5.

REACES COM MAIS DE UM SUBSTRATO:

5.1. REACES COM 2 SUBSTRATOS E 2 PRODUTOS:
i.

Mecanismo sequencial mec. do complexo ternrio

ordenado

ao acaso

ii. Mecanismo no sequencial mec. da enzima

substituda/modificada (ping-pong)
5.1.1. Equaes de velocidade no estado estacionrio:
A) Mecanismo sequencial ordenado (re. reversvel):
k1.a
E
EA
k-1
k4 k-4.q k-2 k2.b
k3

EAB
EQ k .p
EPQ
-3

V [ A][B ] V [P ][Q ]

K iA K mB
K mP K iQ
v
[ A] K mA [B ] K mQ [P ] [Q ] [ A][B ] K mQ [ A][P ]
1

K iA K iA K mB K mP K iQ K iQ K iA K mB K iA K mP K iQ
K mA [B ][Q ] [P ][Q ]
[ A][B ][P ]
[B ][P ][Q ]

K iA K mB K iQ K mP K iQ K iA K mB K iP K iB K mP K iQ

(51)

V+, V- V correspondente re. directa e inversa,

respectivamente
KmA, KmB, KmP e KmQ ctes de Michaelis correspondentes a A, B,
P e Q, respectivamente, para situaes saturantes de 2
substrato (na ausncia de inibio pelo produto)
KiA, KiQ, KiP e KiB ctes de inibio de A, Q, P e B, quando
funcionam como inibidores da re. inversa, respectivamente
2

 Relao de Haldane:

V K mP K iQ
v 0

K eq
V K iA K mB

(52)

v0, na ausncia de produtos:

v0

K iA K mB

V [ A][B ]
K mB [ A] K mA [B ] [ A][B ]

(53)

Ex: Desidrogenase do malato

B) Mecanismo sequencial ao acaso (re. reversvel):

EA
A
E
KiB

KiA KmB
B

A
EB

KmQ
EAB
EPQ

KmA

EP
Q

KiP
E

KmP KiQ
P

Q
EQ

Considerando todos os passos em equilbrio excepto o de

isomerizao:

V [ A][B ] V [P ][Q ]

K iA K mB
K mP K iQ
(54)
v
[ A] [B ] [P ] [Q ] [ A][B ]
[P ][Q ]
1

K iA K iB K iP K iQ K iA K mB K mP K iQ

KiA, KiB, KiP e KiQ ctes de dissociao de EA, EB, EP e EQ,

respectivamente
KmA, KmB ctes de dissociao de A, B de EAB,
respectivamente
KmP, KmQ ctes de dissociao de P, Q de EPQ,
respectivamente
AeB
KmAKiB = KiAKmB
equivalentes
PeQ
KiPKmQ = KmPKiQ
Relao de Haldane:

V K mP K iQ

K eq (55)
V K iA K mB

 v0, na ausncia de produtos:

v0

K iA K mB

V [ A][B ]
(53)
K mB [ A] K mA [B ] [ A][B ]

Ex: Hexocinase do msculo

C) Mecanismo no sequencial ordenado (ping-pong) (re.
reversvel):
a.k1 EA
E
k-1 EP
k4 q.k-4 p.k-2 k2
EB b.k3
EQ
k-3

E
6

V [ A][B ] V [P ][Q ]

K iA K mB
K iP K mQ
v
[ A] K mA [B ] [P ] K mP [Q ] [ A][B ] [ A][P ]

K iA K iA K mB K iP K iP K mQ K iA K mB K iA K iP
K mA [B ][Q ] [P ][Q ]

K iA K mB K iQ K iP K mQ

(56)

K iA K mB K mA K iB

K iP K mQ K mP K iQ
Relao de Haldane:

V K iP K mQ

K eq (57)
V K iA K mB

 v0, na ausncia de produtos:

V [ A][B ]
v0
K mB [ A] K mA [B ] [ A][B ]

(58)

Ex: Transaminase
5.1.1.1. Identificao de mecanismos:
1. Determinao de v0 na ausncia de produtos:

-. Distino entre mecanismos sequencial e no sequencial

-. Distino entre mec. sequencial ao acaso e sec. ordenado se
equao para equilbrio rpido no for aplicvel
8

2. Determinao de v0 na presena de 1 dos produtos (inibio

pelo produto):
-. Permite distino dos 3 mecanismos
-. Permite distinguir qual a ordem de ligao dos substratos /
libertao dos produtos, no mec. sequencial ordenado mas no
no mec. no sequencial
Tipo de inibio pelo produto
Produto Substrat
present
o
e
varivel

Sequencial
ordenado

Sequencial ao
acaso

Ping-pong

Mista (anticomp.)

Comp. (no
inibe)

Mista (no
inibe)

Mista (mista)

Comp. (no
inibe)

Comp. (comp.)

Comp. (comp.)

Comp. (no
inibe)

Comp. (comp.)

)Q
[ ] saturantes
do outro
B
Mistasubstrato
(no
inibe)

Comp. (no
inibe)

Mista (no
inibe)

3. Estudo do efeito de istopos:

5.1.2. Determinao de parmetros cinticos para situao de v0

na ausncia de produto:

v0

K iA K mB

V [ A][B ]
K mB [ A] K mA [B ] [ A][B ]

lim v V
[ A ]
[ B ]

= 0 (ping-pong)
Ex: [B] = cte, [A] varivel:
Vap

V [B ]
[ A]
K mB [B ]
v0
K iA K mB K mA [B ]
[ A]
K mB [B ]
Kmap

(59)

V [ A]
lim v
[ B ]
K mA [ A]
10

6. APLICAES PRTICAS DE ENZIMAS:

6.1. ENZIMAS COMO REAGENTES ANALTICOS:
Determinao da [substncias] atravs de ensaios
enzimticos.
i.

Mtodos de ponto final: estabelecimento do equilbrio da

reaco antes da determinao da [ ] de produto final.

Ex: det. da [glucose]

glucose

oxidase da
glucose
O2

H2O2

gluconolactona

peroxidase

2H2O

cromogneo pigmento

11

ii. Mtodos cinticos: relao entre v0 e [substrato], [activador]

ou [inibidor] conhecida determinao da e [substrato],
[activador] ou [inibidor] a partir de v0.
Ex: det. da [Mn2+] por activao da desidrogenase do isocitrato
(mtodo muito sensvel).
6.2. APLICAES MDICAS:
i)

Determinao dos nveis de actividades enzimticas

especficas marcadores de situaes patolgicas

Ex. LDH (H4) isquemia cardaca

hidroxilase da Phe fenilcetonria

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ii) Enzimas como agentes teraputicos:

)

enzimas digestivas (hidrolases) insuficincias digestivas

proteases absoro de hematomas Ex: bromelaina

(ananase)

urocinase activao da plasmina (enz. fibrinoltica)

tratamento da embolia pulmonar

iii) Inibidores de enzimas:

Ex:
)

inibidores da esterase da acetilcolina (hidrolase)

tratamento da insuficincia motora

inibidores da transcriptase reversa anti-retrovirais

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6.3. APLICAES BIOTECNOLGICAS E INDUSTRIAIS:

i)

Enzimas imobilizadas reutilizao de enzimas

ii) Indstria alimentar:

) invertase produo de acar invertido
) pectinases, celulases, xilanases clarificao de sucos,
vinhos
) proteases coagulao do leite fabrico de queijos
) -amilase nveis germinao dos gros farinhas
imprprias para consumo
iii) Indstria txtil e papeleira:
) celulases, xilanases, peroxidases degradao de
celulose, hemi-celulases e lenhina, respectivamente
Ex: celulase utilizada no biostoning da ganga
iv) Detergentes:
) enzimas hidrolticas
Ex: proteases, lipases

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