Republica Bolivariana de

Venezuela
Universidad de los Andes
Facultad de Ciencias
Departamento de Biologia
Protozoologa B-2015

Una Kinasa eIF2 alfa de unin a la membrana situada

en endosomas est regulada por grupos hemos,
controla la diferenciacin y niveles de ROS (Especies
Reactivas de Oxgeno) en Trypanosoma cruzi.
(A Membrane-bound eIF2 Alpha Kinase Located in Endosomes Is
Regulated by Heme and Controls Differentiation and ROS Levels in
Trypanosoma cruzi.)
Leonardo da Silva Augusto, Nilmar Silvio Moretti,
Thiago Cesar Prata Ramos, Teresa Cristina Leandro de
Jesus, Min Zhang, Beatriz A. Castilho, Sergio
Schenkman
Noviembre, 2014

Introduccin
La subunidad alfa del factor iniciador de la
transcripcin 2, es la subunidad reguladora de la
actividad de dicho factor iniciador (eIF2).
Su inhibicin es por fosfoliracin y ocurre en
condiciones de estrs.
Se han reportado 4 kinasas descritas en mamferos
que la inhiben.

eIF2K
4

PKR

PERK
HRI

Extrado de Kimball

Extrado de
Baird & Wek
(2012)

Y ahora Trypanosoma
cruzi
C
Agente patolgico de la Enfermedad de Chagas.
Perteneciente a la familia Trypanosomatidae, donde se
encuentra otro peligroso parasito: Leishmania.
Es polimorfico y presenta un complejo ciclo de vida.
Es deficiente en disitintas rutas metabolicas.

Que relacin tienen

ambos puntos?

Se han encontrado protenas ortologas a las kinasas

descritas en mamiferos, en otros organismos.
En los trypanosomatidaes, se han encontrado kinasas
putativas.
A pesar de que la funcin principal de estas kinasas se
conserva, los eventos que desencadena su
funcionamiento son distintos e igualmente las
consecuencias.
Previas revisiones, han detallado una dependencia de la
accion de 2 kinasas (PERK y GCN2) en respuesta al estrs
nutritivo.

Qu novedad se
presenta en el trabajo?

Partes relevantes de la
metodologa de trabajo.
Trypanosoma cruzi
cepa Y

Organismos utilizados:
Escherichia coli cepa
BL21
Nickel Agarosa

Columnas de purificacin por afinidad:

Proteina G-Sefarosa

Plsmidos producidos:
Inmunoprecipitacion

Knock- Out

Plasmido para KnockOut.

Plasmido que
contenia a TcK2-HA
Plasmido que
contenia a eIF2 con
una cola de Hys.
Plasmido que
contenia a un antiTcK2.
Plasmidos que
contenia a TcK2-GST.

Resultados

La T. cruzi K2 es una
protena unida a la
membrana que se
autofosorila y fosforila a
eIF2.

Porcin de
protena
reconocida
por el
anticuerpo

TcK2
fosforila
da

La T. cruzi K2 est
localizada en
compartimentos internos
de la clula y esta
fosforilada en las fases no
proliferativas del parsito.

Colocalizaci
n BiP-TcK2

Mayor
fosoforilaz
acin

Los grupos Hemos

promueven la proliferacin,
acumulandose en
endosmas.

Colocalizaci
n
CruzipainTcK2

Endosoma
(Reservoso
ma) mas
densos

Endosoma
(Reservoso
ma) menos
densos

Los grupos Hemos se unen

especficamente al dominio
cataltico e inhibe la
fosforilacin y la
metacclogenesis

La clulas TcK2 KO son

disparejos en la
diferenciacin clular y hay
ralentizacin en el
crecimiento

El ascorbato restaura el
crecimiento de los parasito
TcK2 nulos, la
diferenciacin e
infectividad, pero no la
proliferacin intracelular.

Las clulas de con TcK2

nulo, pierden lo denso de
los endosomas y no se
recobra con ascorbato

Las clulas con TcK2 nulo,

incorporan mas grupos
hemos que las WildTypes
resultado en el incremento
H2O2 y SRO (Especies
Reactivas de Oxgeno).

Wild Type, pero no la

quinasa muerta TcK2
restaura los fenotipos
Knock Out.

Discusin y Conclusiones.

 El balance nutricional de la clula, es la

promotora de diferenciacin celular.
La fosforilacin de eIF2 por TcK2, ocurre
principalmente en la fases del hospedador
vertebrado.
Existe una correlacin Cruzipain-TcK2.
Los grupos hemos son inhibidores de la
transformacin.
La localizacin subcelular de TcK2 cambia,
de acuerdo al estado.

 Existe un aumento de la actividad de la

superxido dimutasa y una reduccin
de la actividad peroxidasa.
El transporte de los grupos hemos aun
no estan claros.
Los agentes antioxidantes son capaces
de recobrar la funcionalidad parcial de
la celula.
TcK2 no es la unica que fosforila a eIF2.