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Cromatografa de reparto o

de particin

La

cromatografa de reparto consiste en


la separacin de los componentes de una
mezcla sobre una fase estacionaria
constituida por un soporte slido inerte
cubierto por una pelcula lquida que es
fuertemente retenida por dicha fase. La
separacin se efecta por medio de una fase
fluida mvil que es el solvente de desarrollo
que es inmiscible con el lquido del soporte
estacionario y que transporta los
componentes a lo largo de la F. E.

Los

componentes se van separando


segn sean sus solubilidades relativas en
el lquido de la fase estacionaria y la fase
mvil.
Se define entonces el coeficiente de reparto
o constante de distribucin como el cuociente
de la concentracin del soluto en la fase
mvil y su concentracin en la fase
estacionaria:
Kd = CM / CE

Aquellas

sustancias que presentan un


alto valor de Kd son movilizadas ms
rpidamente que aquellas que tienen un bajo
valor de Kd.

As

en la cromatografa de reparto los solutos


se van separando secuencialmente, de
acuerdo con sus respectivos valores de Kd.

Fases estacionarias
Como ya se ha sealado, la fase estacionaria
est constituida por un soporte slido y un
lquido fuertemente retenido que lo recubre
superficialmente.
Este lquido habitualmente es agua, pero
tambin puede ser de naturaleza orgnica,
cuando el solvente es polar.

1.

2.

Diversas sustancias pueden ser


utilizadas como fases slidas segn
cmo retengan el agua ( lquido polar).
Fases slidas que retienen el agua por
adsorcin: slica gel desactivada y tierra de
diatomeas tambin desactivada con agua.
Fases slidas que retienen el agua por
formacin de puentes de hidrgeno: papel
cromatogrfico y celulosa en polvo.

Solventes de desarrollo o fase


mvil
En la cromatografa de reparto, la capacidad
transportadora de un solvente puede
evaluarse a travs de su capacidad para
formar puentes de hidrgeno con el agua del
soporte estacionario. As se habla de
eluyentes hidrfilos e hidrfobos.

Eluyentes mas usuales ordenados


de acuerdo a su carcter
hidroflico decreciente
Formalina metanol cido actico etanol
isopropanol acetona n propanol terbutanol
n butanol alcohol n amlico acetato de etilo
ter etlico acetato de n butilo cloroformo
benceno tolueno- ciclohexano ter de
petrleo.

Para

el desarrollo del cromatograma


debe elegirse el solvente menos hidrfilo
posible que permita el desplazamiento.

Se

deduce que los analitos (solutos) tardan


ms tiempo en eluirse si se usa una fase
mvil poco polar.

Es

decir, cuanto ms polar sea el analito,


ms tardar en eluir.

La

cromatografa de reparto se divide en


fase normal, y fase reversa,
cuyas principales diferencias radican en
las distintas polaridades de sus fases
estacionarias y mviles.

Cromatografa en fase normal


En

este caso la fase estacionaria es polar y


la mvil apolar.
La retencin tiene lugar en esa especie de
capa lquida depositada en la fase
estacionaria (polar) y la fase mvil (apolar).
Donde el analito menos polar ser el primero
que se eluye y el ms polar el ltimo en eluir.

Cromatografa en fase reversa


En

la cromatografa de fase reversa su fase


estacionaria en apolar, y la fase mvil polar.

La

retencin se produce en esta especie de


capa lquida depositada qumicamente como
consecuencia de la distinta solubilidad
relativa entre la fase estacionaria (apolar) y la
fase mvil (polar).

Los

compuestos ms retenidos son los


ms apolares.
La retencin y selectividad se controlan
fundamentalmente con la composicin de la
fase mvil.
Para obtener una fase mvil de fuerza de
elucin ptima, se ensayan mezclas de
metanol, acetonitrilo o tetrahidrofurano en
agua.

Actualmente,

el 75% de los anlisis con


HPLC (cromatografa lquida de alta
resolucin) se realizan en fase reversa.

Permite

un anlisis directo de muestras


acuosas y de compuestos solubles en agua o
en disolventes relativamente polares
(metanol) y con peso molecular no superior a
2000 o 3000 uma.

Aplicaciones de la Cromatografa de
Reparto en productos alimenticios

edulcorantes artificiales,
antioxidantes,
aflatoxinas,
aditivos en bebidas refrescantes,
colorantes,
aminocidos, protenas,
carbohidratos,
lpidos

CUESTIONARIO
Completa la siguiente tabla comparativa con
los parmetros que se indican a
continuacin:
Tipo de cromatografa
Indicadores

Fase Estacionaria.
Fase Mvil
Separacin solutos
Interaccin FM -FE
Tipo interaccin
Soluto - FM

Cr. de adsorcin

Cr. de reparto

2.

3.
4.

5.

6.

De qu depende la separacin en la
cromatografa de adsorcin?
Enumera los requisitos de un adsorbente.
Cmo se clasifican los adsorbentes de
acuerdo a su capacidad de retencin de los
solutos?
Cmo se clasifican las fases estacionarias
en la cr. de reparto de acuerdo a su
capacidad de retencin de los solutos?
En qu consiste la activacin de los
adsorbentes y qu intencin tiene su
activacin?

7.

En la cr. de adsorcin qu es el factor de


retencin y cul es su utilidad?
8. En la cr. de reparto qu es el coeficiente de
reparto y cul es su utilidad?
9. Al realizar una cromatografa qu datos no
pueden omitirse?
10. Utilidades o aplicaciones de cada tipo de
cromatografa, de adsorcin y de reparto.
11. Diferencias entre cromatografa de reparto
de fase normal y de fase reversa.
12. Ordena los siguientes eluyentes en forma
creciente de polaridad: Benceno ter de
petrleo - etanol ter etlico acetona.