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Apoptosis
20000
Apoptosis
18000
16000
14000
12000
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8000
6000
4000
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Ao de publicacin
Apoptosis fisiolgica
Defecto
Autoinmunidad
Cncer
Exceso
SIDA
Alzheimer
Apoptosis y patologa
Defecto de apoptosis
Neoplasia
linfomas
B-CLL
Enfermedad autoinmunne
LES
AR
Infeccin citoprotectora y
desarrollo de tumores
EBV
Exceso de apoptosis
Infeccin por HIV
Daos por respuesta inmune
Hepatitis virales
Diabetes mellitus tipo 2
E. hematolgica
Anemia aplsica,
Sndrome mielodisplsicos,
Inmunodeficiencia
hipergammaglobulinemia M
sndromes neurodegenerativos
Alzheimer
Parkinson
NDICE
1. Fases y caractersticas de la apoptosis
2. Apoptosis y filogenia
3. La maquinaria de la muerte celular en humanos
3.1. Caspasas
3.2. Sustratos de caspasas
3.3. Inhibidores de caspasas
3.4. Vas de induccin de apoptosis
3.4.1. Va extrnseca o de los receptores de muerte
3.4.2. Va intrnseca o mitocondrial
4. Fisiopatologa de la apoptosis
4.1. Cncer
4.2. Infeccin por HIV
4.3. Enfermedades autoinmunes
4.4. Miscelneas
1) FASES Y
CARACTERSTICAS
DE LA APOPTOSIS
Fases de la apoptosis
2. Ejecucin
1. Decisin
Activacin
de receptores
Desequilibrio
entre factores
inductores e
inhibidores
Temprana:
Activacin
de proteasas y
endonucleasas
Intermedia:
Fragmentacin DNA
Tarda:
Emisin de
cuerpos apoptticos
3. Fagocitosis
4. Degradacin y
presentacin
antgenos
Deteccin
de fosfatidil
serina (PS)
Evita liberacin de
componentes
intracelulares
inflamacin TGF
Diferencias entre
apoptosis y necrosis.
Mecanismo
Necrosis
(Oncosis)
Apoptosis
Programada genticamente
Accidental.
Tamao celular
Disminuye
aumenta
Membrana.
Se mantiene
Se rompe
Orgnulos.
Se preservan
Se desintegran
Temprana
tarda
Fragmentacin celular
Restos celulares
fragmentos
oligonucleosomales
fragmentos
grandes
Inducen
inflamacin local.
CARACTERSTICAS
DE LA APOPTOSIS
Consecuencias de la apoptosis
La clula se fragmenta en cuerpos apoptticos
con PS en la cara exterior de su membrana
Las clulas fagocticas:
Reconocen PS y fagocitan los cuerpos
apoptticos
Al fagocitarlos producen mediadores antiinflamatorios
Consecuencias de la apoptosis
1. Se impide la liberacin de los contenidos
celulares al espacio extracelular
2. Permite muerte celular sin inflamacin
3. La apoptosis permite la muerte
sin
provocar dao a las
adyacentes
celular
clulas
2) APOPTOSIS Y
FILOGENIA
2. Apoptosis y filogenia
2.1. Caenorhabditis elegans
2.2. Drosophila melanogaster
2.3. Vertebrados
3) MAQUINARIA DE LA MUERTE
CELULAR EN HUMANOS
3.1. CASPASAS
CASPASAS
- Son cistein proteasas especficas de aspartato (caspase)
- Se expresan como proenzimas (zimgenos)
- Presentan 3 dominios:
1. Prodominio terminal
2. Subunidad larga (p20) que contiene el centro activo
3. C-terminal que es la subunidad pequea (p10)
Asp
Prodominio terminal
Subunidad larga (p20)
Asp
ACTIVACIN DE CASPASAS
Asp
Asp
Caspasa
activa
Caspasa
iniciadora
MECANISMOS DE ACTIVACIN DE
CASPASAS
1. Activacin por otra caspasa
2. Activacin inducida por proximidad
3. Asociacin con una subunidad reguladora
Apoptosoma
3.2. SUSTRATOS DE
CASPASAS
SUSTRATOS DE CASPASAS
-
CAD
Caspasa-3
3.3. INHIBIDORES
DE CASPASAS
INHIBIDORES DE CASPASAS
-
INHIBIDORES DE CASPASAS
Frenan la apoptosis por inhibicin, unin y degradacin:
1. Dominio repetido IAP de baculovirus (BIR) por el q el IAP se
une e inhibe a las caspasas. Entre 1-4 dominios BIR.
2. Dominio RING q acta como una ligasa de ubiquitina:
degradacin del IAP y de cualquier caspasa unida a l.
3. Dominio CARD: regulacin directa o indirecta del
procesamiento de las caspasas. c-IAP1 y c-IAP2
INHIBIDORES DE CASPASAS
RING BIR3 BIR2 BIR1
XIAP
c-IAP1
c-IAP2
Eduardo informa
No podemos recuperar la clase del 24 de marzo, el viernes 17 de abril.
Los siguientes alumnos pueden pasar a donar 50 ml de sangre como
voluntariamente se ofrecieron en el departamento el jueves de 9:15 a 9:30:
- Luis Eduardo Guerra
Naim Chourieteh Ranedo
Raul Escribano Avila
Jos Ramn Arevalo Serrano
Jos Mara Hernandez Sabariego
Graziella Alvarez Ruiz
3.4.1. VA EXTRNSECA
- A travs de receptores superficiales: receptores de muerte.
Receptores de la familia de TNFR: CD95, TNFR1, TNFR2. Tb
DR3, TRAIL...
- Requiere trimerizacin para la transduccin de la seal.
- Al receptor activado se le asocia un complejo de protenas:
dominio de sealizacin inductor de muerte (DISC, deathinduced signalling domain)
DISC
1. El adaptador FADD se une a travs de su dominio de muerte
(DD) al dominio de muerte del receptor activado
2. FADD contiene un dominio efector de muerte (DED) que por
homologa atrae procaspasa-8 o FLICE que se activa.
3. Inhibicin debida a protenas con dos dominios DED: protena
inhibidora de FLICE (FLIP, FLICE-inhibitory protein).
CD95L
CD95
DD
Procaspasa-8
DED
FADD
c-FLIP
Caspasa-8
Bid
Caspasa-3
DISC
3.4.1. VA EXTRNSECA
FasL
Fas
MORT/FAAD
caspasa 8
caspasa-7
Bid
Va mitocondrial
caspasa-3
caspasa-6
Deshidratacin
citoplsmica
Externalizacin Formacin Fragmentacin
de cuerpos
de PS
DNA
apoptticos
Condensacin
Cambios apoptticos
cromatina
extranucleares
Hidrlisis Fragmentacin
nuclear
de NuMA
Cambios apoptticos
nucleares
3.4.2. VA INTRNSECA
- La regulacin de la apoptosis en esta va es debida a la familia de
Bcl-2.
- Bcl-2 fue descubierto como un proto-oncogn en el linfoma
folicular de clulas B y es homlogo a ced-9.
- Existen 19 miembros que se dividen en tres grupos.
- Cada miembro posee al menos uno de los cuatro motivos
conservados denominados dominios de homologa con Bcl-2
(BH): BH1-BH4.
FAMILIA DE Bcl-2
1. Grupo I:
- Actividad anti-apopttica
- Bcl-2, Bcl-XL, Bcl-w...
Dao genotxico
Bcl-2
p53
Bax
Apaf-1
citocromo c
Procaspasa-9
Smac/DIABLO
Procaspasa-3
IAPs
caspasa-3
Apoptosoma
FISIOPATOLOGA DE LA
APOPTOSIS
1. Cncer
2. Infeccin por HIV
3. Enfermedades autoinmunes
4. Miscelneas
1. APOPTOSIS Y CNCER
Alteraciones en slo tres genes claves en la regulacin de la
proliferacin celular, la resistencia a la apoptosis (el primero) y
la inmortalizacin celular (reparacin de los telmeros) pueden
convertir una clula normal en una clula tumoral
Clonalidad del tumor?
La inestabilidad gentica de las clulas tumorales permite la
evolucin intratumoral el tumor est formado por una mezcla
de clulas genticamente heterogneaspermite que algunas
clulas del tumor sobrevivan a las presiones evolutivas de su
entorno, con lo que el tumor es capaz de adaptarse a las
agresiones del sistema inmune y frmacos antitumorales.
1. APOPTOSIS Y CNCER
Los tejidos de los mamferos tienen un inters
vital en eliminar clulas transformadas y
disfuncionales evolucin de distintos
programas de muerte: apoptosis, autofagia y
necrosis
La apoptosis el ms fisiolgico
Su desregulacin puede resultar en desarrollo de
cncer y en su progresin
1. APOPTOSIS Y CNCER
En la pasada dcada se han realizado avances
sustanciales en el campo de la terapia basada en la
apoptosis
Esta primera generacin intent:
Inestabilidad inherente
Carencia de especificidad
Solubilidad limitada
Baja permeabilidad celular
1. APOPTOSIS Y CNCER
Actualmente, primera generacin de pptidos
prototpicos y frmacos antisentido.
Compuestos derivados de protenas han sido
sustituidos por pequeas molculas orgnicas o
sus caractersticas peptdicas han sido
minorizadas
La terapia antisentido es altamente especfica
y se estn solventando su baja estabilidad, su
ineficiente transporte celular y sus efectos
txicosqumica de oligonucletidos mejorada
1. APOPTOSIS Y CNCER
Dianas de las terapias
1. Receptores de muerte
1. CD95-CD95L
2. TRAIL (TNF-Related Apoptosis-Inducing Ligand)
3. FLIP (FLICE-Like Inhibitory Protein)
1. Receptores de muerte.
1.1. CD95-CD95L
La muerte inducida por la sealizacin a travs de los
receptores de muerte es rapidsima (en pocas horas) y
devastadora.
Anticuerpos anti-CD95 inyectados en ratnmuerte
rpida del animal debida a toxicidad masiva en el hgado.
Similares resultados con CD95L o TNF
No se pueden usar en terapia
2. Activacin de caspasas
especficas del tumor
La activacin selectiva de caspasas es la
estrategia ms lgica para la terapia del cncer
a travs de rutas de apoptosis
Es un gran desafo. Varias opciones para activar
caspasas:
Expresin de genes de proteasas activas o inducibles
Protenas de fusin caspasa/anticuerpo
Activacin farmacolgica de caspasas mediante
frmacos pequeos permeables a la clula
2. Activacin de caspasas
especficas del tumor
hTERT/rev-caspase-6: caspasa-6 (efectora) activa bajo el control
del promotor de la telomerasa reversa humana (human telomerase
reverse transcriptase, hTERT). Transfeccin en glioma
Dado que la expresin de la telomerasa se reactiva en lesiones
cancerosas y no en tejido no transformadoafecta
especficamente a clulas del tumor
Promotor hTERT
Caspasa-6
2. Activacin de caspasas
especficas del tumor
PEA
anti-HER2
Oligonucletidos antisentido
Pptidos Smac o que le mimeticen
Actuar sobre el complejo XIAP y caspasa-3 y -7
Survivina
5. Restauracin de la funcin
supresora de tumor de p53
Aproximacin mediante terapia gnica para restaurar la
funcin de p53 utilizando adenovirus que expresan wtp53. Cncer de cabeza y cuello as como carcinoma de
ovario avanzado.
Inyeccin intratumuralpeligro. Se han diseado virus
que se replican slo en clulas sin p53 salvaje.
Combinado con quimio y radioterapia en cncer de
clulas escamosas.
Administracin sistmica se asocia con hepatotoxicidad
Apoptosis de clulas Th
Mutaciones rpidas
Emisin de antgenos seuelo
Disminucin de la expresin de molculas de
histocompatibilidad
Uso de correceptores
Destruccin de Th y CTLs
3. Apoptosis y autoinmunidad
Las enfermedades autoinmunes se producen cuando
las respuestas inmunes adaptativas (antgeno
especficas) se dirigen contra determinados antgenos
propios
La generacin de clulas memoria autorreactivas T y
B perpeta el proceso autoinmune.
Tolerancia central y perifrica
Etiologa
Desconocida. Las
enfermedades autoinmunes se
desarrollan cuando linfocitos
autorreactivos escapan de la
tolerancia y son activados.
La autoinmunidad resulta de
una combinacin de factores
genticos, factores
medioambientales adquiridos y
eventos estocsticos
Tolerancia central
Tolerancia central
Tolerancia Perifrica
Los mecanismos principales en la tolerancia
perifrica son:
Anergia
Apoptosis
Supresin por Treg
Patologas autoinmunes
La autoinmunidad resulta de una combinacin
de factores genticos, factores
medioambientales adquiridos y eventos
estocsticos
Sin embargo, existen enfermedades
denominadas simples cuya relacin entre la
variante gentica causal y el estado de la
enfermedad es determinista
Artritis reumatoide
La Artritis Reumatoide (AR) es una enfermedad inflamatoria
sistmica crnica, autoinmune, de causa desconocida,
caracterizada por sinovitis crnica erosiva, que afecta
principalmente articulaciones diartrodiales
Etiologa desconocida de la AR. Se considera una compleja
interaccin entre factores genticos, medioambientales e
inmunidad.
La AR es una de las formas ms comunes de artritis
inflamatoria, se asocia inicialmente con una caracterstica
destruccin de hueso y cartlago, pero posteriormente puede
involucrar otros rganos y presentar el paciente manifestaciones
extra-articulares.
Artritis reumatoide
Papel predominante de los linfocitos T en la patologa
de la AR
Se cree que la patologa y etiologa de la AR es debida
a una presentacin anormal de antgenos propios por
APCs y activacin de clulas T autorreactivas
La evidencia mas poderosa es la asociacin de la
enfermedad con ciertas cadenas de HLA-DR que son
compartidas por varios alelos de HLA-DR4 y HLADR1.
Artritis reumatoide
En varios modelos experimentales de AR, como la artritis
inducida por colgeno (CII), la artritis se puede transferir por
clulas T CD4+ de animales afectados o puede prevenirse por la
deplecin de clulas T especficas de CII
Ratones deficientes en CD28 presentan resistencia a AR
inducida por CII, confirmando que la activacin de clulas T es
importante en la patognesis
T CD4+ implicadas en la osteoclastognesis. IL-17RANKL
expresado por clulas T activadas y estroma que induce
diferenciacin de osteoclastosdestruccin del hueso
Esclerosis mltiple
Enfermedad desmielinizante del SNC
Respuesta inmune mediata por linfocitos T
frente a la protena bsica de mielina.
Linfocitos T activados invaden el cerebro e
inducen inflamacin local. Reclutamiento de
macrfagos, aumento de citoquinas
proinflamatorias y activacin del complemento
Esclerosis mltiple
Th1 implicados
en el inicio.
Alelos de clase II
AICD disregulada
conduce a una
apoptosis
defectuosa de
linfocitos T
autorreactivos
activados.
Incremento de
Bcl-2
Trypanosoma cruzi
Protozoo causante de la enfermedad de Chagas en humanos,
provoca en ratones infectados una inmunosupresin del
compartimento T y una inflamacin cardaca crnica similares
a las que sufren los humanos
Los linfocitos del bazo de ratones infectados mueren por
apoptosis cuando se activan in vitro. Esta induccin de
apoptosis slo afecta a los linfocitos CD4+ y no a los linfocitos
CD8+
El parsito, al eliminar a los linfocitos cooperadores interfiere
con la respuesta inmune del husped.
Apoptosis y hepatitis
La infeccin por virus C induce expresin de Fas en hepatocitos. La presencia de
antgenos virales en los hepatocitos activa a los linfocitos citotxicos (CTLs) FasL +, que
inducen la apoptosis de los hepatocitos de modo selectivo sin daar a otras clulas
prximas.
CTLs secretan citocinas con efectos leucotxicos que inducen una respuesta inflamatoria
mucho ms destructiva para el tejido en el que se encuentran las clulas infectadas.
Inflamacin aumenta la expresin de Fas en hepatocitos no infectados convirtindolos
en dianas para los CTLs.
La activacin simultnea de gran nmero de CTLs que puede desencadenar una reaccin
inflamatoria fulminante.
Enfermedades neurodegenerativas
Alzehimer
El pptido -amiloide, que se acumula progresivamente en placas en
los pacientes de enfermedad de Alzheimer, puede inhibir la recepcin
de factores trficos y, por tanto, inducir apoptosis en neuronas.
La proteasa nexina I est disminuida en el hipocampo de los pacientes
con enfermedad de Alzheimer;
Esta serpina (protenas inhibidoras de las serinproteasas) actua como un
agente neurotrfico previniendo la apoptosis y la atrofia de las
motoneuronas inducida por la axotoma.
Parkinson
La activacin de la apoptosis neuronal inducida por
dopamina podra jugar un papel importante en la
degeneracin del locus niger en la enfermedad de Parkinson.