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PROTENAS

Protenas (protos em grego primeiro) apresentam


uma classe abundante e diversa de biomolculas, que
constituem mais que 50% de peso seco das clulas.
Grande diversidade e abundncia reflete o papel
central das Protenas na estrutura e funes das
clulas.
Existem muitas espcies diferentes de Protenas,
cada uma especializada para uma funo biolgica
diversa.
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Do ponto de vista qumica, as Protenas so


polmeros lineares dos aminocidos.
Nas molculas proticas os resduos de aminocidos
ligam-se covalentemente, formando longos polmeros.
So eles unidos em um arranjo cabea-cauda,
mediante ligaes , denominadas ligaes peptdicas,
as quais surgem pela eliminao dos elementos da
gua do grupo carboxlico de um aminocido e
de um -aminogrupo de aminocido subsequnte.

Tais polmeros, denominados cadeias


polipeptdicas podem conter centenas resduos
de aminocidos.
Assim, os -Aminocidos podem sofrer
a policondensao enzimtica formando as
cadeias peptdicas.

H2 N - CH - COOH

H 2 N - CH -COOH

R1

+ H 2 N-CH - COOH

R2

R3

H N - CH - C - NH - CH - C - NH - CH - C - OH
2
R1

Resduo terminal N

R2

R3

Resduo terminal C

Uma Tripeptda
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Oligopeptidas possuem at 20 resduos de


aminocidos.
Polipeptidas tm mais de 20 resduos e
no tm conformao definida.
Protenas tm 50-2500 resduos e estrutura
tridimensional.
De acordo com sua composio
Protenas so divididas em 2 classes principais:
simples e conjugadas.

As Protenas simples liberam por


hidrlise somente aminocidos e nenhum
outro produto orgnico.
As Protenas conjugadas liberam por
hidrlise no somente aminocidos,
mas tambm outros componentes
orgnicos e inorgnicos.
A poro de uma protena conjugada
no formada por aminocidos
chamada de grupo prosttico.
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Classificao das Protenas conjugadas


Classe

Componenete do grupo
prosttico

Nucleoprotenas

RNA

Lipoprotenas

Fosfolpidos, Colesterol

Glicoprotenas

Galactose, Manose

Fosfoprotenas

H3PO4, Serina, Treonina

Cromoprotenas (Hemeprotenas):
Hemoglobina
Citocromos
Enzimas heminais (Catalases, Peroxidases)
Cloroplastinas

Flavoprotenas
Metaloprotenas:
Ferroprotenas
Alcooldesidrogenase
Xantina-oxidase
Citocromo-oxidase

Porfirina
Ferroporfirina
--/---/---/-Clorofila + Mg

Flavina-Adenina-dinucletido
(FAD)
Fe(OH)3
Zn
Mo + Fe
Fe + Cu
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FUNES DAS PROTENAS


1. CATLISE ENZIMTICA
Quase todas as reaces qumicas em sistemas
biolgicos so catalizadas por protenas especficas
chamadas enzimas.
Enzimas aumentam a velocidade das reaces de
pelo menos um milho vezes
2. TRANSPORTE E ARMAZENAMENTO
Muitas molculas pequenas e ies so transportadas
por protenas especficas. Exemplo: Hemoglobina
3. MOVIMENTO COORDENADO
Protenas so o principal componente do msculo.
Contraco muscular levada a efeito pelo movimento
deslizante de dois tipos de filamentos proticos.
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4. SUSTENO MECNICA
Alta fora de tenso da pele e do osso devido
a presena de Colagno, uma protena fibrosa.
5. PROTECO IMUNITRIA
Os anticorpos so protenas altamente
especficas que reconhecem e se combinam
com substncias estranhas tais como vrus,
bactrias e clulas de outros organismos.
Protenas exercem um papel vital na distino
entre prprio e no prprio.
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6. GERAO E TRANSMIO DE
IMPULSOS NERVOSOS
Exemplo. Rodopsina protena sensvel
luz nos
bastonetos da retina.
7. CONTROLE DE CRESCIMENTO E
DA DIFERENCIAO
A expresso sequencial controlada da
informao gentica essencial para
crescimento e diferenciao ordenada
das clulas
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ARQUITETURA DAS MOLCULAS PROTECAS


Estrutura das molculas proticas e suas relaes
com as funes biolgicas so problemas centrais
na Bioqumica.

Formas das molculas proticas


Protenas podem ser agrupadas em primeira
aproximao em 3 classes principais de acordo
com sua forma tridimensional e solubilidade:
Protenas fibrosas
Protenas globulares
Protenas de membrana
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Protenas fibrosas so constituidas de cadeias


polipeptdicas dispostas paralelamente ao longo de
um nico eixo, formando longas fibras ou lminas.
So os elementos estruturais bsicos do tecido
conjuntivo dos animais superiores, insolveis
em gua e solues salinas diludas.
Exemplos: Colagno (tendes, matriz ssea);
Queratina (cabelos, unhas, penas, pele);
Miosina (msculos).

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Protenas globulares so formadas das cadeias


polipeptdicas que se dobram firmemente adquirindo
as formas esfricas ou globulares compactas.
So solveis em sistemas aquosas; geralmente
apresentam uma funo dinmica em clulas
(enzimas, hormonas, anticorpos).
Protenas de membrana encontram-se em
associao com vrios sistemas de membranas
celulares; sua composio contem o teor elevado
dos aminocidos hidroflicos.
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As forcas envolvidas na estrutura das protenas so


seguintes:
-ligaes covalentes ( -NH-CO- , - S- S - )
-ligaes por pontes de hidrognio
-ligaes inicas
-interaces hidrofbicas
- interaces electrostticas.
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Estrutura primria (I) sequncia dos aminocidos


na cadeia polipeptdica da proteina sem que se
considere o arranjo espacial.
Exemplo: ..... Gli - Tir- Ala Val Cis Arg Met
Ser Fen -.....
Estrutura (I) inclui tambm a localisao dos
pontes S S- se tais tm lugar .
Deste modo estrutura (I) pode ser
definida como descrio total das ligaes
covalentes na protena.
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Determinao da sequncia dos


aminocidos apresenta o primeiro passo
no estudo de uma protena e
consiste em realizao hidrlises
especficos tais como reagentes qumicos
(BrCN, NH2OH) e enzimas (Tripsina,
Quimotripsina).

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Reagentes para hidrlise especfica


Reagente
Ciso qumica
BrCN
NH2OH
Ciso enzimtica
Tripsina
Quimotripsina

Stio de ciso
Extremidade carboxilo da Metionina
Ligao Asparagina - Glicina
Extremidade carboxilo de Lisina - Argenina
Extremidade carboxilo de aminocidos
aromticos e outro no polares

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Estrutura secundria (II)


arranjo espacial local dos tomos da cadeia
principal, sem considerar a conformao das suas
cadeias laterais ou suas relaes com outros
segmentos.
Consiste em regularidades em conformaes locais,
mantendas por ligaes de hidrognio entre o grupo
amida NH e C=O .

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Existem 2 tipos de estrutura (II):


as hlices e as folhas preguadas.
Nas hlices ligaes de H so formadas entre resdos
da mesma cadeia; nas folhas preguadas entre
cadeias polipeptdicas diferentes.
Hlice direita tem smbolo 3,613, onde 3,6
nmero de resduos de A por espira, 13 nmero de
tomos no cclo formado por duas ligaes de H.
Conformao da protena e determinada por
sequncia dos A.
Glu, Ala, Leu hlices; Val, Isoleucina folhas .
Pro, Gli, Asp causam -reverso
(cadeia polipeptdica dobra 1800).
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Estrutura terciria (III)


Corresponde conformao tridimensional das
cadeias polipeptdicas. condicionada por
interaces estricas dos resduos
de A muito distanciadas uns dos outras.
As foras envolvidas na estabilizao
da estrutura (III) so:
- ligaes covalentes - S- S - ligaes por pontes de hidrognio
- ligaes inicas
- interaces hidrofbicas
- interaces electrostticas.
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Estrutura terciria (III) tem importncia


fundamental para actividade biolgica
das Protenas.
Ponte de enxofre S-S- forma-se a partir
de 2 resduos de Cisteina
e desempenha um papel primordial na
formao e estabilizao das Protenas
com estrutura (III).

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Estrutura (IV)
arranjo das subunidades polipeptdicas no
espao e conjunto dos respectivos contactos
e interaces inter-subunitrias.
Caracteriza as protenas com 2 e mais cadeias
polipeptdicas (subunidades).
Corresponde a associaes reversveis
(por ligaes no-covalentes) entre cadeias
polipeptdicas idnticas e diferentes.

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Estrutura IV caracteriza o nvel superior de


complexidade estrutural das Protenas

Cadeias tm
141 resduos
Esquema simplificado
de uma molcula de Hemoglobina

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HEMOGLOBINA E MIOGLOBINA
So protenas- transportadores do O2- molecular.
Possuem a homologia da sequncia dos aminocidos
das cadeias polipeptdicas.
Hemoglobina (Hb) foi a primeira protena para
qual as estruturas completas III e IV tornaram-se
conhecidas.
Hb encontra-se nos eritrcitos;
Hb transportador de O2, CO2 e H+ no sangue.
Hb contm 2 cadeias (141 resduos) e 2 cadeias
(146 resduos, encontrando-se ligado entre si).
Cada cadeia possui 1 heme.
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Hb A principal do organismo adulto tem


frmula 22.
Molcula de Hb quase esfera com diametro 55 A0.
4 cadeias polipeptdicas formam um tetraedro.
Cada subunidade tem 1 heme, disposto na parte
exterior da molcula.
Heme um grupamento no peptdico (grupo
prosttico). constituido de uma parte orgnica
e tomo de Fe.
Parte orgnica formada de 4 aneis pirrlicos
ligados entre si por pontes metlicos.
Parte orgnica denominada Protoporfirina.
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tomo de Fe pode existir em forma:


(+2) Ferrohemoglobina
(+3) Ferrihemoglobina (Methemoglobina).
Somente Ferrohemoglobina capaz de ligar O 2
Mioglobina (Mb) encontra-se nos msculos,
desempenha funo de armazenamento de O 2.
Tem 1 cadeia polipeptdica com 153 resduos,
dos quais 121 em hlices direitas, com 1 heme
responsvel pelas oxidaes e desoxidaes.
Molecula de Mb extremanente compacta,
apresenta-se como um esferide achatado de
dimenses 45x35x25 A0

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Assim, molcula de Hemoglobina mais complicada


que molcula de Mioglobina.
1. Hb alm de O2 transporte H+ e CO2.
2. Ligao do O2 ou afinidade de Hb para O2
se regula por componentes especficos do meio:
H+, CO2 e compostos fosfoorgnicos (DFG).
3. Ligao do O2 por Hb tem caracter cooperativo
ligao de uma molcula O2 faculita ligao dos
seguintes molculas.

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Curva da funo saturao do Hb por O 2 em


relao da presso parcial do O2 sigmoidal,
entretanto curva da mesma funo de Mb
hiperblica.

MbO2
Hb(O2)4

Mb + O2
Hb + 4O2

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Efeito de Bohr: aumento do teor de CO2 e [H+] nos


capillares nos tecidos com alto metabolismo favorece
libertao de O2 do Hb(O2)4 (reduz afinidade de Hb ).
Nos capillares de pulmes tem lugar efeito oposto
(J.Haldane). Alta concentrao do O2 favorece
eliminao de H+ e CO2 do HbH(CO2).
+

Hb(O2)4 + H + CO2

msculos

HbH(CO2) + O2

pulmes

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2,3-Difosfoglicerato (DFG) diminui afinidade


de Hb pare O2 em 26 vezes.
P-O-CH2-CH(-OP)-COODFG (P = PO32- )
Importncia fisiolgica do DFG
Sem DFG, Hb ao passer atravs dos capillares
onde presso de O2 ~26 tor (mm Hg) ,
libertaria muito pouco de O2.

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Importncia clnica
Sangue conservado no meio H+ - Citrato-Dextrose
caracteriza-se por diminuio forte do teor de DFG ,
assim, afinidade do sangue aumenta.
No caso de transfuso da grande quantidade
do sangue com alta afinidade pode surgir
perigo do abastacimento fraco dos tecidos.
impossvel aumentar teor de DFG por adio
(DFG no atravessa membrana celular), mas
possvel prever diminuio dpo teor de DFG
no sangue conservado por adio do reagente
especfico (Inosina).
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Hemoglobinas anormais
HbA ( 22) principal do organismo adulto.
Hemoglobina S (Hb falciforme) anormal.
Os resduos de c. Glutmico na posio
6 das cadeias esto substitudos pelo Valina.
Doena chamada Anemia falciforme
caracterisa-se pela forma de foice
dos eritrcitos em presses baixas de O2.
[ Eritrcitos normais conservam sua forma discide
aps a desoxidao].
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Anemia falciforme (AF) uma doena


hemoltica molecular hereditria.
AF um primeiro exemplo da doenamolecular.
Frequncia do gene falciforme em algumas
regies de frica atinge ~40% !!!
Foi esclarecido que portadores deste defeito
hemoltico tm uma resistncia alta Malria.
Isto pode ser explicado pela seleco gentica.

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Deteco das Hemoglobinas anormais


Realiza-se por: Electroforese e Cromatografia Lquida de
Alta Resoluo (HPLC) das Hb.
Electroforese das Hemoglobinas
1 sem doena (normal)
2 portador de sintomas de anemia falciforme
3 doente de anemia falciforme

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DESNATURAO DAS PROTENAS


A maioria das Protenas pode manter sua a
ctividade biolgica somente em uma faixa muito
limitada de temperatura e pH.
Desnaturao das Protenas e um fenmeno que se
caracterize pela perturbao das estruturas II, III, IV
que conduz a perda da bioactividade.
Agentes de desnaturao alm de T elevada e pH so:
cidos e bases
solventes orgnicos
luz ultravioleta e X-raios
agentes desnaturantes especficos (Ureia, c.
Perfrmico, Guanidina).
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Desnaturao acompanhada frequentemente da


coagulao das macromolculas proticas.
Exemplo formao de um coagulo branco
insolvel em gua quando a clara de ovo fervida.
Perturbao das estruturas II, III, IV durante
desnaturao consiste em desenrolamento de uma
estrutura nativa caracteristicamente dobrada da
cadeia polipeptdica das molculas de Protenas
globulares.
Desnaturao pode ser reversvel e irreversvel.
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Desnaturao reversvel ocorre sob aces fracas


quando so tocadas s extremidades das cadeias e
protenas retornam sua forma nativa quando cessa
aco desnaturante.
Desnaturao irreversvel ocorre:
- a T elevadas
- aco dos cidos e bases fortes.
- lcoois, sais de metais pesados.
Essas aces causam a perturbao das
ligaes por pontes de hidrognio e os
pontos salinos nas estruturas das Protinas.
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II. Mtodos de separao baseados nas diferenas


de solubilidade
Protenas so os polielectrlitos de peso
molecular muito alto, seu comportamento
determinado por uma composio caracterstica
de aminocidos.
Solubilidade de P. = f ( pH, solvente, temperatura,
fora inica da soluo ).
Protenas globulares so caracterizadas por um
mnimo de solubilidade em funo de pH de
suluo que corresponde a seu
pH isoelctrico pHi.
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Neste ponto a molcula no apresenta carga elctrica


efectiva e incapaz de se deslocar num campo
elctrico, repulso electrosttica entre as molculas
proticas no existe e elas sofrem a coalescncia e
precipitao.
Porm, em valores de pH acima e abaixo do pH i as
molculas proticas tm as cargas efectivas.

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Quando o pH de uma mistura de protenas est


ajustado para pHi de um de seus componentes, este
componente se precipita, deixando em soluo as
protenas cujo pHi se situa acima ou abaixo daquele
pH. A protena precipitada permanece em sua
conformao nativa e pode ser redissolvida.
Pontos isoelctricos (pHi) de algumas protenas:
Pepsina - ~1,0
Mioglobina 7,0
Albumina de ovo 4,6
Ribonuclease 9,6
Hemoglobina
6,8
Lisozima
11,0
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Solubilizao e precipitao das protenas por


salificao.
Salting-in e salting-out.
Solubilidade de muitas protenas globulares aumenta
na presena dos sais neutros (MgCl2 , (NH4)2SO4 )
em concentraes reduzidas.
O fenomeno chamado solubilizao por salificao
ou salting-in.
Os efeitos da solubilizao na salificao so
condicionados por alteraes na tendncia
ionizao dos grupos laterais da protena.
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Por outro lado , medida que a fora inica ( )


aumenta, a solubilidade se reduz gradativamente.
Se suficientemente elevada, uma protena pode
ser precipitada quase completamente.
Tal efeito chamado precipitao por salificao ou
salting-out.
O mecanismo deste fenmeno complicado.
Os precipitados proticos resultantes da precipitao
salting-out mantm sua conformao nativa e podem
ser dissolvidos novamente, sem desnaturao.
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III. Mtodos de electromigrao (electroforticos)


Separao electofortica pode ser realizada
em coluna ou em camada fina.
Protenas colocadas num campo elctrico sofrem
migrao (excepto no ponto isoelctrico), portanto,
podem ser fraccionadas.
Em electroforse so usados como supporte:
papel, acetato de celulose, gel de amido, gel de
poliacrilamoda, gel de agarose.

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Fraccionamento das protenas a pH 8,6.


A protena mais cida (Albumina, pHi = 4,6) que se migra mais
rapidamente a pH bsico.
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