HONADOMANI

SAN BARTOLOME

FUNDAMENTO EN COLORACIN
PAPANICOLAU-USOS

COLORACIN DE PAPANICOLAOU
Creada por George Papanicolaou.
En 1941 publica una tcnica de
tinciones: Permite correlacionar
cambios citolgicos vaginales
con el ciclo menstrual de las
mujeres y con el diagnstico de
casos asintomticos de
neoplasia intrauterina.

COLORACIN DE PAPANICOLAOU
Se denomina CITOLOGIA
CERVICO VAGINAL:Estudian
las Clulas Epiteliales de la
Pared Vaginal, Exocervix y
Endocervix.
Mx obtenida con el
instrumental adecuado:
Espculo y Pipeta de Ayre, la
cual garantiza un muestra de las
3 zonas involucradas.

COLORACIN DE PAPANICOLAOU
SISTEMA BETHESDA Ciudad
de Bethesda Maryland (USA)
donde desde 1988 hasta el 2001,
se reunieron un grupo de
profesionales de la salud con:
Objetivo establecer un sistema
de nomenclaturas y terminologas
uniformes para informar
resultados Citolgicos Crvico
Vaginales.

INFORME CITOLGICO CERVICO VAGINAL

Coloracin de Papanicolaou
SISTEMA BETHESDA
1.- CALIDAD DE LA MUESTRA
Inadecuada para Evaluacin:
Adecuada para Evaluacin:
Con Clulas Endocervicales
Sin Clulas Endocervicales
Con
Clulas MetaplsicasSin Clulas Metaplsicas
2.- CAMBIOS BENIGNOS CAUSADOS POR INFECCIN:
Ninguno
Cndida
Cocobacilos
Herpes Simple
Gardnerella
Actinomises
Trichomona vaginalis
Otros
3.- CAMBIOS ASOCIADOS A:
Reparativos

Atrofia
Reactivos

Inflamacin:

Leve

Ninguno
Radiacin
Moderada

DIU
Severa

4.-ANORMALIDADES CELULARES EPITELIALES:

Ninguno: Negativo para Lesin Intraepitelial y/o Neoplasia Maligna
Clulas Escamosas Atpicas
( ASCUS )
Lesin Escamosa Intraepitelial de Bajo Grado: Infeccin por PVH
Lesin Escamosa Intraepitelial
de Bajo Grado: Displasia Leve ( NIC I )
Lesin
Escamosa Intraepitelial de Alto Grado: Displasia Moderada( NIC II )
Lesin Escamosa Intraepitelial de Alto Grado:
Displasia Severa ( NIC III )
Lesin
Escamosa Intraepitelial de Alto Grado: Carcinoma In Situ
Carcinoma Epidermoide
Clulas Glandulares Atpicas
( AGUS )
Adenocarcinoma
5.-OTROS:

COLORACIN DE PAPANICOLAOU
Ncleo: Ntido, con buena
definicin del detalle,
pudiendo evidenciarse el
patrn de cromatina.
Citoplasma: De aspecto
transparente, que permite
apreciar los grados de
diferenciacin celular y
actividad metablica.

COLORACIN DE PAPANICOLAOU
Comprende 17 pasos agrupados en 5 etapas (hidratacin, tincin
nuclear, tincin citoplasmtica, deshidratacin, aclaramiento).
Uso de 3 colorantes (Hematoxilina de Harris, Orange G y EA-50).
1.-Agua Corriente
2.-Hematoxilina de Harris
3.-Agua Corriente
4.-Agua Acida 1%
5.-Agua Corriente
6.-Agua Amoniacal
7.-Agua Corriente
8.-Alcohol Etlico de 96%
9.-Orange G
3
Alcohol Etlico de 96% 30
=> Tincin
2
=> Tincin
96%
30
=> Deshidratacin
30
=> Deshidratacin
30
=> Deshidratacin
30
=> Deshidratacin
2
=> Aclaramiento
1
=> Aclaramiento

5
=> Hidratacin
7
=> Tincin Nuclear
=> Colorante
2
=> Tincin Nuclear
2
=> Tincin Nuclear
2
=> Tincin Nuclear
10
=> Tincin Nuclear
2
=> Tincin Nuclear
1
=> Tincin Citoplasmtica
=> Tincin Citoplasmtica
=> Colorante
10.Citoplasmtica
11.-EA50
Citoplasmtica
=> Colorante
12.-Alcohol Etlico de
13.-Alcohol Etlico de 96%
14.-Alcohol Absoluto
15.-Alcohol Absoluto
16.-Xilol
17.-Xilol

FIJACIN EN ALCOHOL ETER

o Fijador Qumico por Deshidratacin .
o Elimina el agua intracelular, desnaturalizando las protenas e inactivando las
enzimas autodigestivas evitando la Autlisis,.

CITOPLASMA

H2 O

H2O
H2O
H2O

NUCLEO

H2 O

H2 O
H2 O
H2O

H2O
H2 O

H2O

H2 O

Membrana Celular Membrana Celular Membrana Celular

o Es un bactericida:Eliminando las bacterias e impidiendo la Putrefaccin.

Alcohol Eter

AGUA CORRIENTE

CITOPLASMA
OH

NUCLEO

OH

OH
OH

OH
OH

OH
OH

OH
OH

OH
OH

OH
OH

OH

OH

OH
OH

OH

OH

Membrana Celular Membrana Celular Membrana Celular

Elimina el Fijador y por arrastre fsico los elementos que no son

parte de la estructura celular y tisular. Finalmente se obtendr
una clula fijada y llena de molculas de agua para que a travs de
esta puedan desplazarse diversos colorantes.

Agua
Alcohol
Corriente
Eter
OH
OH

OH
OH

OH
OH

OH

OH

OH

OH

OH
OH

OH
OH

OH

OH
OH

OH

OH
OH

OH

OH

OH

OH

OH
OH

OH

OH

HEMATOXILINA DE HARRIS

NUCLEO

CITOPLASMA

Membrana Celular Membrana Celular Membrana Celular

Las molculas colorantes de Hematoxilina de Harris penetrarn en

la clula y se dirigirn al ncleo de la misma por un proceso Fsico
Qumico del Tipo Atraccin Electrosttica.
Esta unin se debe gracias a los grupos Fosforitos cidos (-) del
ncleo que le dan carga global Negativa a la estructura celular
tindolo de un color violeta.

Hematoxilina de Harris

AGUA CORRIENTE
Eliminar por arrastre fsico el exceso de colorante intra y
extracelular que no este ligado al ncleo.

NUCLEO

CITOPLASMA

Membrana Celular Membrana Celular Membrana Celular

Solo permanecern unidos al ncleo las molculas colorantes

unidas por diferencia de cargas elctricas con este.

Hematoxilina
Agua Corriente
de Harris

AGUA ACIDA 1%
Es una dilucin del cido Clorhdrico al 1%, por lo que
presenta una carga fuertemente cida (-).

NUCLEO

CITOPLASMA

Membrana Celular Membrana Celular Membrana Celular

Las Cargas Negativas ingresarn a la clula y se unirn por

diferencia de carga con las Cargas Positivas, en este caso, con
los Grupos Auxocromos (+) de las molculas de Hematoxilina.
Agua
AguaCorriente
Acida

AGUA ACIDA 1%

NUCLEO

CITOPLASMA

Membrana Celular Membrana Celular Membrana Celular

Esta unin le darn carga global negativa a algunas molculas

de Hematoxilina separndolas del ncleo, logrando la
decoloracin parcial evitando la sobresaturacin de colorante
en el ncleo que podran impedir la observacin de finos
detalles nucleares.
Agua Acida

AGUA CORRIENTE
Eliminar el exceso de Agua cida (-) logrando que las molculas
de Hematoxilina intracelulares separadas sean eliminadas por
arrastre fsico del interior de la clulla.

NUCLEO

CITOPLASMA

Membrana Celular Membrana Celular Membrana Celular

Solo permanecern al interior de la clula las molculas de

Hematoxilina que se encuentren unidas electrostticamente al
ncleo celular.
Agua
Agua
Corriente
Acida

AGUA AMONIACAL
Es una solucin alcalina (pH: 8) y los Grupos Auxocromos de las molculas de
Hematoxilina son Indicadores de pH.
Adopta tonalidad rojiza con pH<3
Tonalidad azulada con pH >3,

NUCLEO

CITOPLASMA

Membrana Celular Membrana Celular Membrana Celular

Al encontrarse en un pH de 8 el ncleo adopta un color fuertemente azulado, por este

motivo a este paso se le conoce tambin como Azulamiento.
Agua
Agua Amoniacal
Corriente

AGUA CORRIENTE
Eliminar el exceso de Agua Amoniacal evitando que las
molculas de Hematoxilina unidas al ncleo sigan virando su
color.

NUCLEO

CITOPLASMA

Membrana Celular Membrana Celular Membrana Celular

La tincin nuclear de la clula habr terminado con molculas

de Hematoxilina unidas fuertemente al ncleo y citoplasma
con abundantes molculas de agua.
Agua
Agua Amoniacal
Corriente

ALCOHOL ETLICO 96%

CITOPLASMA

NUCLEO

OH

OH

OH

OH

OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH

Membrana Celular Membrana Celular Membrana Celular

El Alcohol Etlico al 96% reemplazar el agua extracelular e

intracelular debido a que los colorantes posteriores son ms
solubles en alcohol que en agua.

Alcohol
Agua Etlico
Corriente
al 96%

OH

OH

OH

OH

OH

OH
OH

OH

OH
OH

OH

OH
OH

OH

OH
OH

OH

OH

OH

OH

OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH

ORANGE G
Es un colorante monocromtico penetra rpidamente en el citoplasma
celular y tie especficamente la Queratina de un color naranja
brillante.

CITOPLASMA
Orange G

Queratina
OH

NUCLEO

Orange G

Orange G

OH

Orange G

OH
OH

Queratina
OH

Queratina
OHOrange G

Orange G

OrangeOH
G

OH
OH
Queratina
OH

OH
Queratina

Orange G

OH

Membrana Celular Membrana Celular Membrana Celular

La Queratina normalmente no se encuentra en el citoplasma de las

clulas normales pero aparece en las clulas epiteliales crvico
vaginales en Carcinomas Queratinizados
Alcohol
Orange
Etlico
G al 96%
Orange G

OH

OH

OH
OH

Orange G

OH

OH
Orange G

OH

Orange G

OH
OH

OH

OH
OH

OH

Orange G

OH
Orange G

Orange G

Orange G

OH
OH

OH

OH
OH
Orange G

OH
Orange G

OH

Orange G
OH

OH
OH
OH
Orange G

OH

OH
OH

ALCOHOL ETLICO 96%

El Alcohol Etlico de 96% al ser soluble en Orange G eliminar
el exceso de colorante extracelular e intracelular no ligado a
la Queratina.

CITOPLASMA
Orange G

Queratina
OH

NUCLEO

Orange G

Orange G

OH

Orange G

OH
OH

Queratina
OH

Queratina
OHOrange G

Orange G

OrangeOH
G

OH
OH
Queratina
OH

OH
Queratina

Orange G

OH

Membrana Celular Membrana Celular Membrana Celular

Solo permanecern en el interior de la clula, las fibras de

Queratina (si las existiera) teidas por el Orange G.
Alcohol
Orange
Etlico
G al 96%
Orange G

OH

OH

OH
OH

Orange G

OH

OH
Orange G

OH

Orange G

OH
OH

OH

OH
OH

OH

Orange G

OH
Orange G

Orange G

Orange G

OH
OH

OH

OH
OH
Orange G

OH
Orange G

OH

Orange G
OH

OH
OH
OH
Orange G

OH

OH
OH

EA-50
La tincin citoplasmtica.
EA50 colorante Policromtico soluble en alcohol

CITOPLASMA

NUCLEO

OH

OH

OH

OH

OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH

Membrana Celular Membrana Celular Membrana Celular

Comprende 3 colorantes: Eosina + Light Green + Pardo de Bismark

Alcohol Etlico
EA-50 al 96%

OH

OH

OH

OH

OH

OH
OH

OH

OH
OH

OH

OH
OH

OH

OH
OH

OH

OH

OH

OH

OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH

EA-50

NUCLEO

CITOPLASMA

Membrana Celular Membrana Celular Membrana Celular

La Eosina teir de rosado el citoplasma de las Clulas Maduras:

Superficiales, al unirse electrostticamente a las protenas
citoplasmticas exclusivas de clulas Metabolicamente Inactivas

EA-50

EA-50

NUCLEO

CITOPLASMA

Membrana Celular Membrana Celular Membrana Celular

El Light Green teir de verde azulado el citoplasma de las Clulas

Intermedias y Parabasales, al unirse electrostticamente a las protenas
citoplasmticas exclusivas de clulas Metabolicamente Activas

EA-50

EA-50

NUCLEO

CITOPLASMA

Membrana Celular Membrana Celular Membrana Celular

El Pardo de Bismark teir de pardo amarillo las Mucinas (compuestos de

protenas y azucares) ubicadas en el citoplasma de las Clulas Cancerosas
propias de Adenocarcinomas.

EA-50

ALCOHOL ETLICO 96%

CITOPLASMA

NUCLEO

OH

OH

OH

OH

OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH

Membrana Celular Membrana Celular Membrana Celular

Los componentes del EA-50 (Eosina Light Green Pardo

Bismark) al ser solubles en Alcohol Etlico, y si no estn
ligados a ningn componente proteico citoplasmtico sern
desplazados de la clula.

Alcohol Etlico
EA-50 al 96%

OH

OH

OH

OH

OH

OH
OH

OH

OH
OH

OH

OH
OH

OH

OH
OH

OH

OH

OH

OH

OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH

ALCOHOL ETLICO 96%

NUCLEO

CITOPLASMA

Membrana Celular Membrana Celular Membrana Celular

En caso de tratarse de una Clula Superficial:

Metabolicamente Inactiva en el citoplasma solo se
encontrarn protenas inactivas que sern teidas por la
Eosina adoptando el citoplasma una tonalidad rosada,
culminando en este paso la coloracin nuclear y citoplasmtica
EA-50

ALCOHOL ETLICO 96%

NUCLEO

CITOPLASMA

Membrana Celular Membrana Celular Membrana Celular

Un segundo bao de alcohol etlico asegura la eliminacin

completa del colorante

Alcohol Etlico al 96%

OH

OH

OH

OH

OH

OH
OH

OH

OH
OH

OH

OH
OH

OH

OH
OH

OH

OH

OH

OH

OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH

ALCOHOL ABSOLUTO

NUCLEO

CITOPLASMA

Membrana Celular Membrana Celular Membrana Celular

Un primer bao de Alcohol Absoluto busca eliminar el agua

intra y extracelular, ya que los posteriores procesos de
Aclaramiento y Montaje emplean insumos que nos son
miscibles en Agua.

Alcohol
Alcohol
Etlico
Absoluto
al 96%

OH

OH

OH

OH

OH

OH
OH

OH

OH
OH

OH

OH
OH

OH

OH
OH

OH

OH

OH

OH

OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH

ALCOHOL ABSOLUTO

NUCLEO

CITOPLASMA

Membrana Celular Membrana Celular Membrana Celular

Un segundo bao de Alcohol Absoluto asegura la eliminacin

completa del Agua.

Alcohol Absoluto

OH

OH

OH

OH

OH

OH
OH

OH

OH
OH

OH

OH
OH

OH

OH
OH

OH

OH

OH

OH

OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH

XILOL
Un primer bao de Xilol al ser misicble con el alcohol, busca su eliminacin
de los espacios intra y extracelulares, ya que el posterior proceso de
Montaje emplean sustancias que nos son miscibles en Alcohol.

NUCLEO

CITOPLASMA

Membrana Celular Membrana Celular Membrana Celular

El Xilol cambia el ndice de Refraccin de la Clula transparentndola y

permitiendo una mejor observacin de detalles celulares.

AlcoholXilol
Absoluto

OH

OH

OH

OH

OH

OH
OH

OH

OH
OH

OH

OH
OH

OH

OH
OH

OH

OH

OH

OH

OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH

XILOL

NUCLEO

CITOPLASMA

Membrana Celular Membrana Celular Membrana Celular

Un segundo bao de Xilol asegura la completa eliminacin del

alcohol y culmina con el proceso de transparentar las
estructuras celulares.

Xilol

MONTAJE
Impide la resequedad y
desintegracin de las clulas,
preservando la lamina citolgica para
su archivamiento posterior a la
lectura microscpica.
Consiste en la unin de la lamina
portaobjeto con la laminilla
cubreobjeto mediante una resina lo
ms transparente posible y cuyo
ndice de Refraccin sea semejante
a la del vidrio.

GRACIAS