Tinciones

Universidad Mayor de San Simn

Lic. Gabriela S. Navia Rojas

Tinciones

El proceso de tincin supone una reaccin de

intercambio de iones entre el colorante y los

sitios activos de la superficie de la clula
Es una tcnica auxiliar utilizada en microscopa

para mejorar el contraste en la imagen vista al

microscopio.

La morfologa de las bacterias se puede estudiar de 2

formas:
Sin teir (posible movilidad)
Teidos mediante colorantes (concentracin tal que

mata a las bacterias, sin movilidad), mejora la

visualizacin de la morfologa , estructura segn el
tipo de tincin la cual produce un contraste

Ventajas de la Tincin
Observar ms adecuadamente su morfologa.
Proporcionar el contraste preciso y suficiente en

cada caso, lo que permitir diferenciar distintos

tipos morfolgicos.
Establecer una informacin complementaria
sobre sus estructuras internas y/o externas que
no podran ser observadas por examen en fresco.
Conocer sus caractersticas tintoriales
orientndonos hacia un grupo taxonmico u otro
en la clasificacin bacteriana

FACTORES QUE AFECTAN A TODA TCNICA

DE TINCIN

Las tcnicas de coloracin constituyen una

prctica diaria en el laboratorio de

microbiologa por los cuales se deber
considerar una serie de factores que puedan
alteras los resultados de los mismos. As pues
los principales factores son:

Pureza de un colorante: > grado de impureza,> error, <

calidad de tincin
Concentracin del colorante.- a mayor concentracin mayor error
en la tincin; igual que a menor concentracin.
El pH del colorante.- este es un factor fundamental ya que depende
de las estructuras que se desee observar para elegir el pH adecuado.
Conservacin del colorante.- se debe conservarse en lugTcnica
Empleada.- se deber seguir rigurosamente paso a paso cada tcnica
de tincin.
Temperatura.- en la mayora de los casos se utiliza la temperatura
ambiental pero si existen algunas tcnicas que requieran de
temperatura adecuada.
Cantidad de la muestra.- Deber ser representativa y homognea
pero no muy grande.
Realizar correctamente el frotis.- se debe fijarse bien para que cuando
se les aada los colorantes mordientes y decolorantes no arrastren a
los microorganismos que se desee observar.
ares frescos, secos, y obscuros; envasados y etiquetados.

Soluciones mordientes.- en ciertos casos son

necesarios ya que actan como fijadores y

ayudan a la fijacin del colorante a las
correspondientes estructuras.
Tiempos de Tincin.- es necesario que todas
las sustancias se mantengan en la
preparacin un tiempo preciso y variable
segn la tincin.

Clasificacin de los colorantes

Naturales: extrado de plantas (azul de

indigo de leguminosas), animales (colchicina

el carmn)
Artificiales: son preparados artificiales

obtenidos en su mayor parte de alquitrn de

hulla; se distinguen colorantes cidos
(contraste) y bsicos (primarios), pueden
presentarse formando sales, as como
colorantes neutros. Por ejemplo el cristal
violeta, violeta de genciana, fucsina bsica,
azul de metileno.

Segn su comportamiento quimico

Acidos o amonicos (contraste): la carga del radical colorante

es negativa, colorantes citoplasmticos, ya que los citoplasmas

de las clulas se consideran bsicos, captando muy bien los
colorantes cidos. Por ejemplo, las eosinas, las auraminas, etc.
Colorantes bsicos o catinicos (primarios): Correspondern
a colorantes que tien estructuras de carcter nuclear o similares
que son acidas o ligeramente acidas, es decir, cargadas
negativamente. Por ejemplo la fucsina bsica, cristal violeta o
violeta de genciana, as, azul de metileno.
Colorantes neutros: es una sal compuesta de un colorante
cido y un colorante bsico como, por ejemplo, el azul de
metileno que en general posee las propiedades de colorantes
cidos y bsicos. Colorantes indiferentes: son colorantes
insolubles en agua y solubles en alcohol donde no predomina ni
la carga positiva ni la carga negativa pero tampoco un carcter
neutro; son los colorantes de los lpidos, por Negro Sudn

Acidos o amonicos (contraste): la carga del radical colorante

es negativa, colorantes citoplasmticos, ya que los

citoplasmas de las clulas se consideran bsicos, captando
muy bien los colorantes cidos. Por ejemplo, las eosinas, las
auraminas, etc.
Colorantes bsicos o catinicos (primarios): Correspondern
a colorantes que tien estructuras de carcter nuclear o
similar que son acidas o ligeramente acidas, es decir,
cargadas negativamente. Por ejemplo la fucsina bsica,
cristal violeta o violeta de genciana, as, azul de metileno.
Colorantes neutros: es una sal compuesta de un colorante
cido y un colorante bsico como, por ejemplo, el azul de
metileno que en general posee las propiedades de colorantes
cidos y bsicos.
Colorantes indiferentes: son colorantes insolubles en agua y
solubles en alcohol donde no predomina ni la carga positiva
ni la carga negativa pero tampoco un carcter neutro; son
los colorantes de los lpidos, por Negro Sudn

Fundamento:

Consiste en poner en un portaobjetos, a

travs de un asa de siembra, una cantidad de

microorganismo problema suspendido en
medio lquido estril, extendindolo
adecuadamente hasta formar una fina pelcula
homognea que, posteriormente, se fijar
generalmente con calor cuando sea requerido,
segn el mtodo de tincin que se utilizar
posteriormente.

Frotis
Se realiza el extendido a partir de productos o

medios lquidos con el asa de siembra,

extendindolo lo ms fina y homogneamente
posible
Se dejar secar por s solo (Frotis)
Se realiza la fijacin mediante el flameado de
la preparacin con calor.
En algunos casos la fijacin se podra hacer
con alcohol.

Tinciones
Tipos de Tinciones
Simples (para visualizar morfologa bacteriana)
Negativa (para observar caractersticas
estructurales adems de morfologcas)
Diferencial (morfologa y otras caractersticas
como composicin de pared)
Estructurales (presencia de esporas flagelos,
cilios capsula)

En Gram (+) son decolorizadas, el etanol

contrae a los poros del peptidoglucano, el

complejo tincin yodo es retenido durante el
paso de la decoloracin y la bacteria
permanece prpura.
En Gram (-) el peptidoglucano es muy fino si

entrecruzamientos y con poros grandes, en el

tratamiento con alcohol se extrae suficiente
lpido de la pared incrementado su porosidad,
el complejo cristal yodo es removido
rpidamente de la bacteria y se tie de rojo
con la safranina.

GRACIAS
..