CROMATOGRAFIA

LIQUIDA

-Nombres: Fernando Olivares C.

Arselia Vargas L.
-Profesora: Carmen Marn N.
-Asignatura: Anlisis Instrumental
-Fecha:
25 de Junio 2012

Qu es la Cromatografa
Lquida?
Es

un mtodo de anlisis rpido que permite

separar los constituyentes de una mezcla

utilizando las diferencias de estas sustancias
entre sus constantes de equilibrio durante su
distribucin entre una fase mvil liquida y
una fase denominada estacionaria.

Elementos que participan

en una cromatografa
Muestra
Fase

Estacionaria

Fase

Mvil

Cmo interaccionan?
En general, una cromatografa se realiza permitiendo que
la mezcla de molculas que se desea separar (muestra)
interaccione con un medio o matriz de soporte que se
denomina fase estacionaria. Un segundo medio (la fase
mvil) que es inmiscible con la fase estacionaria se hace
fluir a travs de sta para lavar (eluir) a las molculas
en la muestra.

Clasificacin de la
Cromatografa lquida
Segn

la naturaleza de las fases

estacionarias:
-CLS: Cromatografa lquido-Solido
-CLL: Cromatografa lquido-lquido
-CLG: Cromatografa lquido-gel
-BPC: Cromatografa de fases qumicamente
ligadas.

 Segn

la naturaleza de los fenmenos

que intervienen en la separacin:
-Cromatografa de Adsorcin.
-Cromatografa de Reparto.
-Cromatografa de Intercambio Inico.
-Cromatografa de par Inico.
-Cromatografa de intercambio de ligandos.
-Cromatografa de exclusin.

 Segn

el mtodo de Operativo:

-Cromatografa en columna clsica.

-Cromatografa de superficie (cromatografa
de capa fina y cromatografa sobre papel).
-Cromatografa lquida de alta resolucin
(HPLC).

Cromatografa HLPC
HPLC = high performance liquid chromatography
(cromatografa lquida de alta resolucin)
Bombas que permiten presiones
de hasta 6000 psi (414 atm)
hacen pasar la fase mvil por el
interior de columnas de acero (25 mm x 3-25 cm) que contienen
la fase estacionaria con flujos de
0,1 10 ml/min.

Cromatografa HLPC

Una muestra en estado lquido es arrastrada por una

corriente lquida llamada eluyente.

Como fase estacionaria acta un slido finamente

dividido (dimetro de partcula 3, 5, 10 m).

Dependiendo de la retencin de los componentes de la

muestra por la fase estacionaria y de su solubilidad en
el eluyente se provocar su migracin diferencial.

Equipo Bsico para HPLC

Fase Mvil
Alta

pureza (calidad HPLC)

Inactividad frente a la fase estacionaria
Baja viscosidad
Compatibles con la muestra
Facilitar la recuperacin de la muestra
Compatibilidad con el sistema de deteccin

Los disolventes deben desgasificarse antes de su

empleo en HPLC.

La desgasificacin reduce el riesgo de formacin

de burbujas en la columna o en el detector.

Los recipientes inhertes suelen ser botellas de

vidrios y tubos de tefln provistos de aditamentos
indispensables para eliminar los gases disueltos y
partculas que pudiera tener esta fase.

Bombas
Presin

estable hasta 5000 psi (400 atm)

Flujo libre de pulsaciones.
Amplio rango de flujos (0,1 a 10 ml/min).
Proporcionan caudales estables.
Componentes
qumicamente inertes y
resistentes a la corrosin.
Deben
estar construidas con material
resistente a la presin y agresiones qumicas.

Sistema de inyeccin
Se

emplean vlvulas de volumen (loop)

constante.
Pueden
Se

ser manuales o automticas

debe evitar la entrada de burbujas en el

sistema de inyeccin.

Hay dos tipos de inyectores:

Septum
Bucle

de muestreo

Precolumnas
Se

trata de una pequea columna (0,5 3 cm)

colocada entre el inyector y la columna, ayuda a
prevenir la entrada de suciedad, procedente de la
muestra o del eluyente, en la columna analtica.
Sirve para saturar la fase mvil con la fase
estacionaria y as minimizar las perdidas de esta
en la columna analtica.
Va a permitir alargar la duracin de las columnas.

Columna
Al

disminuir el tamao del relleno aumenta la

eficiencia pero tambin la presin de trabajo.
Las columnas constan de:
- Cuerpo normalmente de acero
inoxidable.
- Relleno micropartculas

Detector
La

eficiencia de un detector cromatografico

depende de la relacin entre la cantidad fsica
medida y la composicin del efluente, as
como tambin, as como tambin las
caractersticas de la seal transferida.

Los tipos de detectores en HPLC se

clasifican en:
Detectores

basados en una propiedad de la

fase mvil ej. Detector de ndice de
refraccin.
Detectores basados en una propiedad de la
sustancia a separar ej. Detector de
fluorescencia, detector ultravioleta.

Aplicaciones de la
Cromatografa HPLC
La

Cromatografa HPLC tiene numerosas

aplicaciones como:
Compuestos inicos: como aminocidos,
sales orgnicas, cidos orgnicos, etc.
Compuestos de alto peso molecular: como
polmeros, hidrocarburos
polinucleares,
productos naturales, etc.
Compuestos no voltiles: como vitaminas,
pesticidas, esteroides, drogas y una parte muy
grande de otros productos farmacuticos.

Conclusin

Es una tcnica de separacin ampliamente

utilizadas en los laboratorios para la
identificacin de los componentes de la
muestra.

Tiene una diversidad de aplicaciones tanto

en
compuestos
orgnicos
como
inorgnicos, posee altas sensibilidades ya
que puede detectar concentraciones bajas.

 Puede

determinar
altos
pesos
moleculares e iones metlicos, se aplica
a varias sustancias de inters ( salud,
industria, medio ambiente).

Requiere

instrumentacin costosa y
para su utilizacin se tiene que tener
alta experiencia y conocimiento para su
funcionamiento como tambin elevados
costos de operacin

Bibliografa
Principios

de anlisis instrumental 5a
edicin (skoog, holler, nieman).
http://www.slideshare.net/jmramos1978/
cromatografa-lquida-de-alta-presin
FUNDAMENTOS
DEL
ANALISIS
CROMATOGRAFICO Cromatografa Lquida
de Alta Resolucin.