aporte el bilogo forense al determinar la huella
gentica del criminal a partir de un resto de saliva en un
cigarrillo (contiene clulas de la mucosa bucal), una mancha
de sangre (leucocitos), restos de semen (espermatozoides)
o un simple pelo (clulas del folculo piloso). La tcnica que
se aplica es la del perfilado del ADN o prueba del ADN . Se
basa en la presencia de regiones en el material gentico no
codificante que se denominan minisatlites , y que contienen
muchas repeticiones en tndem de una pequea secuencia de
nucletidos. Para su deteccin se utilizan sondas gnicas
(oligonucletidos marcados con tomos radiactivos), de
modo que cada sonda detecta un minisatlite. Estos
minisatlites son de diferente longitud en cada persona
puesto que el nmero de repeticiones en tndem es variable.
La huella gentica tambin puede utilizarse para realizar
pruebas de paternidad y para identificar a personas
desaparecidas de las que se tengan sus huesos; esto ocurri
con los restos seos de los miembros de la familia del ltimo
zar de Rusia asesinados por los bolcheviques.
Tcnica utilizada en la prueba del ADN

6.2. La clonacin humana

La posibilidad de clonar animales mamferos,
tanto a partir de clulas embrionarias como de
clulas diferenciadas (caso de la oveja Dolly),
abre la puerta para la clonacin de humanos.
Para mayor polmica se publica en 1993 un
experimento de clonacin humana hecho con
embriones humanos que no podran haber
sobrevivido, pero que mediante la disgregacin
de sus clulas se obtuvieron 48 embriones
clnicos (idnticos genticamente) que fueron
posteriormente destruidos.
Clonar personas enteras est prohibido en
muchos pases y condenado por muchas
instituciones, pero clonar tejidos humanos con
fines teraputicos es pedido por multitud de
cientficos, sobre todo desde que se puede
dirigir la diferenciacin de clulas madre hacia
la obtencin de tejidos concretos.

Tcnica de clonacin