Prctica 12

HIDRLISIS DE UNA
PROTENA Y ENSAYOS PARA
PROTENAS Y AMINOCIDOS
EQUIPO 5
Prez Muoz Guillermo
Grupo 2IM1
1

OBJETIVOS
Efectuar la hidrlisis total de una protena.
Identificar algunos aminocidos presentes en un
hidrolizado de protena, por medio de sus
propiedades Fsico-Qumicas.
Identificar por cromatografa en placa fina
algunos de los aminocidos presentes en un
hidrolizado de protena.
2

INTRODUCCIN

Las protenas forman parte de la estructura

bsica de los tejidos (msculos, tendones, piel,
uas, etc.) y desempean funciones
metablicas y reguladoras (asimilacin de
nutrientes, transporte de oxgeno y de grasas
en la sangre, etc.). Qumicamente son
poliamidas, cuyos monmeros son
aminocidos.
3

 Las protenas se pueden clasificar segn el

tipo de funcin que desempean:
Protenas fibrosas o estructurales: Son
insolubles en agua, de gran resistencia y en
forma de fibras.[Piel, msculos, cabellos, etc.]
Protenas globulares: Protenas pequeas
formando unidades compactas y son solubles en
agua.[Hemoglobina, enzimas, hormonas,
anticuerpos, etc.]
Protenas conjugadas: Asociadas a una parte
no proteica, como las nucleoprotenas,
glicoprotenas, lipoprotenas, etc.
4

 Los -aminocidos que forman las protenas,

pertenecen a la serie L y su frmula general es:

Se unen formando enlaces peptdicos, la unin de

dos es un dipptido; de tres un tripptido, etc., y
cuando se Tratan de mayores a 80 aminocidos es
un polipptido [PROTENA]

AMINOACIDOS ESENCIALES

isoleucina(Ile):necesaria para la formacin de hemoglobina,

estabiliza y regula el azcar en la sangre y los niveles de energa.
Este aminocido es valioso para los deportistas porque ayuda a la
curacin y la reparacin del tejido muscular, piel y huesos.

fenilalanina(phe): eleva el estado de nimo, disminuye el dolor,

ayuda a la memoria y el aprendizaje.

 metionina(met): Antioxidante de gran alcance y una buena

fuente de azufre, lo que evita trastornos del cabello, piel y uas,
ayuda a la descomposicin de las grasas, ayudando as a prevenir
la acumulacin de grasa en el hgado y las arterias.

treonina(thr): importante para la formacin de colgeno, elastina

y esmalte de los dientes.

Leucina:Este aminocido reduce los niveles de azcar en la sangre

y ayuda a aumentar la produccin de la hormona del crecimiento.

 lisina(lys):este aminocido son garantizar la absorcin

adecuada de calcio y mantiene un equilibrio adecuado de
nitrgeno en los adultos.

triptofano(tpr): ayuda en el control de peso mediante la

reduccin de apetito, aumenta la liberacin de hormonas de
crecimiento y ayuda a controlar la hiperactividad en los nios.

histidina(his):Este aminocido se encuentra abundantemente en

la hemoglobina y se utiliza en el tratamiento de la artritis
reumatoide, alergias, lceras y anemia.

 alanina(ala):importante en la transferencia de nitrgeno de los

tejidos perifricos hacia el hgado, ayuda en el metabolismo de la
glucosa, un carbohidrato simple que el cuerpo utiliza como energa.

Valina:necesaria para el metabolismo muscular y la coordinacin, la

reparacin de tejidos, y para el mantenimiento del equilibrio
adecuado de nitrgeno en el cuerpo.

AMINOCIDOS NO ESENCIALES
prolina(pro): ayuda en la cicatrizacin del cartlago y el
fortalecimiento de las articulaciones, los tendones y los msculos del
corazn.

glicina(gly): promueve una prstata sana, el sistema nervioso

central y el sistema inmunolgico.

serina(ser):necesario para el correcto metabolismo de las grasas y

cidos grasos, el crecimiento del msculo, y el mantenimiento de un
sistema inmunolgico saludable.
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 cisteina(cys):Protege el cuerpo contra el dao por radiacin,

protege el hgado y el cerebro de daos causados por el alcohol,
las drogas.

Taurina: vital para la utilizacin adecuada de sodio, potasio, calcio

y magnesio, ayuda a prevenir el desarrollo de arritmias cardiacas
potencialmente peligrosas.

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 glutamina(gln): mantener el equilibrio del cido alcalino en el

cuerpo, promueve un sistema digestivo saludable, reduce el tiempo
de curacin de las lceras y alivia la fatiga.

tirosina(tyr):ayuda en la produccin de melanina (el pigmento

responsable del color del pelo y la piel) y en las funciones de las
glndulas suprarrenales, tiroides y la pituitaria.

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 aspartico(asp):ayuda a facilitar la circulacin de ciertos minerales a

travs de la mucosa intestinal, en la sangre y las clulas.

glutamico(glu):importante en el metabolismo de azcares y grasas,

ayuda en el transporte de potasio en el lquido cefalorraqudeo.

arginina(arg):considerado como "El Viagra Natural" por el aumento

del flujo sanguneo hacia el pene, retrasa el crecimiento de los tumores
y el cncer mediante el refuerzo del sistema inmunolgico.

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 Su estructura de una protena, presenta varios

niveles de complejidad.

ESTRUCTURA PRIMARIA: Viene determinada por la

secuencia de aminocidos en la cadena proteica, es decir,

el nmero de aminocidos presentes y el orden en que
estn enlazados.

Conocer la estructura primaria de una protena no solo es

importante para entender su funcin, sino tambin en el
estudio de enfermedades genticas. Es posible que el
origen de una enfermedad gentica radique en una
secuencia anormal. Esta anomala, si es severa, podra
resultar en que la funcin de la protena no se ejecute de
manera adecuada o, incluso, en que no se ejecute en lo
absoluto.
14

 ESTRUCTURA SECUNDARIA:
Es la forma en que se acomoda la cadena por
interacciones por puente de hidrgeno, dando
una determinada conformacin a las
protenas. Frecuentemente es en forma de
-hlice o bien plegada-.
La forma en beta es una conformacin simple
formada por dos o ms cadenas
polipeptdicas.

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 ESTRUCTURA TERCIARIA:
Forma en la que las cadenas enrolladas
se doblan por interacciones por puentes
de Hidrgeno, puentes de disulfuro,
fuerzas electrostticas, etc.
La estructura terciaria de una protena es
la responsable directa de sus
propiedades biolgicas, ya que la
disposicin espacial de los distintos
grupos funcionales determina su
interaccin con los diversos ligandos.

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 ESTRUCTURA CUATERNARIA:
La estructura cuaternaria
deriva de la conjuncin de
varias cadenas peptdicas
que, asociadas, conforman
un multmero, que posee
propiedades distintas a la de
sus monmeros
componentes. Dichas
subunidades se asocian
entre s mediante
interacciones no covalentes,
como pueden ser puentes de
hidrgeno, interacciones
hidrofbicas o puentes
salinos.
17

18

AMINOACIDOS AZUFRADOS
La metionina es un aminocido neutro, no polar que
contiene un tomo de azufre y, es el primer aminocido en
la sntesis de cualquier protena.
Esencial en el tratamiento de enfermedades hepticas, la
depresin. Ayuda a disminuir la acumulacin de metales
pesados en el organismo. Es importante en el
tratamiento de la osteoartritis. Ayuda a evitar la
acumulacin de colesterol.

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Cistena
Es un aminocido con azufre, al igual que la metionina,
conteniendo un grupo tiol (-SH). A pH ligeramente bsico
este grupo se oxida y dos cistenas pueden unirse por enlace
disulfuro formndose la cistina. Puede formar enlaces
disulfuro en protenas, generando estabilidad trmica en
stas.
Posee accin antioxidante. Mejora las funciones
inmunitarias. Ayuda en la proteccin del hgado.
Favorece la eliminacin de los metales pesados. Ayuda a
desintoxicar el intestino. Previene las cataratas.
Previene el cncer. Pone fin al crecimiento de tumores.

20

 Las protenas se pueden hidrolizar con soluciones

diluidas de cidos minerales a ebullicin suave;
ya sean hidrlisis parciales[se obtienen
fragmentos peptdicos y aminocidos aislados]; o
hidrlisis totales [mezclas de aminocidos]
Existen diferentes tipos de identificacin para las
protenas como una tcnica de cromatografa, o
reacciones qumicas algunas de estas reacciones
son coloridas, como la xantoprotica y la reaccin
con ninhidrina.
Reaccin Con Xantoproteca

21

HO

COOH
NH2

HNO3

COOH

HO
NO2

NH2

 Reaccin Con Ninhidrina

22

 Se logra observar la presencia del grupo amino

en los aminocidos cuando se efecta una
reaccin con cido nitroso, desprendindose 1mol
de Nitrgeno, por cada grupo amino primario.

23

 La caracterstica ms llamativa de los aminocidos es la

existencia en una misma molcula de grupos
cidos (capaces de ceder H+) y grupos bsicos
(capaces de captar H+). Por lo tanto, en medio cido se
comportan como bases, y en medio bsico se
comportan como cidos. Las molculas que presentan
esta caracterstica se dice que son anfteros o
anfolitos.
En solucin acuosa existen en forma de in bipolar o
zwiterion, por lo tanto reaccionan con cidos y con
bases.

24

 La presencia de enlaces de disulfuro, se pone

en manifiesto por una reaccin de
precipitacin en medio bsico y la presencia
de enlaces peptdicos son detectados por la
reaccin de Biuret.
La reaccin se basa en la formacin de un compuesto de
color violeta, debido a la formacin de un complejo de
coordinacin entre los iones Cu2+ y los pares de
electrones no compartidos del nitrgeno que forma parte
de los enlaces peptdicos

R-S-S-R + NaOH

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R-SH + (CHCOO)-Pb

PbS

2(CHCOO-R)

BIURET

26

H2

PARTE EXPERIMENTAL
MATERIAL

REACTIVOS

1 Refrigerante

Acetato de plomo al 10%

1 Matraz baln de 200ml

c. Clorhdrico conc.

1 Vaso de pp de 600ml

c. Clorhdrico 0.1 N

1 Vaso de pp de 150ml

c. Ntrico conc.

1 Embudo de vidrio

Hidrxido de sodio al 10%

10 Tubos de ensayo

Hidrxido de sodio 0.1N

1 Agitador de vidrio

Fenoftalena al 10%

2 Pinzas de 3 dedos

Ninhidrina al 3%

1 Pinza para tubo de ensayo

Nitrito de sodio al 5%

1 Rejilla

Rojo Congo al 0.1%

1 Bao mara

Sulfato de cobre al 2%

1 Mechero

Grenetina

1 Soporte universal

Clara de huevo

1 Trozo de manta de cielo

Alcohol terbutlico

Papel pH

Carbn activado

Papel filtro

Valina

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Alanina

Glicina
Fenilalanina

PREPARACIN DE SOLUCIONES
Cantidad

Reactivo

1g

Grenetina

10ml

c. Clohdrico conc.

10ml

Agua destilada

0.5g

Carbn activado

Solucin A [Hidrlisis de grenetina]

PROCEDIMIENTO:
- grenetina
- c. Clohdrico
conc.
- Agua destilada

Agregar
Carbn
activado y
calentar
2min

28
35 min

 Solucin B [Solucin neutralizada de hidrolizado de

grenetina]
PROCEDIMIENTO:
Cantidad

Reactivo

El necesario

Papel pH

La necesaria

Hidrxido de sodio al 10%

0.5ml

Solucin A

- Solucin A
- Neutralizar con NaOH [BaOH]
- Determinar punto neutralizado
Con el papel pH

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 Solucin C [Solucin de grenetina sin hidrolizar]

PROCEDIMIENTO:
Cantidad

Reactivo

20 ml

Agua destilada

0.5g

Grenetina

- Grenetina
- Agua destilada

30

 Solucin D [Solucin de Albmina]

PROCEDIMIENTO:
Cantidad

Reactivo

1 Huevo

La clara

1 Trozo

Manta de cielo

100 ml

Agua destilada

- La clara
- 10 seg

31

- Agua

REACCIONES DE IDENTIFICACIN
Cantidad

Reactivo

2 .0 ml

Solucin A

2.0 ml

Solucin D

10 ml

c. Ntrico conc.

El necesario

Hidrxido de sodio al 10%

Reaccin Xantoproteca

- Solucin A
- 5ml c.
Ntrico conc.
-NaOH
Hasta pH basico
- Solucin D
- 5ml c.
32
Ntrico conc.

Cantidad

Reactivo

2 .0 ml

Solucin A

2.0 ml

Solucin D

2.0 ml

Agua destilada

15 ml

Hidrxido de sodio al 10%

1.0 ml

Acetato de plomo

Reaccin de precipitacin
- Solucin A
- 5ml NaOH
- Acetato de Pb

- Solucin D
- 5ml NaOH
- Acetato de Pb

Agua
33 destilada
- 5ml NaOH
- Acetato de Pb

5 min

Cantidad

Reactivo

1 .0 ml

Solucin A

1.0 ml

Solucin D

0.5 ml

Agua destilada

2.0 ml

Hidrxido de sodio al 10%

0.5 ml

Solucin C

Reaccin de Biuret
-

Agua
0.5ml NaOH
[Tubo testigo]
2ml CuSO 4

- Solucin C
- .5ml NaOH
- 2ml CuSO 4
Solucin
D
34
2ml CuSO4

- Solucin A
- .5ml NaOH
- 2ml CuSO
4

Solucin D
-0.5ml NaOH
2ml CuSO
4

- .5ml Solucin A
- 2ml CuSO
4

Cantidad

Reactivo

0.5 ml

Solucin B

0.5 ml

Solucin D

0.5 ml

Solucin C

0.5 ml

Agua destilada

0.5 ml

Aminocido patrn

2.5 ml

Ninhidrina al 3%

- Agua
- 0.5ml Ninhidrina

- Solucin C
- 0.5ml Ninhidrina

35
Solucin
D
- 0.5ml Ninhidrina

Reaccin con
Ninhidrina

- Solucin B
- 0.5ml Ninhidrina

Aminocido patrn
0.5ml Ninhidrina

Cantidad

Reactivo

3 .0 ml

c. Clorhdrico conc.

2.0 ml

Solucin D

2.0 ml

Agua destilada

2.0 ml

Solucin A

2.0 ml

Solucin C

4.0 ml

Nitrito de sodio al 5%

- Agua
- HCl
- [Tubo testigo]
T
- Solucin C
- HCl

36

Cada tubo
con 1ml de
Nitrito de
sodio al 5%

Reaccin con
Ninhidrina

- Solucin D
- HCl

- Solucin A
- HCl

Cantidad

Reactivo

4.0 ml

Agua destilada

4.0 ml

Solucin B

6.0 ml

Rojo Congo

6.0 ml

Fenolftalena al 0.1%

El necesario

HCl al 0.1N

El necesario

NaOH al 0.1N

- 2ml Solucin B
- 3ml rojo congo
- Gota Gota[HCl]

- 2ml agua
- 3ml rojo congo
- Gota Gota[HCl]
37

Accin reguladora
de aminocidos

- 2ml Solucin B
- 3ml fenolftalena
- Gota Gota[NaOH]

- 2ml agua
- 3ml fenolftalena
- Gota Gota[NaOH]

Cantidad

Reactivo

0.1 ml

Solucin B

0.1 ml

Solucin Patrn de aminocido 1 al 1%

0.1 ml

Solucin Patrn de aminocido 2 al 1%

3.0 ml

Solucin Isopropanol-agua 7:3

La necesaria

Solucin de ninhidrina para revelar

Cromatografa en placa fina

-Solucin B
-Aplicaciones de
aminocidos

Identificar aminocidos
Determinando valores
De Rf
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Isopropanol-agua 7:3

Secar y revelar
con atomizador
[ninhidrina]

BIBLIOGRAFIA
http://www.aula21.net/nutricion/proteinas.htm#1
http://www.uv.es/tunon/pdf_doc/proteinas_09.pdf
http://www.ehu.es/biomoleculas/buffers/buffer3.htm
http://catedras.quimica.unlp.edu.ar/qo3/Apuntes/Biuret.pd
f
http://www.rdnattural.es/plantas-y-nutrientes-para-elorganismo/aminoacidos/metionina/
http://www.rdnattural.es/plantas-y-nutrientes-para-elorganismo/aminoacidos/cisteina/
http://proteinas.org.es/s/20+amino
%C3%A1cidos+esenciales

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