Estructura y Replicación Del Material Genético

Estructura y replicacin
del material Tema

gentico
6: Estructura 1
Dr. Antonio Barbadilla
Objetivos tema 6:
Estructura y replicacin del material
gentico
Debern
Debern quedar
quedar bien
bien claros
claros los
los siguientes
siguientes puntos:
puntos:
Cmo
se descubri
descubri la
la naturaleza
naturaleza qumica
qumica del
del
Cmo se
material
material hereditario
hereditario
La
composicin qumica
qumica de
de los
los cidos
cidos nucleicos
nucleicos
La composicin
La
estructura 3D
3D del
del DNA:
DNA: naturaleza
naturaleza
La estructura
complementaria
complementaria yy antiparalela
antiparalela de
de la
la doble
doble cadena
cadena
del
del cido
cido desoxirribonucleico
desoxirribonucleico (DNA)
(DNA)
La
extraordinaria capacidad
capacidad explicativa
explicativa del
del
La extraordinaria
modelo
modelo del
del DNA
DNA de
de la
la funcin
funcin biolgica
biolgica
fundamental
fundamental de
de esta
esta molcula
molcula
La
La replicacin
replicacin semiconservativa
semiconservativa
Enzimologa
de la
la replicacin
replicacin
Enzimologa de
Tema 6: Estructura 2
La transformacin bacteriana en
Streptococcus pneumoniae (Griffith 1928)
Rugosa
Muerte por neumona
Cepa resistente
Lisa
No muere
3
Muere
Tema 6:
Estructura 3
Cul es el Principio transformante?
Principio
Rugosa
Lisa
Colin MacLeod
El elemento transformante
es el DNA (1944)
Maclyn McCarty
Oswald
Avery
Ver animacin
experimento
tranformacin
bacteriana
Slo DNA produce transformacin

Tema
6: Estructura 5
Experimento de Alfred Hershey y Martha

Chase con fagos (1952)
Bacterifago T4
El DNA es el
material
infeccioso
Componentes de los cidos nucleicos

adenina
timina
guanina
citosina
Reglas de Chargaff
1. Proporcin de purinas = Proporcin de pirimidinas

A+G=C+T
2.
A=T
3.
G=C
1953. Ao culminante:
J. Watson y F. Crick resuelven la
estructura tridimensional del DNA
(Nature 171: 737-738)
Watson y yo hemos
encontrado el
secreto de la vida
1953. Ao culminante:
Dos lneas de evidencia:

Reglas de Chargaff
Fotografas de difraccin de rayos X
10
Significado reglas de Chargaff
11
Complementariedad de las bases

Difraccin de rayos X
Hemoglobina
Linus Pauling
12
Interpretacin del patrn difraccin de rayos X del DNA
Rosalind E.
Franklin
13
Crick
Modelo en metal
del DNA
J. Watson y F. Crick
Concluyen: La estructura del DNA es una
doble hlice, formada por cadenas orientadas

en direcciones opuestas (antiparalelas). La
estructura se mantiene gracias a enlaces de
hidrgeno entre las bases nitrogenadas que se
encuentran orientadas hacia el interior de las
14 cadenas
15
Doble hlice, formada

por cadenas orientadas
en direcciones opuestas
(antiparalelas).
La estructura se mantiene gracias

a enlaces de hidrgeno entre las
bases nitrogenadas que se
encuentran orientadas hacia el
interior de las cadenas
Desnaturalizacin del DNA

Separacin de las dos hebras por calor
Una mayor proporcin G-C tiene una mayor
temperatura de desnaturalizacin (fusin)
Porcentaje G + C
100
80
60
40
20
70
80
90
100 110
Temperatura de fusin (desnaturalizacin)

16
17
Hlices levgiras y dextrgiras

18
DNA-B dextrgira
Ver
Ver artculo
artculo
Nature
Nature
1953
1953
19
20
La estructura del DNA suministra una

explicacin
asombrosamente
simple del fenmeno de la herencia
La estructura explica:
La naturaleza de la secuencia lineal de los genes
(informacin digital cuaternaria en secuencias
unidimensionales de monmeros A,T,G,C)
El mecanismo de replicacin exacta de los
genes
La naturaleza qumica de las mutaciones
Por qu la mutacin, la recombinacin y la
expresin gnica son fenmenos separables a
nivel molecular
21
Esencial a la relacin
ntima entre estructura
molecular y funcin
gentica del DNA es el
concepto de molde
La complementariedad de las
bases nitrogenadas permite que
la secuencia de una cadena
sencilla de DNA acte como un
molde para la formacin de una
copia complementaria de DNA
(replicacin) o de mRNA
(transcripcin)
22
Y ahora las declaraciones de Watson y

Crick sobre el ADN. Esto es para m la
prueba verdadera de la existencia de Dios
Salvador Dal
Antes pensbamos que nuestro futuro

estaba en las estrellas. Ahora sabemos que
est en nuestros genes.
James Watson
23
Una estructura
tan bonita tena,
por fuerza, que
existir
24
Tema 6: Estructura
24
J. Watson
Una estructura
tan bonita tena,
por fuerza, que
existir
25
J. Watson
El DNA
contiene informacin
digital cuaternaria en
secuencias unidimensionales
de monmeros A,T,G,C
(cristal
aperidico)
26
Hay grandeza en esta concepcin de la

vida,... que mientras este planeta ha ido
girando segn la constante ley de la
Hay
grandeza
esta
concepciny de
gravitacin,
seen
han
desarrollado
se la
estn
vida,... que mientras
este
ha ido
desarrollando,
a partir
deplaneta
una molcula
girando segn
la constante
ley de
helicoidal
asombrosa,
infinidad
delaformas
gravitacin,
han desarrollado
y se estn
cada
vez mssebellas
y maravillosas
desarrollando, a partir de
un comienzo
Charles
Darwintan
sencillo, infinidad de formas cada vez ms
bellas y maravillosas
Charles Darwin
27
28
Replicacin del DNA
29
25 de Abril 1953
It has not escaped our notice that the

specific pairing we have postulated
immediately suggests a possible
copying mechanism for the genetic
material.
30
Posibles modelos de replicacin
31
Replicacin del DNA

Semiconservativa: una cadena sirve de molde para una
nueva cadena
El experimento de M. Meselson y F. Stahl (1958)
demuestra que la replicacin es semiconservativa
Mathew Meselson
Frank Stahl
32
33
Replicacin del DNA
Enzimas que sintetizan (replican) el DNA

E. coli
DNA polimerasa I (rellena huecos y repara)
DNA polimerasa II y III (funcin principal en
la sntesis)
Aade bases en ambas cadenas en la
direccin 5 3
Requiere un 3 OH final
Eucariotas
5 polimerasas
y principal en replicacin
, y exonucleasas
Correccin de pruebas: actividad 3 5
exonucleotdica. Sustituye bases mal emparejadas
(10-5) por correctas (10-7); mecanismos de reparacin
adicionales la reducen hasta 10-10
34
Las polimerasas
conocidas aaden
nucletidos
solamente en la
direccin 5 3
35
36
Por qu no hay una enzima que

polimerice en la direccin 3-> 5?
No funcionara la correccin de errores por
falta de un trifosfato que suministre la
energa de enlace covalente azcar-fosfato
37
Adicin 53
38
OH
PP
OH
OH
3
PP
+ H2O
P
39
OH
OH
PP
OH
Adicin 35
(hipottica)
40
OH
P
P
OH
+ H2O
P
PP
OH
PP
P PP
OH
P
PP
41
P
PP
OH
OH
Adicin 35
(hipottica)
Correccin de errores
42
OH
PP
POH
OH
3
PP
+ H2O
P
43
OH
OH
Adicin 53
OH
P
P
PP
44
POH
OH
Adicin 35
(hipottica)
Replicacin del DNA (2)

Replicacin: continua (cadena adelantada, cebador
slo inicio) y discontinua (cadena retrasada)
Discontinua
Cebador (pequeo RNA 2-60 nucletidos
aadido por enzima primasa o RNA pol que
provee 3 OH.
Fragmento de Okazaki por DNA pol III
(1500 bp en procariotas y 150 en eucariotas)
Pol I elimina cebador 3 -> 5 y llena huecos
(gap)
Ligacin (DNA ligasa, enlace fosfodister)
45
46
47
Polimerasa III
Polimerasa I
48
Por qu el cebador es RNA?
El cebador es ms proclive al error, por

lo que debera eliminarse y el RNA
puede detectarse y eliminarse
fcilmente por la DNApol I
49

El replisoma: complejo enzimtico de la
replicacin que coordina la sntesis de las
dos cadenas, maquinaria molecular
Dmero de la DNA pol III (ncleos
catalticos)
Primosoma: formado por dos enzimas
Primasa
Helicasa (desenrolla el DNA)
Protena de unin a cadena sencilla, ssb
(Unin Y, estabiliza el DNA de cadena
sencilla)
Topoisomerasas tipo I (rotura una cadena)
y II (rotura de dos cadenas) junto a DNA
ligasa -> Relajacin del superenrollamiento
50
El replisoma: una maquinaria de replicacin extraordinaria
51
52

DNA pol III + abrazadera beta -> Enzima procesiva
53
54
Topoisomerasas
55

Origen de replicacin:
Secuencia reconocida (Ori C en E. coli) por
protenas iniciadoras. Varios orgenes en
eucariotas
La replicacin es bidireccional
Horquilla
replicacin
56
En el DNA nuclear de eucariotas hay muchos orgenes de

replicacin (~500 en levaduras y 60000 en mamferos). Cada
unidad de replicacin es un replicn. La replicacin es
bidireccional
57
En el DNA nuclear de eucariotas hay muchos orgenes de

replicacin (~500 en levaduras y 60000 en mamferos). Cada
unidad de replicacin es un replicn. La replicacin es
bidireccional
58
Links de inters
Watson-Crick original paper (1953 Nature)
Trabajos estelares del descubrimiento de la doble
hlice
DNA: el secreto de la vida (Animacin)
Celebracin 50 aniversario descubrimiento de la dobl
e hlice en la UAB
DNA Structure
The Search for DNA - The Birth of Molecular
Biology
Image Library of Biological Macromolecules - DNA
DNA berkeley
DNA Learning Center
Beginner's guide to Molecular Biology
Glosario de Gentica molecular
DNA Replication
Animacin de la replicacin
59

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Muerte por neumona

Dr. Antonio Barbadilla

Cul es el Principio transformante?

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Slo DNA produce transformacin

Experimento de Alfred Hershey y Martha

Componentes de los cidos nucleicos

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1. Proporcin de purinas = Proporcin de pirimidinas

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Dos lneas de evidencia:

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Significado reglas de Chargaff

Dr. Antonio Barbadilla

Complementariedad de las bases

Interpretacin del patrn difraccin de rayos X del DNA

Dr. Antonio Barbadilla

doble hlice, formada por cadenas orientadas

Dr. Antonio Barbadilla

Dr. Antonio Barbadilla

Doble hlice, formada

La estructura se mantiene gracias

Desnaturalizacin del DNA

Dr. Antonio Barbadilla

Temperatura de fusin (desnaturalizacin)

Dr. Antonio Barbadilla

Hlices levgiras y dextrgiras

Dr. Antonio Barbadilla

Dr. Antonio Barbadilla

La estructura del DNA suministra una

Dr. Antonio Barbadilla

Dr. Antonio Barbadilla

Y ahora las declaraciones de Watson y

Antes pensbamos que nuestro futuro

Hay grandeza en esta concepcin de la

Dr. Antonio Barbadilla

Replicacin del DNA

Dr. Antonio Barbadilla

It has not escaped our notice that the

Dr. Antonio Barbadilla

Posibles modelos de replicacin

Dr. Antonio Barbadilla

Replicacin del DNA

Dr. Antonio Barbadilla

Dr. Antonio Barbadilla

Replicacin del DNA

Enzimas que sintetizan (replican) el DNA

Dr. Antonio Barbadilla

adicionales la reducen hasta 10-10

Dr. Antonio Barbadilla

Dr. Antonio Barbadilla

Por qu no hay una enzima que

Dr. Antonio Barbadilla

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Replicacin del DNA (2)

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