TECNICAS CITOQUIMICAS

Blgo. Rolando Ventura E.

TINCION
Es el proceso por el cual las molculas de un colorante
se adsorben a una superficie. El uso de colorantes
permite cambiar el color de las clulas de los
microorganismos y poder realizar la observacin en
microscopio ptico.

La citoqumica estudia la composicin qumica de la clula y

permite detectar la localizacin topogrfica de algunos
principios inmediatos: enzimas, metales pesados, sustancias
orgnicas, molculas de deposito y otras sustancias.
Son un complemento de las tinciones hematolgicas.
Por medio de ellas se localizan enzimas y sustancias
inorgnicas.
As se mejora la diferenciacin celular.
Tambin sirven para el diagnostico.

TIPOS DE TINCIONES
Se pueden clasificar en:
Atendiendo al nivel de vitalidad de las
clulas que se pretende colorear, se pueden
dividir en vitales y no vitales.
Atendiendo

al momento en que empezaron a

ser utilizadas para el Dx. hematolgico, se
divide en tradicionales y especiales.

TINCIONES VITALES Y NO VITALES

Las tinciones vitales y supravitales son aquellas que se
practican sobre clulas que estn vivas.
Las tinciones vitales son aquellas que se efectan sobre
clulas que estn vivas, mediante la introduccin de un
colorante en la circulacin de un organismo vivo. Son
colorantes vitales: el verde Jano y el azul de metileno.
Las tinciones supravitales son aquellas que se realizan
sobre clulas o tejidos vivos, pero que estn aislados del
organismo del que proceden.
Las tinciones no vitales se realizan sobre clulas
muertas. La coloracin de clulas muertas requiere un
proceso previo de fijacin, que tiene por objeto el
mantener inalterada su estructura y el adherirlas
firmemente a la superficie del portaobjetos.

TINCIONES TRADICIONALES Y
ESPECIALES
Colorantes cidos: tienen una especial afinidad por
las estructuras alcalinas de las clulas, como por
ejemplo la hemoglobina (eosina).
Colorantes bsicos: tienen una especial afinidad por
las estructuras acidas de las clulas, como por ejemplo
los cidos nucleicos (azul de metileno).
Colorantes neutros: son sales de un acido y de una base
coloreados. Tien el ncleo de un color y el citoplasma
de otro (eosinato de azul de metileno).
Colorantes indiferentes: Son los que no tienen afinidad
por estructuras acidad o bsicas. Son insolubles en el
agua y tien a aquellas sustancias que tienen un poder
de disolucin superior al del liquido empleado para
preparar la solucin colorante (Sudan III).

Tambin hay combinaciones de colorantes que dan

lugar a tinciones policromas.
Una coloracin es panptica cuando se utilizan
sucesivamente sustancias colorantes neutras.
(May-Grunwald-Giemsa)
Y es pancrmica cuando se aplican todas las
sustancias colorantes neutras juntas (azul de
metileno, eosina, Wright)

DEFINICION DE REACCION
CITOQUIMICA
Es la reaccin que por el mtodo de uno o mas
reactivos qumicos: aplicados a la clula en
condiciones definidas; determina la formacin de
productos coloreados; insolubles; no difusibles; que
permiten el reconocimiento microscpico; de
sustancias o grupos qumicos definidos; en su real
ubicacin citolgica; para lo cual no deben destruir
a la clula, y si lo hacen deben reemplazar a la
sustancia identificada en su topografia.

Las finalidades primordiales de la citoqumica son:

El reconocimiento y diagnstico celular

El estudio de la fisiologia y la fisiopatologa celular.

El Diagnstico de la patologa.

Sudn Black / Red Oil

Ambas se utiliza para la deteccion de lpidos, en el
caso del Sudan Black este tie los fosfolpidos y
esteroles de membrana de los grnulos.
Es un colorante lipfilo que se une de forma
irreversible a un componente granular indefinido
en los granulocitos, en los eosinofilos y en algunos
monocitos.

COLORACIONES COMPUESTAS

Coloracin Gram

PARED CELULAR
Debajo de las sustancias extracelulares, como son
las cpsulas y cubiertas mucilaginosas, y en la
periferia de una delicada membrana que est en
inmediato contacto con el citoplasma, se encuentra
la Pared Celular, que esta formada en base a
aminoacidos, azucares y grasas y ellas estn
entrelazadas formando un polimero complejo. La
pared celular brinda una estructura rgida que da
forma a la celula y estas pueden destruirse o
romperse en condiciones especiales. Entre los
constituyentes de la pared celular de las bacterias
Gram (+) y Gram negativas existen importantes
diferencias.

BACTERIA GRAM POSITIVA

Tiene una capa gruesa de Peptidoglicano (mureina)
y dos clases de cidos teicoicos: Acido Lipoteicoico
que est en la superficie, empotrado en la capa de
peptidoglicano y unido a la membrana citoplsmica.
Y Acido teicoico de la pared que est en la
superficie y se une solo a la capa de peptidoglicano.
El

acido

teicoico

es

el

responsable del determinante

antignico del organismo.

BACTERIA GRAM NEGATIVA

Tiene una capa delgada de Peptidoglicano (mureina) unida a
una membrana exterior por lipoproteinas. La membrana
exterior est hecha de protena, fosfolpido y lipopolisacrido.
En el lipopolisacrido, la porcin de lpido est embebida en el
fosfolpido y el antgeno O polisacrido est en la superficie.
El lpido se llama Lpido A y es txico; pero el lipopolisacrido
entero se llama Endotoxina. La pared de la clula tiene poros
llamado Priones para el transporte de substancias de peso
molecular bajo.
Entre la membrana citoplsmica y la
pared

celular

hay

un

espacio

periplsmico con enzimas hidrolticas,

enzimas inactivadoras de antibiticos
y protenas de transporte.

GRACIAS