UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA LA MOLINA

ESCUELA DE POSGRADO
M A E S T R A E N A C U I C U LT U R A

Curso de Biotecnologa Aplicada a la Acuicultura

Prof. Carlos Scotto Espinoza

Ronald Aquino Ortega

INTRODUCCIN
A

travs del empleo de las micas en la

actividad acucola, es posible impactar en la
modificacin y mejoramiento gentico para:
Desarrollo

de cepas resistentes a enfermedades.

Mejoramiento en la tasa de crecimiento.
Conversin alimenticia.
Control hormonal de ciclos reproductivos.
Identificacin y tratamiento de enfermedades.
Desarrollo de vacunas.
Desarrollo sostenible.

BIOTECNOLOGA DE
PROTENAS RECOMBINANTES
Esta

implicada en el aislamiento, produccin

y mejoramiento de las propiedades
biolgicas de protenas especficas a partir
de diversas fuentes naturales tales como
plantas, animales o microorganismos, para
su posterior aplicacin en diversos procesos.

Un

sistema de expresin est conformado

por
Un

organismo hospedero
Vector de expresin

SELECCI
N DEL
SISTEMA
DE
EXPRESI
N

VENTAJAS Y DESVENTAJAS DE
LEVADURAS HOSPEDERAS

PRODUCCIN DE TRIPSINGENO
RECOMBINANTE DE CAMARN BLANCO DEL
PACFICO Litopenaeus vannamei
Objetivo
Obtener

una fuente pura y homognea de tripsingeno

o tripsina para el estudio de sus propiedades y su
potencial aplicacin en la acuicultura.

Por
Por

qu?

su importancia en los procesos digestivos del

camarn.
Por el gran inters sobre la mayor produccin del
cultivo.
Por el elevado costo de las dietas.
Por la necesidad de contar con tripsinas puras sin tener
elementos traza.

PRODUCCIN DE TRIPSINGENO
RECOMBINANTE DE CAMARN BLANCO DEL
PACFICO Litopenaeus vannamei
Problemas:
Actividad

proteoltica contra protenas endgenas.

Inestabilidad proteica por autodigestin de la
tripsina.
Estrategia
Se

de diseo:

basa en la sntesis de su precursor natural

inactivo.
El vector de expresin elegido debe contar con
promotores regulables, con la finalidad de inducir
la produccin de la enzima.
Debe secretarse al medio.
Vector elegido: Pichia pastoris

PRODUCCIN DE TRIPSINGENO
RECOMBINANTE DE CAMARN BLANCO DEL
PACFICO Litopenaeus vannamei
METODOLOGA
Se

utiliz cDNA para tripsingeno de L.

vannamei
Se clona y fusiona con la secuencia seal del
factor de Saccharomyces cerevisiae. Esta
fusin se inserta en el vector de expresin
pPIC9 del sistema de expresin de P. pastoris
(Promotor AOX1) pPIC9Tg
Cepa de P. pastoris: GS115.
Mtodo
de
transformacin:
Tcnica
de
esferoplastos.
Comprobacin de las clulas transformadas:
Genotipicamente:

Por PCR.
Fenotipicamente: Crecimiento en metanol.

DIAGRAM
A
GENERAL
DE UN
VECTOR
DE
EXPRESI
N EN
Pichia
pastoris

 Las

cepas recombinantes se cultivaron en medio mnimo,

con metanol al 0.75%.
Electroforesis SDS-PAGE 2D
Anlisis proteico del medio de cultivo.

Carril 1 y 4: Marcador de peso molecular.

Carril 2: Extracto proteico de glndulas digestivas de L. vannamei.
Carril 3: Protenas recombinantes por una cepa recombinante GS115

Anlisis de Western Blot

despus de 48 horas de induccin con metanol

Carril 1 y 6: Marcador de peso molecular

Carril 3 y 5: Controles negativos
Carril 2: Extracto proteico de glndulas digestivas de L. vannamei.
Carril 4: Medio de cultivo de cepas de tripsingeno cultivadas en condiciones de induccin

GRACIAS.