Cromatografia, Fundamentos

CROMATOGRAFA
Introduccin
La cromatografa es una tcnica de
separacin basada en la diferente velocidad
con que se mueven los solutos a travs de
un medio estacionario mediante el flujo de
un disolvente o eluente.
CROMATOGRAFA
Introduccin
La cromatografa es un mtodo fsico de
separacin en el cual los componentes a
separar se distribuyen entre dos fases, una
de las cuales constituye
la fase
estacionaria, de gran rea superficial, y la
otra es un fluido, fase mvil, que pasa a
travs de la fase estacionaria.
CROMATOGRAFA
Introduccin
La cromatografa se origin alrededor de
1850, cuando F.F. Runge, qumico alemn
describe el proceso de separacin de
colorantes
por
un
procedimiento
cromatogrfico en papel.
CROMATOGRAFA
Introduccin
Corresponde a Mijail Tswett, botnico
ruso, quien entre 1903 y 1910,
establece
las
ventajas
de
la
cromatografa y adopta parcialmente la
terminologa, sustentando las bases de
los
principales
procedimientos
experimentales relativos a esta tcnica
CROMATOGRAFA
Introduccin
Tswett logr la separacin de los
pigmentos de las hojas verdes en una
columna de sulfato clcico, dndole el
nombre
a
esta
tcnica
de
Cromatografa, chroma = color y
graphos = escritura.
CROMATOGRAFA
Introduccin
A pesar de que la cromatografa permita
simplificar la separacin de sustancias de
mezclas complejas, no fue hasta fines de la
dcada de los treinta y principio de los
cuarenta cuando se empez a desarrollar
esta tcnica, encontrndose mltiples
aplicaciones.
CROMATOGRAFA
Introduccin
Las nicas sustancias que no pueden
separarse por cromatografa son las
insolubles y aquellas que se
descomponen con el solvente o con la
fase estacionaria.
CROMATOGRAFA
Introduccin
Todo esto llevo a que en 1952, A. J. P.
Martin y R. L. M. Synge recibieran el
premio Nobel por sus trabajos en
cromatografa.
Adems, se otorgaron ms de una decena de
premios Nobel a trabajos basados en datos
cromatogrficos.
CROMATOGRAFA
Introduccin
La cromatografa como tcnica de anlisis puede
compararse con tcnicas instrumentales como
E.A.M. IR, E de Masa u otra similar; siendo todas
tcnicas de identificacin, mientras que la
cromatografa es a la vez tcnica de separacin y de
identificacin.
Durante los ltimos aos la cromatografa ha
permitido el desarrollo de los ms efectivos
mtodos de anlisis qumicos.
Cromatografa
Tcnica de separacin cromatogrfica:
Permite separar componentes estrechamente
relacionados en mezclas complejas
La muestra que se desea separar, se disuelve en la
fase mvil, que normalmente puede ser un gas,
lquido o fluido supercrtico.
La fase mvil se hace pasar a travs de una fase
estacionaria, inmiscible, la cual se mantiene fija en
una columna o en una superficie slida que acta
como soporte.
Separacin cromatogrfica
Las dos fases se eligen de tal forma que los
componentes de la muestra, se distribuyan de
forma distinta entre ambas.
Aquellos componentes que son fuertemente
retenidos por la fase estacionaria, se mueven
lentamente con el flujo debido a la fase mvil.
Aquellos componentes de la muestra que tienen
una reducida afinidad por la fase estacionaria se
desplazan con una mayor rapidez al ser
arrastrados por la fase mvil.
Como diferencia en la movilidad, las
distintas sustancias que componen la
muestra sometida a la cromatografa, se
separan en una serie de bandas que pueden
ser
analizadas
cualitativamente
o
cuantitativamente.
Fortalezas analticas de las tcnicas
cromatogrficas:
separar componentes en muestras complejas
separar varios componentes en un mismo
sistema cromatogrfico
separar componentes de una misma especie:
vitaminas complejo B, alcoholes, etc.
Concentrar solutos
Purificar solutos
Ventajas
Rapidez
Simplicidad
Costo moderado
Gran aplicacin como mtodo de separacin
Ampliacin para anlisis cualitativos y
cuantitativos con slo acondicionar un detector.
Objetivo Cualitativo de la
Cromatografa
Se utiliza para detectar la presencia y la
ausencia de determinados componentes
en mezclas con un nmero limitado de
componentes conocidos.
Objetivo Cualitativo de la
Cromatografa
La identificacin de los componentes de la
muestra se realiza por comparacin de los
tiempos que demoran en aparecer los pic en
el cromatograma, y los tiempos que demora
el mismo componente en un patrn de
referencia sometido al mismo sistema
cromatogrfico
Objetivo Cuantitativo de la
Cromatografa
Si se someten a una separacin
cromatogrfica tanto la muestra como
sustancias
patrones,
manteniendo
constante
los
parmetros
cromatogrficos, flujos fase mvil,
temperatura, columna, matriz, etc. se
observa:
Cromatografa
que la altura o el rea de los pic
vara
linealmente
con
la
concentracin
Cromatografa
Los componentes de la muestra pueden
ser
cuantificados
mediante
la
comparacin de la altura o el rea de
los pic obtenidos en el cromatograma,
con las alturas o las reas de los pic de
determinados patrones sometidos al
mismo sistema cromatogrfico.
Clasificacin General de las

Tcnicas cromatogrficas
Criterios de clasificacin:
Forma en que la fase mvil y la estacionaria se
ponen en contacto.
Referencia a la naturaleza de la fase mvil y de
la estacionaria
referencia al tipo o mecanismo de separacin o
interaccin establecida entre las sustancias que
se desean separar y la fase estacionaria
Clasificacin de la Cromatografa
Contacto entre fases:

cromatografa plana
cromatografa en columna
Cromatografa plana
La fase estacionaria se mantiene sobre una
placa lisa o impregnada en un soporte plano
de papel, la fase mvil se desplaza a travs
de ella por capilaridad o por gravedad.
Cromatografa en columna
La fase estacionaria se encuentra en el interior
de un cilindro de vidrio, normalmente de
dimetro pequeo, a travs del cual se hace
pasar la fase mvil mediante presin o
simplemente por accin de la gravedad
Clasificacin Cromatogrfica
Aunque ambos tipos de cromatografas
tienen su propia identidad, los procesos
fsico-qumicos en los que se basan son
idnticos, y por lo tanto lo analizado para
un tipo de cromatografa puede ser
fcilmente adaptado a la otra.
Clasificacin Cromatogrfica:
Segn mecanismo de interaccin entre
soluto y las fases, mvil y estacionaria
Cromatografa de reparto
Cromatografa de adsorcin
Cromatografa de exclusin o
penetrabilidad
Cromatografa de intercambio inico
Cromatografa de afinidad
La separacin de una mezcla de solutos es
funcin de la distribucin de las molculas
de stos entre una fase estacionaria lquida,
soportada sobre un slido y una fase mvil
o eluente del sistema.
La fase mvil puede ser un lquido,
cromatografa lquido-lquido o un gas, en
este caso ser cromatografa gas-lquido.
Si un soluto A se disuelve en dos disolventes B y C,
la distribucin entre ellos viene dada por el
siguiente coeficiente:
Coeficiente de Reparto=
Concentracin de A en B
Concentracin de A en C
El coeficiente de Reparto es constante a la
temperatura a la que se le determina.
Puede realizarse en:
papel
superficies polares no inicas como capa fina
columna
La cromatografa de reparto puede

subdividirse en :
lquido-lquido, ej. Crom.en papel.
fases qumicamente unidas
gas-lquido
En la cromatografa de reparto se utilizan
mayoritariamente columnas con fases unidas
qumicamente.
La mayora de estos rellenos se preparan con
una base rgida
de slice, de partculas
resistentes, porosas y uniformes, de 3, 5 o 10
m de dimetro.
La superficie de la slice esta recubierta con
una fase enlazada de grupos silanoles, Si - OH,
qumicamente reactivos.
Fases qumicamente unidas
Partculas de silicagel
POROS
Fases qumicamente unidas
Las superficies de slice contienen
cerca de 8 mol/m2 de grupos SiOH
OH
OH
O
Si
OH
O
Si
OH
O
Si
Si
La silicagel es fuertemente higroscpica y
el agua fijada por puentes de hidrgeno a
los silanoles es responsable de su bloqueo
y prdida de actividad.
El agua adsorbida es desorbida por
tratamiento trmico a 125 - 175C, pero a
temperaturas superiores a 200C se pierde
agua por condensacin de los grupos
silanoles con formacin de puentes
siloxanos estables, produciendo una slica
hidrfoba e inactiva.
Cromatografa de reparto: Rf
Rf es el cuociente entre la distancia
recorrida por un soluto y la distancia
recorrida por el frente cromatogrfico.
Es caracterstico para cada sustancia o
soluto y vara con:
temperatura
pH del medio
cantidad de sustancia aplicada, etc.
Cromatografa de Adsorcin
Esta tcnica cromatogrfica se
realiza en columna, rellena con un
adsorbente.
Los solutos o sustancias a separar se
colocan en la parte superior de la
columna.
Cromatografa de Adsorcin
Distintos solventes van pasando a lo
largo de la columna, separando los
diferentes componentes de la
muestra, debido a la distinta
solubilidad de cada uno de ellos en el
lquido disolvente.
Tras pasar por la columna cada
componente va a salir en tiempos
diferentes, pudiendo ser separados.
Una vez separados se puede proceder a
cuantificar las diferentes fracciones.
Adsorbentes ms utilizados:
Almina
Slice
Carbonato de Calcio
Disolventes ms utilizados:
ter de petrleo
ter etlico
Metanol
-
- Tetracloruro de Carbono
Acetona
Benceno
Etanol
Agua
Cromatografa de Intercambio
Inico
Est basada en las interacciones
electrostticas entre grupos ionizables
de la sustancia a separar y los grupos
cargados unidos a un soporte inerte.
Cromatografa de Intercambio
Inico
Cambiadores Inicos:
son sustancias insolubles que
contienen grupos cargados unidos
covalentemente a iones mviles de
signo contrario que neutralizan los
grupos fijos.
Cromatografa :
Clasificacin segn naturaleza fase mvil
Cromatografa de lquidos
Cromatografa de gases
Cromatografa de fluidos supercrticos
tcnica hbrida de las dos anteriores.
Cromatografa
de
Lquidos:
LC
Tcnica: Cromatografa de LQUIDOS
Mtodo: Lquido-Lquido
Mecanismo: Reparto
Fase Mvil: Lquido
Fase estacionaria: Lquido adsorbido sobre un slido
Equilibrio establecido durante el proceso: Distribucin
entre lquidos inmiscibles.
Observaciones: Puede realizarse indistintamente, en
columna o sobre superficies planas
Cromatografa
de
Lquidos:
LC
Mtodo: Lquido-Slido
Mecanismo: Adsorcin
Fase Mvil: Lquido
Fase estacionaria: Slido
Equilibrio establecido durante el proceso: Adsorcin
columna o sobre superficies planas
Cromatografa
de
Lquidos:
LC
Mtodo: Intercambio Inico

Mecanismo: intercambio inico
Fase Mvil: Lquido
Fase estacionaria: Resina de intercambio inico
Equilibrio establecido durante el proceso: Intercambio
inico
columna o sobre superficies planas.
Cromatografa
de
Lquidos:
LC
Mtodo: Exclusin por tamao

Mecanismo: exclusin por tamao
Fase Mvil: Lquido
Fase estacionaria: Lquido en los intersticios de un slido
polimrico
Equilibrio establecido durante el proceso:
Distribucin/exclusin
columna o sobre superficies planas.
Cromatografa
de
Gases:
GC
Tcnica: Cromatografa de GASES
Mtodo: Gas-Lquido
Mecanismo: Reparto
Fase Mvil: Gas
Fase estacionaria: Lquido adsorbido sobre un slido
entre un gas y un lquido
Observaciones: Puede realizarse nicamente en
columna.
Cromatografa
de
Gases:
GC
Mtodo: Gas-Fase enlazada

Mecanismo: Reparto
Fase Mvil: Gas
Fase estacionaria: Especies orgnicas enlazadas a una
superficie slida
entre un gas y una fase enlazada
Observaciones: Puede realizarse nicamente en columna.
Cromatografa
de
Gases:
GC
Mtodo: Gas-Slido
Mecanismo: Adsorcin
Fase Mvil: Gas
Fase estacionaria: Slido
Equilibrio establecido durante el proceso: Adsorcin
columna.
Cromatografa de
Fluidos
SFC
Fase Mvil:Supercrticos:
Fluido supercrtico
Fase estacionaria: Especies orgnicas enlazadas a una
superficie slida
entre un fluido supercrtico y una superficie enlazada.
columna.
Cromatografa de
Tcnica hbrida entre la cromatografa de gases y la de
Fluidos
Supercrticos:
SFC caractersticas de
lquidos, combina
alguna de las mejores
ambas.
En una cromatografa en columna.
Su importancia radica en poder separar y determinar
compuestos que no pueden ser analizados por GC ni por
LC:
Compuestos no voltiles a los que no se le puede aplicar la
GC
Compuestos que no poseen grupos funcionales que hagan
posible aplicar la LC
Cromatografa de
Fluidos Supercrticos: SFC
Los fluidos supercrticos tienen

densidades, viscosidades y otras
propiedades que son intermedias entre
las de una sustancia en estado gaseoso
y en estado lquido.
Separaciones Cromatogrficas
Cromatografa de Elucin en Columnas
Tipos de columnas segn material de
fabricacin:
Metlicas: Cu, Al, Acero inoxidable
Vidrio
Polimricas: tefln
Uso de las columnas:
Empacadas
Separaciones Analticas
Separaciones Preparativas
Capilares
Fase lquida enlazada a un soporte slido
Fase soportada o adsorbida sobre un slido
Elucin: Transporte de una especie a travs
de una columna por una fase mvil
adicionada en forma continua.
Eluente: fase mvil en incrementos
continuos.
Eluato: Soluto eluido desde la columna por
la fase mvil.
Fase mvil:
gas
lquido
En los dos casos, los componentes de la
muestra son extrados de la columna por la
fase mvil.
Al eluir de la columna las sustancias

atraviesan un detector que origina
una seal proporcional a la
concentracin o a la cantidad de
sustancia presente en la fase mvil.

CROMATOGRAMA:
Representacin
de
la
seal
proporcionada por el eluato en funcin
del tiempo.

Es un proceso de migracin diferencial,
Con una dispersin de las sustancias al
interior de la columna,
Distribucin gaussiana,
Variancia de la distribucin es
proporcional a la distancia de migracin y
al tiempo empleado en recorrerla.
Migracin de la muestra y separacin de sus componentes

Muestra A+B
Detector
A
Perfiles de concentracin de las bandas cromatogrficas A

y B en diferentes puntos durante su migracin a travs de
la columna
C
AB
Distancia de migracin, L
Cromatograma
tR
S
mV
tM
w
Tiempo, min
Cromatograma
tR
Seal
tm
tR
Tiempo, min
VELOCIDAD DE MIGRACIN DE LAS ESPECIES
La velocidad con que eluyen las especies en un

sistema cromatogrfico depende de las constantes
de distribucin de las especies entre las fases
estacionaria y mvil:
En el equilibrio, la distribucin viene definida por la
Constante de Distribucin K.
CS
K =
CM
El tiempo que transcurre despus de la

inyeccin de la muestra hasta que el pic
alcance el detector es el Tiempo de
Retencin tR
El tiempo que demora una especie no
retenida en alcanzar el detector corresponde
a tM o tiempo muerto
El volumen de fase mvil necesario para

transportar la banda de soluto se conoce como
Volumen de Retencin VR
VR = t R F C
El volumen de fase mvil necesario para

transportar un soluto no retenido se conoce
como Volumen de retraso o vaco VM
VM = t M FC
El volumen de Retencin viene dado por:

VR = t R FC
FC gasto o flujo volumtrico
Corresponde al volumen de fase mvil por
unidad de tiempo.
Depende de:
dimetro columna, porosidad fase estacionaria,
longitud de la columna,velocidad media de la fase
mvil.
VR = VR - VM
tR =
tR - t M
La relacin entre el reparto de las

especies en las fases cromatogrficas y
sus velocidades de migracin viene dada
por el factor de capacidad k
Para un soluto A, el factor de capacidad es:
K AVS
k'
VM
La velocidad lineal media de la migracin

del analito viene dada por:
L
v =
tR
L = long. relleno columna
La velocidad lineal media del movimiento

de las molculas de la fase mvil viene dada
por:
L
u =
tM
L = longitud relleno columna
Relacin entre tR y k
La velocidad lineal media del analito se
expresa como una fraccin de la velocidad
de la fase mvil:
v = u
x fraccin de tiempo que el analito
permanece en la fase mvil

fraccin de tiempo que el analito
nmero de moles del analito en la FM
=
permanece en la fase mvil
moles totales del analito
C M VM
vu
C M VM C SVS
1
vu
C SVS
1
C M VM
1
v = u
1+ K
VS
VM
v = u
1
x
VS
1 + K ---------VM
VS
k = K ---------VM
k factor de capacidad o de reparto
v = u
x -------------
1 + kA
L
tR
tM
------ = ------- x -------------
1 + kA
tR - tM
kA = ----------tM
kA >
10
prdida de tiempo
kA <
baja resolucin
1 < kA < 5
Factor de Selectividad
Es el factor que relaciona la retencin relativa de dos
solutos, A y B, en una columna.
KB
KA
A eluye antes que B

B es retenido ms fuertemente que A
siempre es mayor que 1
Factor de Selectividad
k ' B V ' RB t ' RB

k ' A V ' RA t ' RA
depende de :
naturaleza de las fases
Temperatura de operacin de la columna
Proceso cromatogrfico
El proceso cromatogrfico es simple en la
prctica y complejo en su mecanismo:
Compromete mecanismos:
Hidrodinmicos
Cinticos
Termodinmicos
Qumicos de superficie
Fenmenos de difusin
Teoras:
Platos Tericos: Martin y Synge
Cintica: Van Deemter
Teora para columnas capilares: Golay
Teora de los Platos Tericos: Martin y
Synge
La columna cromatogrfica est
constituida por una serie de platos
contenidos en la fase estacionaria.
Teora de los Platos Tericos: Martin y Synge
Supone que:
el volumen de fase estacionaria en cada plato es
constante;
que el volumen de fase mvil es constante de
plato a plato;
que en cada plato las dos fases estn en
equilibrio, y
que el Coeficiente de Distribucin es constante e
independiente de la concentracin del soluto
Synge
tR
N 16
Synge
No considera:
Relacin entre eficiencia columna y el
tamao de la partcula, la difusin de los
solutos, la velocidad de flujo y la
temperatura
Teora Cintica o de la velocidad de la cromatografa
Explica en trminos cuantitativos las formas de los
pic y los efectos de las distintas variables sobre la
anchura de estos pic
Considera el proceso cromatogrfico en funcin de
los factores cinticos que intervienen en l
Trayectorias que el soluto toma durante su migracin a
travs de la columna, que generan cambios en la velocidad
de flujo
Difusin axial o Longitudinal del soluto en la fase mvil
Cintica en la transferencia de masa entre la fase mvil y la
estacionaria, resistencia.
Teora Cintica
Ecuacin de Van Deemter
B
HETP(H) A
Cu
u
u
L (cm)
t R aire
(seg)
Ecuacin de Van Deemter
A B C = Coeficientes de difusin aparente
Longitudinal, transferencia de masa
H = altura efectiva de la banda cromatogrfica

u = velocidad lineal de la fase mvil
Forma de los pic cromatogrficos

De forma gaussiana: que, como
consecuencia de las incertidumbres de las

medidas, se obtiene una distribucin
simtrica de los datos alrededor de la media,
en forma similar, la forma gaussiana de una
banda cromatogrfica se puede atribuir a la
combinacin aditiva de los movimientos
aleatorios de las numerosas molculas de
soluto en la banda cromatogrfica.

Comportamiento de una molcula de soluto
Experimenta miles de transferencias entre la fase
estacionaria y la fase mvil
El tiempo de permanencia en cada una de las fases
depende del tiempo en que ocurren cada una de estas
transferencias,
La variabilidad promedio de la velocidad con que se
mueven cada una de estas partculas en la fase mvil es
muy irregular

Comportamiento de una molcula de
soluto
Como consecuencia, la migracin de las
partculas a travs de la columna es muy
irregular, y su consecuencia es una dispersin
simtrica de las velocidades alrededor del valor
medio. Comportamiento ms frecuente de las
partculas.

soluto
La anchura de la banda aumenta a medida que
se mueve a travs de la columna.
mientras ms tiempo transcurre mayor es la
dispersin que puede tener lugar

soluto
La anchura de la banda est directamente
relacionada con el tiempo de residencia en la
columna, e inversamente con la velocidad a
la que fluye la fase mvil.
Eficiencia de la Columna
Se mide, generalmente por:

1. La altura de plato H
2. Nmero de Platos Tericos N
Que estn relacionados por la

ecuacin: N = L / H
La altura de un plato terico:

1. H en funcin de la varianza 2
Que estn relacionados por la

ecuacin: H = 2 / L
Banda cromatogrfica ideal: Forma de
campana de Gauss
1.0
0.5
0.0
L
tR
N. = ------ = ------
H
= ----4
L = long. Columna
H = altura plato
= Varianza
tR 2
N = 16 -------W
tR
N .= 5.54 ------W
tR
N = 16 -------W
Para W
8 ln 2
L
H = ------N
Ensanchamiento de las bandas:
Es consecuencia de las distintas velocidades
con que ocurren los distintos procesos de
transferencia de masa durante la migracin
de una especie a lo largo de la columna.
Factores que contribuyen al ensanchamiento de los
pic.
Las miles de transferencias entre la fase estacionaria y
la fase mvil.
La energa que requieren las molculas para
transferirse de una fase a otra
tiempo de permanencia irregular de las molculas en
cada una de las fases
El movimiento descendente de las molculas slo
ocurre cuando stas estn en la fase mvil.
Factores que contribuyen al ensanchamiento de los

pic:
difusin de las molculas desde zonas de mayor
concentracin a zonas de menor concentracin.
Las distintas trayectorias que sigue la fase mvil,
longitudes diferentes.
Movimiento propio de expansin de las molculas al
descender por la columna
Efecto de la velocidad lineal de flujo de

la fase mvil sobre H
Cromatografa de lquido
Cromatografa de gases
Caminos seguidos por dos molculas

durante la elucin
Variables que influyen en la altura de plato
y por tanto en la eficacia de la columna:
velocidad lineal de la fase mvil

coeficiente de difusin en la fase mvil
coeficiente de difusin en la fase estacionaria
factor de capacidad
dimetro de las partculas de relleno
grosor del recubrimiento lquido en la fase
estacionaria.
Grfica Van Deemter para columna rellena con fase

estacionaria Lquida.
Los puntos corresponden a valores
experimentales
A: Trmino del camino mltiple
B/u: difusin longitudinal
Cu : transferencia de masa para
ambas fases
Efecto del tamao de partcula en la

altura del plato
Dimetro de la partcula, mm
Mayor eficiencia si:
< H
>N
Resolucin de la Columna
Es el grado de separacin de dos bandas
adyacentes.
La resolucin se define como la distancia
entre los pic de las bandas dividida por el
ancho promedio de las bandas.
Si se mide en unidades de tiempo, tenemos:
tR2 - tR1
RS = -----------------0,5 ( W2 + W1 )
N
RS
4
k 'B
1 k 'B

N 16 R
1
2
S
1 k 'B
k 'b
Resolucin de la columna
Influencia del factor de retencin en la Resolucin y en el tiempo de elucin.
La resolucin mnima para separar

dos componentes es de 1,5
Para mejorar la Resolucin de la
columna es aumentando N
Puede aumentarse por un aumento
del largo de la columna,
Y tambin por disminucin de H
Disminuyendo H
Disminucin del tamao de la partcula de
relleno
Reduciendo la viscosidad del disolvente
en fases mvil lquida
Variando k
En LC se realiza la elucin en gradiente o
programacin del disolvente
En GC se programa la temperatura para
conseguir las condiciones ptimas
Las muestras difieren en sus coeficientes

de distribucin y por tanto en sus factores
de retencin.
a)k para componentes 1 y 2 est entre
25
b)k para los componentes 5 y 6 est en
valores ptimos
c)k para los componentes 3 y 4 est en
valores ptimos
Para solucionar este problema se deben

cambiar las condiciones que determinan k
durante la determinacin
Primero: dar las condiciones para elucin
de componentes 1 y 2
Segundo: cambiar las condiciones de
acuerdo con el cromatograma c) para
elucin de 3 y 4
Tercero: cambiar las condiciones segn
cromatograma b) para los componentes 5 y 6
Parmetros cromatogrficos experimentales de inters
Ecuaciones y parmetros de inters
Ejercicio
Resolucin
N promedio
d) Longitud de la columna para una Resolucin 1,5

Como k y no cambian al aumentar N y L, se obtiene:
Los subndices 1 y 2 se refieren a la columna original y a

la ms larga, sustituyendo:
e) Tiempo de retencin para que B eluya en la columna ms larga
Para obtener una Resolucin 1,5 es necesario doblar

el tiempo de retencin
f) La altura de plato para obtener una Resolucin de 1,5 en la

columna original y con los mismos tiempos
Sustituyendo H1 y H1 en la ecuacin
y dividiendo la primera por la segunda ecuacin, se tiene:
Reordenando
Para obtener una resolucin de 1,5 en 17,63 min en una

Columna de 30,0 cm, la altura del plato tendra que
reducirse a la mitad
Para una muestra que contiene solamente los cuatro alcoholes,

Calcular el % en peso de los alcoholes, si el cromatograma
proporciona los siguientes datos:
Calcular
a) El nmero de platos para cada pico
b) La media y la desviacin estndar de N
c) La altura de plato de la columna
Calcular para los picos A, B, C y D

a) El factor de retencin
b) El coeficiente de distribucin
Para las especies B y C, calcular
a) La resolucin
b) El factor de selectividad
c) La longitud de la columna para tener una resolucin de 1,5
d) El tiempo necesario para separar B y C con una resolucin de 1,5
Para las especies C y D, calcular:
a) La resolucin
b) La longitud de la columna necesaria para tener una resolucin 1,5

Cromatografia, Fundamentos

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CROMATOGRAFA

Clasificacin General de las

Contacto entre fases:

La cromatografa de reparto puede

Mtodo: Intercambio Inico

Mtodo: Exclusin por tamao

Mtodo: Gas-Fase enlazada

Los fluidos supercrticos tienen

Cromatografa de Elucin en Columnas

Cromatografa de Elucin en Columnas

Al eluir de la columna las sustancias

Cromatografa de Elucin en Columnas

Cromatografa de Elucin en Columnas

Migracin de la muestra y separacin de sus componentes

Perfiles de concentracin de las bandas cromatogrficas A

VELOCIDAD DE MIGRACIN DE LAS ESPECIES

La velocidad con que eluyen las especies en un

VELOCIDAD DE MIGRACIN DE LAS ESPECIES

El tiempo que transcurre despus de la

VELOCIDAD DE MIGRACIN DE LAS ESPECIES

El volumen de fase mvil necesario para

El volumen de fase mvil necesario para

VELOCIDAD DE MIGRACIN DE LAS ESPECIES

El volumen de Retencin viene dado por:

VELOCIDAD DE MIGRACIN DE LAS ESPECIES

VELOCIDAD DE MIGRACIN DE LAS ESPECIES

La relacin entre el reparto de las

VELOCIDAD DE MIGRACIN DE LAS ESPECIES

La velocidad lineal media de la migracin

L = long. relleno columna

VELOCIDAD DE MIGRACIN DE LAS ESPECIES

La velocidad lineal media del movimiento

L = longitud relleno columna

x fraccin de tiempo que el analito

permanece en la fase mvil

k factor de capacidad o de reparto

------ = ------- x -------------

A eluye antes que B

k ' B V ' RB t ' RB

H = altura efectiva de la banda cromatogrfica

Forma de los pic cromatogrficos

consecuencia de las incertidumbres de las

Forma de los pic cromatogrficos

Forma de los pic cromatogrficos

Forma de los pic cromatogrficos

Forma de los pic cromatogrficos

Se mide, generalmente por:

Que estn relacionados por la

La altura de un plato terico:

Que estn relacionados por la

Factores que contribuyen al ensanchamiento de los

Efecto de la velocidad lineal de flujo de

Caminos seguidos por dos molculas

velocidad lineal de la fase mvil

Grfica Van Deemter para columna rellena con fase

Efecto del tamao de partcula en la

Influencia del factor de retencin en la Resolucin y en el tiempo de elucin.

La resolucin mnima para separar

Las muestras difieren en sus coeficientes

Para solucionar este problema se deben

Parmetros cromatogrficos experimentales de inters

Ecuaciones y parmetros de inters

d) Longitud de la columna para una Resolucin 1,5